根据本发明专利技术，证明了具有氨基酸序列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４，２１，２３，２７，３６，４６，５７，６０和６２的肽具有细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）诱导能力。因此，本发明专利技术提供具有选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４，２１，２３，２７，３６，４６，５７，６０和６２的氨基酸序列的肽。所述肽可以包括一个、两个或几个氨基酸替代、缺失、插入或添加，只要其保留ＣＴＬ诱导能力。此外，本发明专利技术提供用于治疗和／或预防癌症和／或防止其手术后复发的药物制剂，所述制剂含有任何这样的肽。本发明专利技术的药物制剂包括疫苗。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MELK表位肽及包含它的疫苗
本申请要求2008年8月1日提交的美国临时申请No.61/085,663的权益，通过述及将其全部内容收入本文。本专利技术涉及生物科学领域，更具体的说是癌症治疗领域。具体而言，本专利技术涉及作为癌症疫苗极其有效的新肽，及用于治疗和预防肿瘤的药物。专利技术背景已经证明，CD8阳性CTL可识别主要组织相容性复合物(MHC)I类分子上出现的肿瘤相关抗原(TAA)衍生的表位肽，然后杀死肿瘤细胞。从TAA的第一个例子——黑素瘤抗原(MAGE)家族被发现起，人们主要通过免疫学手段(BoonT，IntJCancer1993May8，54(2)：177-80；BoonT&vanderBruggenP，JExpMed1996Mar1，183(3)：725-9)已经发现了许多其它TAA。人们正在将这些TAA中的一些作为免疫治疗的靶标进行临床开发。能够诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的新TAA的鉴定保证了针对各种类型癌症的肽疫苗接种策略的进一步开发和临床应用(HarrisCC，JNatlCancerInst1996Oct16，88(20)：1442-55；ButterfieldLHetal.，CancerRes1999Jul1，59(13)：3134-42；VissersJLetal.，CancerRes1999Nov1，59(21)：5554-9；vanderBurgSHetal.，JImmunol1996May1，156(9)：3308-14；TanakaFetal.，CancerRes1997Oct15，57(20)：4465-8；FujieTetal.，IntJCancer1999Jan18，80(2)：169-72；KikuchiMetal.，IntJCancer1999May5，81(3)：459-66；OisoMetal.，IntJCancer1999May5，81(3)：387-94)。到此为止，已经有数项使用这些肿瘤相关抗原衍生的肽进行临床试验的报告。不幸的是，迄今为止在这些癌症疫苗试验中只观察到较低的客观应答率(BelliFetal.，JClinOncol2002Oct15，20(20)：4169-80；CouliePGetal.，ImmunolRev2002Oct，188：33-42；RosenbergSAetal.，NatMed2004Sep，10(9)：909-15)。近来已经开发了用于预测结合I类HLA的肽序列的算法(JournalofImmunologicalMethods，(1995)，Vol.185，pp.181-190，J.Immunol.，(1994)，Vol.152，pp.163-175，proteinscience，(2000)，Vol.9，pp.1838-1846)。然而，难以估计预测的表位肽是否能够在靶细胞中被天然地加工并与HLA分子一起表达在靶细胞表面。而且，此类算法，例如BIMAS(http://bimas.dcrt.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform)(ParkerKC，etal.，(1994)JImmunol.；152(1)：163-75.；KuzushimaK，etal.，(2001)Blood.；98(6)：1872-81.))，可能会提示不太强健的HLA分子结合肽(BachinskyMM，et.al.，CancerImmun.2005Mar22；5：6.)，因此，鉴定表位肽仍然是困难且有挑战性的。MELK，即母体胚胎亮氨酸拉链激酶(maternalembryonicleucinezipperkinase)，先前被鉴定为涉及哺乳动物胚胎发育的snfl/AMPK丝氨酸-苏氨酸激酶家族的新成员(HeyerBSetal.，DevDyn.1999Aug215(4)：344-51)。已经显示这种基因在干细胞更新(NakanoIetal.，JCellBiol.2005Aug1，170(3)：413-27)、细胞周期行进(BlotJetal.，DevBiol.2002Jan15，241(2)：327-38；SeongHAetal.，BiochemJ.2002Feb1，361(Pt3)：597-604)和前mRNA剪接(VulstekeVetal.，JBiolChem.2004Mar5，279(10)：8642-7.Epub2003Dec29)中发挥重要作用。此外，最近通过使用含有23,040种基因的全基因组cDNA微阵列的基因表达谱分析，显示了MELK在乳腺癌中上调(LinMLetal.，BreastCancerRes.2007；9(1)：R17，WO2006/016525，WO2008/023841)。事实上，MELK在数种癌细胞中上调，例如肺癌、膀胱癌、淋巴瘤和宫颈癌细胞(见WO2004/013665和WO2006/085684，通过提述并入它们的公开内容)。对多种人体组织和癌细胞系进行的Northern印迹分析显示，在绝大部分乳腺癌和细胞系中显著高水平表达，而在正常生命器官(心脏、肝、肺和肾)中则不表达(WO2006/016525)。此外，已经显示用siRNA抑制MELK表达可显著抑制人乳腺癌细胞的生长。因此认为MELK是癌症免疫疗法的合适靶标，且从其衍生的表位肽可以作为癌症免疫治疗剂在多种癌症类型的治疗中有效。专利技术概述本专利技术部分基于合适的免疫疗法靶标的发现。由于TAA一般被免疫系统察觉为“自身”并因此常常没有先天免疫原性，适宜靶标的发现是极其重要的。在认识到MELK已经被鉴定为在膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、慢性髓细胞样白血病(CML)、直肠结肠癌、子宫内膜异位、食道癌、胃癌、肝癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌和小细胞肺癌(SCC)的癌症组织中上调的基础上，本专利技术以由GenBank登录号NM_014791(SEQIDNO：93)的基因编码的该母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)蛋白(SEQIDNO：94)为对象进行了进一步分析。具体而言，选择了含有可引发对相应分子特异性的CTL的表位肽的MELK基因产物进行研究。使用MELK衍生的HLA-A*2402或HLA-A*0201结合候选肽刺激从健康供体获得的外周血单个核细胞(PBMC)。建立了可特异性识别经相应候选肽冲激的HLA-A24或HLA-A02阳性靶细胞的CTL，而且鉴定了能诱导针对表达在肿瘤细胞表面上的MELK的强而特异性的免疫应答的HLA-A24或HLA-A02限制表位肽。这些结果证明了MELK具有强免疫原性，而且它的表位是肿瘤免疫疗法的有效靶标。因而，本专利技术的一个目的是提供具有CTL诱导能力、且具有选自SEQIDNO：14，21，23，27，36，46，57，60和62的氨基酸序列的肽。此外，本专利技术涵盖经过修饰的肽，其具有氨基酸序列SEQIDNO：14，21，23，27，36，46，57，60或62中替代、删除、掺入(incorporated)和/或添加一个、两个或更多个氨基酸而得到的序列，只要经过修饰的肽保留原始的CTL诱导能力。当对受试者施用时，本专利技术的肽呈递在抗原本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种衍生自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４的分离的肽，其中所述肽包含选自下组的氨基酸序列：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４，２１，２３，２７，３６，４６，５７，６０和６２；和（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４，２１，２３，２７，３６，４６，５７，６０和６２，其中替代、插入、缺失和／或添加了１个、２个或几个氨基酸，并且具有细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）诱导能力。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/085,6632008年8月1日1.一种分离的肽，其中所述肽由SEQIDNO：36的氨基酸序列组成。2.分离的多核苷酸，其编码如权利要求1所述的肽。3.一种药物制剂，其中所述制剂(agent)包含选自下组的活性成分：(a)如权利要求1所述的肽；(b)处于可表达形式的编码如权利要求1所述肽的多核苷酸；(c)抗原呈递细胞和/或外来体，所述抗原呈递细胞和外来体在其表面上呈递HLA抗原与如权利要求1所述的肽之间形成的复合物；(d)针对如权利要求1的肽被诱导的CTL；和(e)上述的组合。4.一种诱导具有高的CTL诱导能力的抗原呈递细胞的体外方法，其中所述方法包括使抗原呈递细胞与如权利要求1所述的肽接触的步骤，或者将处于可表达形式的编码如权利要求1所述肽的多核苷酸导入抗原呈递细胞的步骤。5.使用如权利要求1所述的肽诱导CTL的体外方法。6.权利要求5的方法，其中所述方法包括选自下组的步骤：(a)使CD8-阳性T细胞与抗原呈递细胞和/或外来体接触，所述抗原呈递细胞和外来体在其表面上呈递HLA抗原与如权利要求1所述的肽之间形成的复合物；和(b)向CD8-阳性T细胞中导入编码能够形成TCR亚单位的多肽的多核苷酸，所述TCR亚单位可识别HLA抗原与如权利要求1所述的肽之间形成的复合物。7.一种分离的CTL，其靶...
【专利技术属性】
技术研发人员：角田卓也，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP
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