【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，具体为一种小球藻降血压肽及其组合物、制备方法与应用。
技术介绍
1、高血压是以血压升高为主要特点的全身性疾病。高血压的诊断标准：在未使用降药物的情况下，非同日3次测量诊室血压次测量诊室血压，收缩压(sbp)≥140mmhg和(或)舒张压(dbp)≥90mmhg。目前我国居民高血压患病率总体呈上升趋势，其中18岁以上成年人高血压粗患病率约为27.9％，估计成人高血压患病人数约为2.45亿。未经治疗的高血压最终会导致中风、心脏衰竭、肾损伤等疾病，严重时可致人死亡。因此对于有效的高血压治疗药物及保健食品的开发依然具有巨大前景。
2、在血压调节过程中，肾素-血管紧张素-醛固酮系统(raas)起到了至关重要的作用。在raas中，血管紧张素i转化酶一方面可催化血管紧张素i降解成为血管紧张素ii，另一方面可以催化缓激肽的降解。血管紧张素ii通过与血管紧张素ii一型受体结合引起血管收缩和水-钠重吸收进而引起血压升高。同时缓激肽水平的升高也可以起到降低血压的作用。因此，ace抑制剂类药物始终是治疗高血压的一线药物。但由于现有ace抑制剂具有一系列的副作用，如干咳、皮疹、低钾血症等，开发更加高效且安全的ace抑制剂类化合物依然是研究热点。
3、小球藻是一种单细胞绿藻，富含蛋白质、脂质、矿物质、维生素和抗氧化物质(维生素c，叶黄素，类胡萝卜素)等。小球藻蛋白含量很高，可占干重的50％以上，显著高于牛奶、大豆蛋白。已有研究表明，服用小球藻具有降血压、抗炎、降血糖、降血脂和抗氧化等生物活性。食源蛋白质经过酶
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种小球藻降血压肽及其组合物、及其制备方法；本专利技术的另一目的是提供该小球藻降血压肽及其组合物在食品、药品或保健品中的应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、本专利技术提供了一种小球藻酶解肽提取物，其特征在于：所述提取物中平均分子量低于2000da的酶解肽占比不低于80％，且包含lkkap、pglrp、atkfp、vaspk、kvlp、vaigqk、igrkfs、vgagah、saktrae中的一种或多种肽序列。
4、本专利技术还提供了一种小球藻血管紧张素转化酶(ace)抑制寡肽，其特征在于：所述寡肽为lkkap、pglrp、atkfp、vaspk、kvlp、vaigqk、igrkfs、vgagah中的一种或多种。
5、此外，本专利技术还提供了一种小球藻降血压肽或组合物，其特征在于包括上述小球藻酶解肽提取物、或小球藻血管紧张素转化酶(ace)抑制寡肽中的任一种或多种寡肽、或一种小球藻酶解肽提取物与小球藻血管紧张素转化酶(ace)抑制寡肽中任一种或多种寡肽组成的组合物。
6、进一步的，本专利技术还提供了一种小球藻食品，其特征在于：所述小球藻食品含有一种小球藻酶解肽提取物或小球藻血管紧张素转化酶(ace)抑制寡肽或任一种小球藻酶解肽序列或组合物。
7、小球藻降血压肽的应用，其特征在于：所述酶解肽提取物、或ace抑制寡肽、或其组合物在制备血管紧张素转化酶抑制剂、或高血压、心血管疾病的预防或治疗相关的保健品或药物制剂中的用途。
8、所述的一种血管紧张素转化酶抑制剂、或高血压、心血管疾病的预防或治疗相关的保健品或药物制剂，其特征在于：所述的提取物、或任一种或多种小球藻降压肽、或组合物配以任何符合食品或药品生产允许的辅料制成。
9、进一步的，本专利技术提供了一种制备小球藻酶解肽提取物的方法，其特征在于：以小球藻为原料，对其进行破壁、蛋白酶酶解、灭酶、离心获得小球藻酶解物上清液；所得酶解物上清液经纯化和/或干燥后获得小球藻酶解肽提取物。所述蛋白酶为胰蛋白酶、碱性蛋白酶、糜蛋白酶、中性蛋白酶中的任一种。
10、优选的，所述小球藻酶解肽提取物的制备方法包括：料水比(小球藻粉：水，w/w)为1:10～1:30(w/w)，以200-800w的功率使用超声细胞破碎仪对料液进行破壁处理，循环3～5次后离心取上清以1％-10％的酶底比(小球藻粉：酶，w/w)加入蛋白酶酶解，酶解条件为：ph7-10，温度40-65℃，酶解时间1-12h；然后95℃加热15min灭酶，离心获得酶解物上清液，干燥后即得小球藻酶解肽提取物。使用超滤膜浓缩、sephadex g-15凝胶柱、deae阴离子交换柱层析、c18反相柱层析中一种或几种组合对酶解物上清液分离纯化，得到的组分经冷冻干燥即得精制的小球藻酶解肽提取物。
11、所述降压肽lkkap(seq id no.2)以蛋白核小球藻(chlorella pyrenoidosa)为原料，经酶解及多种色谱分离纯化得到。其序列为leu-lys-lys-ala-pro,相对分子量为555.78da。通过酶解分离纯化、微生物发酵或者化学合成的该多肽可应用于制备降压药物或药物组合物、保健食品或普通食品。
12、所述降压肽pglrp(seq id no.10)以蛋白核小球藻(chlorella pyrenoidosa)为原料，经酶解及多种色谱分离纯化得到。其序列为pro-gly-leu-arg-pro,相对分子量为538.71da。通过酶解分离纯化、微生物发酵或者化学合成的该多肽可应用于制备降压药物或药物组合物、保健食品或普通食品。
13、所述小球藻降压肽在以马尿酰-组氨酸-亮氨酸为底物的体外实验条件下能显著抑制血管紧张素转化酶(ace)活性，lkkap、pglrp的半数抑制率(ic50)分别为36.19μm和44.78μm。
14、本专利技术所具有的优点:
15、本专利技术获得的多肽具有优良的体外ace抑制活性，且在细胞水平实验中无明显细胞毒性。多肽为五肽，分子量分别为555.78da和538.71da，分子量小易于吸收。所述多肽在具有血压调节活性的食品、保健品及药物等领域具有良好的应用前景。
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1.一种小球藻酶解肽提取物，其特征在于：所述提取物中平均分子量在0-1000Da的酶解肽占比不低于80％，且包含LKKAP、PGLRP、ATKFP、VASPK、KVLP、VAIGQK、IGRKFS、VGAGAH、SAKTRAE中的一种或多种肽序列。
2.一种小球藻血管紧张素转化酶(ACE)抑制寡肽，其特征在于：所述寡肽为LKKAP、PGLRP、ATKFP、VASPK、KVLP、VAIGQK、IGRKFS、VGAGAH中的一种或多种。
3.一种小球藻降血压肽或组合物，其特征在于：包括权利要求1中的提取物或权利要求2中任一种或多种寡肽、或如权利要求1中的提取物与权利要求2中任一种或多种寡肽组成的组合物。
4.一种小球藻食品，其特征在于：所述小球藻食品含中的提取物或权利要求2中任一种或多种寡肽、或权利要求3中的寡肽组成的组合物中的或多种所述酶解肽提取物、或任一种小球藻酶解肽序列或组合物。
5.一种权利要求3所述的小球藻降血压肽或组合物的应用，其特征在于：权利要求1-3中所述权利要求1酶解肽提取物、或权利要求2的ACE抑制寡肽、或权利要求3
6.一种权利要求5所述的应用，其特征在于：以权利要求1-3中所述的提取物、或任一种或多种小球藻降压肽、或组合物添加任何符合食品或药品生产允许的辅料用于血管紧张素转化酶抑制剂、或高血压、心血管疾病的预防或治疗相关的保健品或药物制剂。
7.一种权利要求1制备小球藻酶解肽提取物的方法，其特征在于：以小球藻为原料，对其进行破壁、蛋白酶酶解、灭酶、离心获得小球藻酶解物上清液；所得酶解物上清液经干燥和/或纯化后获得小球藻酶解肽提取物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述小球藻酶解肽提取物的制备方法包括：料水比(小球藻粉：水，w/w)为1:10～1:30(w/w)，以200-800w的功率使用超声细胞破碎仪对料液进行破壁处理，循环3～5次后离心取上清以1％-10％的酶底比(小球藻粉：酶，w/w)加入蛋白酶酶解，酶解条件为：pH 7-10，温度40-65℃，酶解时间1-12h；然后95℃加热15min灭酶，离心获得酶解物上清液，冷冻干燥后即得小球藻酶解肽提取物。
9.根据权利要求8中的制备方法，其特征在于：所述的反应的离心获得酶解物上清液为通过超滤膜浓缩、Sephadex G-15凝胶柱、DEAE阴离子交换柱层析、C18反相柱层析中一种或几种组合对酶解物上清液分离纯化。
10.根据权利要求7中的制备方法，其特征在于：所述蛋白酶为胰蛋白酶、碱性蛋白酶、糜蛋白酶、中性蛋白酶中的任一种。
...【技术特征摘要】
1.一种小球藻酶解肽提取物，其特征在于：所述提取物中平均分子量在0-1000da的酶解肽占比不低于80％，且包含lkkap、pglrp、atkfp、vaspk、kvlp、vaigqk、igrkfs、vgagah、saktrae中的一种或多种肽序列。
2.一种小球藻血管紧张素转化酶(ace)抑制寡肽，其特征在于：所述寡肽为lkkap、pglrp、atkfp、vaspk、kvlp、vaigqk、igrkfs、vgagah中的一种或多种。
3.一种小球藻降血压肽或组合物，其特征在于：包括权利要求1中的提取物或权利要求2中任一种或多种寡肽、或如权利要求1中的提取物与权利要求2中任一种或多种寡肽组成的组合物。
4.一种小球藻食品，其特征在于：所述小球藻食品含中的提取物或权利要求2中任一种或多种寡肽、或权利要求3中的寡肽组成的组合物中的或多种所述酶解肽提取物、或任一种小球藻酶解肽序列或组合物。
5.一种权利要求3所述的小球藻降血压肽或组合物的应用，其特征在于：权利要求1-3中所述权利要求1酶解肽提取物、或权利要求2的ace抑制寡肽、或权利要求3的组合物在制备血管紧张素转化酶抑制剂、或高血压、心血管疾病的预防或治疗相关的保健品或药物制剂中的应用。
6.一种权利要求5所述的应用，其特征在于：以权利要求1-3中所述的提取...
【专利技术属性】
技术研发人员：岳洋，索齐善，张全斌，吴宁，王晶，耿丽华，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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