胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为适当的缓冲液；所述的试剂R2是用胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适当的缓冲液中组成。本发明专利技术具有灵敏度高、特异性好、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学免疫学领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步地，本专利技术涉及一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒。
技术介绍
肌酐，到目前为止被广泛作为肾小球滤过滤(GFR)的标志物，它是一种由肌肉产生的小分子物质，因此肌酐形成和分泌的速率和机体内肌肉含量密切相关。众所周知，在一个种群中，个体的肌肉含量是相对不同的，老年人比青壮年的肌肉含量要低，许多病人在他们疾病的进程存在肌肉含量的损失，孩子的肌肉含量也与成人不同，男人的肌肉平均含量要比女人高。当血清肌酐浓度作为肾小球滤过率标志物时，检测到的血清肌酐值要比实际低50%。而且饮食能够显著影响血清肌酐水平，特别是富含蛋白质的饮食。因此，血清肌酐浓度作为肾小球滤过率标志物时，受影响的因素很多，不易检测准确。目前，检测肌酐的方法中，有“金标法”和“静脉内注射放射性物质的方法”两种，但是“金标法” 一般存在检测的可靠性差的不足；而采用在静脉内注射放射性物质的方法目前虽然受到普遍欢迎，但是，该方法昂贵、耗时，并且必须要进行注射、给患者带来痛苦。有文献报道，胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cyS-c，分子量为13kD)，能够滤过正常的肾小球，是一种反映肾小球滤过率变化的理想的内源性标志物，采用简单的透射比浊法检测血清中胱氨酸蛋白酶抑制剂C含量可以代替目前复杂的肾小球滤过率测定方法。应用最多的就是胶乳增强免疫透射比浊法，其基本原理是将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。而胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体包被到胶乳上，一般可以采用物理吸附法和化学偶联法，采用物理吸附法得到的致敏胶乳颗粒稳定性较化学偶联法要差，抗体容易从胶乳颗粒上脱落下来；而且用物理吸附法得到的胶乳，有可能受到类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，IgM.IgG型RF可以与包被在胶乳上的抗体的Fc段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假性升高。嗜异性抗体可与啮齿类动物IgG的Fc段结合，这样嗜异性抗体可与包被在胶乳上的抗体结合，造成检测结果假阳性或假性升高。目前采用的化学偶联法多为随机偶联法，因随机偶联的抗体随机偶联到抗体不同部位，将导致抗体损失结合力；所以，完全随机偶联会损失抗体大部分结合力，增加了抗体用量和生产成本。同时，若将上述方法得到的致敏胶乳颗粒用于检测试剂盒中，会造成特异性差、准确性低、抗干扰能力弱或生产成本高的缺陷。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的上述不足，提供一种灵敏度高、特异性好、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为一种胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂Rl为适当的缓冲液；所述的试剂 R2是用胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适当的缓冲液中组成。本专利技术上述试剂盒中Rl与R2的容积比为5 1。本专利技术所述的缓冲液包括但不限于PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸 (MES)缓冲液、氯化铵缓冲液以及其他具有相似性质的缓冲液中的一种或几种。本专利技术上述试剂盒中Rl所用的缓冲液与配置R2所用的缓冲液只要为上面的缓冲液中的一种任意搭配均可。本专利技术上面所述的聚苯乙烯胶乳颗粒(该聚苯乙烯胶乳颗粒为市售常规产品)， 其平均粒径在0. 01 1. 5 μ m之间，粒径小于0. 01 μ m时，胶乳颗粒聚集产生的光密度变化太小，结果很难达到试验敏感度要求，在制备试剂的时候，需要花费过多的离心时间，延长了试剂生产的时间，增加了试剂成本且不利于重复性。而粒径大于1. 5μπι的胶乳颗粒在测量高浓度检测物时，其聚集产生的光密度变化超过了检测限，结果很难获得对应于分析物浓度的光密度变化，而且颗粒太大会加速自聚集，导致分散性降低。胶乳颗粒粒径随着试验方法和设备的改变而改变。所选择的颗粒粒径最好是介于0. 05 0. 5 μ m之间。本专利技术上面所述的抗体包括但不限于多克隆抗体(人、羊、兔、鸡)及单克隆抗体。在本专利技术所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒中，还包括胱氨酸蛋白酶抑制剂C校准品；进一步的，所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂C校准品中胱氨酸蛋白酶抑制剂C含量为 0 8mg/L。本专利技术所述的试剂R2是用胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适当的缓冲液中组成，该试剂R2制备步骤包括(1)胶乳颗粒的激活在带有羧基的胶乳颗粒中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺(EDAC)，混合反应后加入己二酸二酰胼，继续混合反应，得到激活的胶乳颗粒；(2)抗体的氧化用高碘酸钠将抗体非结合活性区域Fc端羧基氧化成醛基；(3)抗体与胶乳颗粒的偶联将步骤⑴激活的胶乳颗粒和步骤⑵氧化的抗体混合反应，待反应结束后，再加入葡萄糖封闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球。本专利技术上述制备方法各个步骤中物料配比为步骤(1)中乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺胶乳(带有羧基的胶乳颗粒原料) =0. 5 5 100(重量比)；己二酸二酰胼胶乳(带有羧基的胶乳颗粒原料)=50 250 100(重量比)；步骤O)中高碘酸钠胶乳(带有羧基的胶乳颗粒原料)=0.5 3 100(重量比)；步骤(3)中抗体激活的胶乳颗粒=2 22 100 (重量比)，葡萄糖激活的胶乳颗粒=(25 50) 100。加入的是原料胶乳，可以改成抗体胶乳。都是重量比本专利技术所述胶乳增强免疫透射比浊法，其原理是包被了抗原或抗体的胶乳微粒， 与标本中相应抗体或抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物形成所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。在本专利技术中，血清中的胱氨酸蛋白酶抑制剂C与结合在胶乳颗粒表面的抗人胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体结合，产生抗原抗体反应，使胶乳颗粒形成聚集；在546nm，700nm波长处测定吸光度，对照标准曲线可求出胱氨酸蛋白酶抑制剂C的含量。本专利技术的优点和有益效果1.本专利技术的试剂盒是一种灵敏度高、特异性好、准确性高、抗干扰能力强及生产成本低的胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒。2.本专利技术试剂盒中的试剂R2制备是一种抗原抗体反应试验方法，特别之处在于， 本专利技术采用定向偶联法将胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体包被到胶乳颗粒上；本专利技术将抗体的非结合活性区域的Fc端定向偶联到胶乳颗粒上，不会发生类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰所导致的检测结果假阳性或假性升高，该方法定向偶联的抗体偶联到胶乳颗粒上后，其抗原结合位点指向流动相，抗体偶联部位为Fc片段，因此不会发生抗体结合力损失的情况，保持了抗体的活力，大大减少了抗体的用量，降低了生产成本。3.本专利技术试剂盒中的R2制备采用定向化学偶联法，得到的致敏胶乳颗粒稳定性较好，抗体不会从胶乳颗粒上脱落，而且由于化学偶联过程中，Fc段发生了结构上的改变， 因此不会受到类风湿性因子(RF)和嗜异性抗体的干扰，大大提升了检测结果的准确性和可信性。具体实施例方式下面通过实施例进一步详细描述本专利技术，但本专利技术不仅仅局限于以下实施例。实施例1胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒的制备本专利技术的试剂盒涉及试剂的主要原材料如下1.胱氨酸蛋白酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种胱氨酸蛋白酶抑制剂Ｃ检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括试剂Ｒ１、试剂Ｒ２，所述的试剂Ｒ１为适当的缓冲液；所述的试剂Ｒ２是用胱氨酸蛋白酶抑制剂Ｃ抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适当的缓冲液中组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹炳德，夏佳音，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：97