Toll样受体3拮抗剂制造技术

本发明专利技术公开了Toll样受体3(TLR3)抗体拮抗剂、编码TLR3抗体拮抗剂或其片段的多核苷酸以及制造和使用它们的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及Toll样受体3(TLR;3)抗体拮抗剂、编码TLR3抗体拮抗剂或其片段的多核苷酸，以及制造和使用它们的方法。
技术介绍
Toll样受体(TLR)调控天然免疫反应的活化并通过响应细菌、病毒、寄生和(在一些情况下)宿主衍生配体而引发信号转导级联反应来影响适应性免疫的发展(Lancaster 等人，J. Physiol. 563 :945-955,2005) 质膜定位的 TLR(TLR1、TLR2、TLR4 和 TLR6)能识别包括细菌和真菌的蛋白或类脂组分在内的配体。主要为胞内的TLR(TLR3、TLR7和TLR9)分别对dsRNA、ssRNA和未甲基化CpG DNA作出反应。TLR信号转导的调节异常据认为会造成许多问题，正在为此开发治疗策略(Hoffman等人，Nat. Rev. Drug Discov. 4 =879-880, 2005 ； Rezaei, Int.Immunopharmaco1. 6 :863-869,2006 ；ffickelgren, Science 312 184-187,2006)。例如，正在临床开发分别针对严重脓血症和狼疮的TLR4及TLR7和9的拮抗剂 (Kanzler 等人，Nat. Med. 13 :552-559, 2007)。TLR3信号转导被在发炎或病毒感染期间由坏死细胞释放的dsRNA、mRNA或RNA活化。TLR3活化诱导干扰素和促炎性细胞因子的分泌，并在某些微生物感染期间触发具有保护作用的免疫细胞活化和细胞募集。例如，已将显性负TLR3等位基因与儿童期HSV-I初次感染时对单纯疱疹性脑炎的敏感性增加相关联(Zheng等人，Science 317 :1522-15272007)。在小鼠中，TLR3缺乏与柯萨奇病毒攻击时降低的存活率有关(Richer等人，PLoS One 4 :e4127，2009)。但是，已证明未受控制的或异常调节的TLR3信号转导造成某些病毒感染模型中的发病和死亡，所述病毒包括西尼罗病毒、白蛉病毒、牛痘和甲型流感病毒 (Wang 等人，Nat. Med. 10 1366-1373，2004 ；Gowen 等人，J. Immunol. 177 :6301-6307,2006 ； Hutchens 等人，J. Immunol. 180 :483-491，2008 ；Le Goffic 等人，PloS Pathog. 2 :E53， 2006)。已确定了人和鼠TLR3胞外结构域的晶体结构(Bell等人，Proc. Natl. Acad. Sci. (USA)，102 10976-80，2005 ；Choe 等人，Science 309 :581-585, 2005 ；Liu 等人，Science, 320 :379-381,2008)。TLR3呈现由聚糖装饰的螺形马蹄(solenoid horseshoe)的总体形状，具有23个由富亮氨酸重复(LRR)基序组成的串联单元。dsRNA结合位点已被定位到两个不同的区域(Liu等人，Science，320 :379-81, 2008)。已提出信号转导组件是由IfdsRNA 和两个 TLR3 胞外结构域组成(Leonard 等人，Proc. Natl. Acad. Natl. Acad. Sci. (USA) 105 258-263,2008)。已证实TLR3能驱动多种炎性疾病、免疫介导疾病和自身免疫疾病中的致病机制， 这些疾病例如败血性休克(Cavassani等人，J. Exp. Med. 205 3609-2621，2008)、急性肺损伤(Murray 等人，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178 :1227_1237，2008)、类风湿性关节炎 (Kim 等人，Immunol. Lett. 124 :9-17,2009 ；Brentano 等人，Arth. Rheum. 52 :2656-2665, 2005)、哮喘(Sugiura 等人，Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. 40 :654-662,2009 ；Morishima 等人，Int. Arch. Allergy Immunol. 145 :163—174，2008 ；Stowell 等人，Respir. Res. 10 :43， 2009)、炎性肠病例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎(Zhou等人，J. Immunol. 178 =4548-4556, 2007 ；Zhou 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 104 :7512-7515,2007)、自体免疫性肝脏疾病 (Lang 等人，J. Clin. Invest. 116 :2456-2463,2006)和 I 型糖尿病(Dogusan 等人，Diabetes 57 :1236-1245,2008 ；Lien 和 Zipris, Curr. Mol. Med. 9 :52-68,2009)。此外，已证实 TLR3 表达的器官特异性增加与多种由调节异常的局部炎性反应驱动的病理状况相关，如原发性胆汁性肝硬化中的肝脏组织(Takii等人，Lab Invest. 85 =908-920,2005)、类风湿性关节炎的关节(Ospelt等人，Arthritis Rheum. 58 =3684-3692,2008)和过敏性鼻炎患者的鼻黏膜(Fransson 等人，Respir Res. 6 :100,2005)。在坏死状态下，包括内源性mRNA在内的胞内内含物的释放触发细胞因子、趋化因子和其他因子的分泌，这些细胞因子、趋化因子和其他因子会诱导局部炎症、有利于死亡细胞残留部分的清除和修复损伤的。坏死常常使炎性过程延长，引起慢性或严重炎症 (Bergsbaken等人，Nature Reviews7 :99_109，2009)。TLR3在坏死部位的活化会促成这些异常的炎性过程并通过释放的TLR3配体产生进一步的促炎正反馈环路。从而，TLR3拮抗在涉及慢性或严重炎症和/或坏死的多种疾病中可能是有益的。对TLR3活化的下调也可代表肿瘤学适应征的新治疗策略，所述肿瘤学适应征包括肾细胞癌和头颈鳞状细胞癌(Morikawa等人，Clin. Cancer Res. 13 :5703-5709,2007 ； Pries等人，Int. J. Mol. Med. 21 =209-215, 2008) 此外，已将编码活性降低的蛋白质的 TLR3l423F等位基因与对晚期“干性”年龄相关性黄斑变性的防护相关联(Yang等人，N. Engl. J. Med. 359 :1456-1463,2008)，这表明TLR3拮抗剂在这种疾病中可能是有益的。与炎性病症及其他病症有关的病变，例如与感染有关的那些病变，具有明显的健康和经济影响。然而，尽管在医学的许多领域有进步，但相比之下可用于许多这些病症的治疗选择和治疗方法很少。从而，存在着抑制TLR3活性来治疗TLR3相关病症的需求。 附图说明图1示出了抗人TLR3(huTLR3)单克隆抗体在NF-κ B报道基因测定中的影响。图2Α和2Β示出了抗人TLR3单克隆抗体在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.04.29 US 61/173686;2009.10.30 US 12/6096751.一种分离的抗体或其片段，其中所述抗体结合SEQ ID N0:2的toll样受体3(TLR3) 氨基酸残基 K416、K418、L440、N441、E442、Y465、N466、K467、Y468、R488、R489、A491、K493、 N515、N516、N517、H539、N541、S57UL595 和 K619。2.一种分离的抗体或其片段，其中所述抗体结合SEQ ID N0:2的toll样受体3(TLR3) 氨基酸残基 S115、D116、K117、A120、K139、N140、N141、V144、K145、T166、Q167、V168、S188、 E189、D192、A195 和 A219。3.一种包含重链可变区和轻链可变区的分离的抗体或其片段，其中所述抗体以重链可变区 Chothia 残基 W33、F50、D52、D54、Y56、N58、P61、E95、Y97、YlOO 和 DlOOb 和轻链可变区Chothia残基Q27、Y32、N92、T93、L94和S95结合具有SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列的 TLR3。4.根据权利要求3所述的分离的抗体，其中所述抗体具有以下性质中的至少一种a.以<IOnM的Kd结合人TLR3 ；b.在lyg/ml下，在体外聚(I:C)NF-KB报道基因测定中降低人TLR3生物活性> 50% ；c.在10μ g/ml 下，抑制用 < 100ng/ml 聚(I: C)刺激的 BEAS-2B 细胞的 IL-6 或 CXCLlO/ IP-10 产量的> 60% ；d.在0.4 μ g/ml下，抑制用< 100ng/ml聚(I C)刺激的BEAS-2B细胞的IL-6或 CXCL10/IP-10 产量的> 50% ；e.在5μg/ml下，抑制用62. 5ng/ml聚(I: C)刺激的NHBE细胞的IL-6产量的> 50% ；f.在1μg/ml下，抑制用62. 5ng/ml聚(I:C)刺激的NHBE细胞的IL-6产量的> 50%；g.在1μg/ml下，抑制PBMC的由聚(I:C)诱导的IFN-γ、IL_6或IL-12产量的> 20% ；h.在体外NF-kB报道基因测定中以IC50< 10μ g/ml抑制食蟹猴TLR3生物活性；或者i.在体外ISRE报道基因测定中以IC50< 5 μ g/ml抑制食蟹猴TLR3生物活性。5.根据权利要求3所述的分离的抗体，其中所述抗体包含长度为12个氨基酸的重链互补决定区(CDR) 3 (HCDR3)。6.根据权利要求3所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有分别与SEQID N0:82、 86和84所示的氨基酸序列有至少90%同一性的氨基酸序列的重链互补决定区(OTR) 1、2 和3(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，和具有分别与SEQ ID NO :79、80和87所示的氨基酸序列有至少90%同一性的氨基酸序列的轻链互补决定区1、2和3 (IXDR1、IXDR2、IXDR3)。7.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包含轻链构架和重链构架，所述轻链构架与轻链可变区κ 1)构架(VK 1)的氨基酸序列具有至少90%同一性，所述重链构架与重链可变区Vh5构架(VM)的氨基酸序列具有至少90%同一性。8.根据权利要求7所述的分离的抗体，其中所述Vkl构架由IGKV1-39*01编码，具有 SEQ ID NO :221所示的氨基酸序列，所述Vh5构架由IGHV5-51*01编码，具有SEQ ID N0: 222所示的氨基酸序列。9.一种包含重链可变区和轻链可变区的分离的抗体或其片段，其中所述抗体以重链可变区 Chothia 残基 N31a、Q52、R52b、S53、K54、Y56、Y97、P98、F99 和 Y100 和轻链可变区 Chothia 残基 G29、S30、Y31、Y32、E50、D51、Y91、D92 和 D93 结合具...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·坎尼安，Y·冯，K·赫林加，J·罗，R·劳亨伯格，M·鲁茨，L·桑马特奥，R·T·萨里斯基，R·斯维特，F·滕，A·特普利亚科夫，S·吴，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
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