一种氯霉素单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种氯霉素（CAP）单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：(1)用重氮化方法制备CAP-BSA的抗原；(2)用CAP-BSA抗原淋巴免疫小鼠，第一次免疫与弗氏完全佐剂充分乳化，第二次和第三次免疫与弗氏不完全佐剂充分乳化，每次间隔7天，融合前三天腹腔直接注射抗原加强免疫；(3)用酶联免疫吸附法测小鼠血清效价；(4)选择血清效价最高的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合；(5)选择性培养基培养筛选融合细胞，检测筛选阳性细胞，克隆化培养，进一步克隆筛选阳性细胞，阳性克隆扩培与冻存；(6)将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以生产大量腹水；(7)用层析柱纯化腹水中的抗氯霉素单克隆抗体。制备得到的抗CAP-BSA单克隆抗体灵敏性高、特异性强、实用性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于单克隆抗体制备
，特别涉及。
技术介绍
氯霉素(CAP)是一种广谱性抗生素，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有很好的抑制作用。由于其优良的抗菌性、稳定的药性和低廉的价格，因此作为细菌性疾病的治疗药物应用于人和动物临床，并作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业和人工水产养殖业生产。 但是，氯霉素具有毒性，易引起人体血中毒，长期应用可导致再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。婴儿长期食用氯霉素污染的乳汁，可能会引起“灰婴综合征”。此外长期微量摄入氯霉素，不仅使大肠杆菌、沙门氏菌等产生耐药性，而且会引起机体正常菌群失调，使人们易感染各种疾病。如果氯霉素在食用动物中残留，可通过食物链传给人类，对人类的健康造成危害，因此，抗氯霉素单克隆抗体的制备对动物性食品检测以及人类健康具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗氯霉素单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)用重氮化方法制备CAP-BSA的抗原；(2)免疫用CAP-BSA抗原淋巴免疫小鼠，第一次免疫与弗氏完全佐剂充分乳化，第二次和第三次免疫与弗氏不完全佐剂充分乳化，每次间隔7天，融合前三天腹腔直接注射抗原加强免疫；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗氯霉素单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)用重氮化方法制备CAP-BSA的抗原；(2)免疫用CAP-BSA抗原淋巴免疫小鼠，第一次免疫与弗氏完全佐剂充分乳化，第二次和第三次免疫与弗氏不完全佐剂充分乳化，每次间隔7天，融合前三天腹腔直接注射抗原加强免疫；(3)筛选用酶联免疫吸附法测小鼠血清效价；(4)细胞融合选择血清效价最高的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合；(5)选择性培养基培养筛选融合细胞，检测筛选阳性细胞，克隆化培养，进一步克隆筛选阳性细胞，阳性克隆扩培与冻存；(6)腹水制备将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以生产大量腹水；(7)腹水纯化用层析柱纯化腹水中的抗氯霉素单克隆抗体。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述的小鼠为6周龄的BALB/c 小鼠，每次抗原免疫量为IOOyg/只，抗原与弗氏完全佐剂的混合比例为1 :1，抗原与弗氏不完全佐剂的混合比例为1 :1。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中，洗涤调整小鼠脾B淋巴细胞浓度为(1-5) X 107mL，将淋巴细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞按10:1混合后离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：应国清，汪竹环，易喻，陈建澍，梅建凤，王鸿，
申请(专利权)人：浙江工业大学，杭州博林生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：