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一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌制造技术

技术编号:7084318 阅读:219 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,它涉及一株苏云金芽孢杆菌。它为苏云金芽孢杆菌(Bacillus?thuringiensis)AH-2,属于芽孢杆菌属(Bacillus),已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCC?No:5220,保藏日期为2011年9月6日。本发明专利技术中苏云金芽孢杆菌AH-2,对鳞翅目和鞘翅目主要害虫及抗Bt及Cry1Ac毒蛋白害虫,均具有较强的毒杀作用,可以利用其生产高效、广谱的杀虫剂,用于防止鳞翅目重要害虫小菜蛾及鞘翅目害虫黄粉虫,同时对抗性害虫具有很好的效果,有利于田间抗性小菜蛾的防治。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株苏云金芽孢杆菌。
技术介绍
苏云金芽孢杆菌 Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种从土壤或死亡昆虫体内分离出来的革兰氏阳性细菌。此类菌在芽孢形成时期产生一种或多种杀虫晶体蛋白 (Insecticidal Crystal Proteins, ICPs,又被称为δ -内毒素),可对鳞翅目、鞘翅目、半翅目、双翅目、同翅目、膜翅目、直翅目、等翅目、毛翅目、脉翅目、蚤目、缨翅目、食毛目、蜚蠊目、螨类、虱目、吸虫、绦虫、鞭毛虫、变形虫和草履虫等多种昆虫及原生生物产生毒素活性, 但对人畜等非靶标生物没有效果,对环境友好安全。因此苏云金芽孢杆菌作为主要的生物农药被广泛应用。该菌菌剂作为喷洒型杀虫剂主要成分的使用时间已经超过50年,是目前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂,占微生物杀虫剂总量的90% -95%。苏云金芽孢杆菌的不同杀虫毒素由不同种类的cry基因控制,各种cry基因已经被成功克隆,并根据不同需要,利用转基因技术转入到不同作物中,用于害虫等有害生物的防治。自1996年转Bt cry基因作物的种植开始,转Bt基因作物在世界范围内被广泛种植, 种植面积逐年增长。据2008年的统计显示,转Bt基因作物的种植面积已增长至4,600万公顷。苏云金芽孢杆菌菌剂的应用及转Bt cry基因作物的种植,在控制田间害虫方面效果显著,有利于作物的产量和质量的提高,同时减少了化学农药的使用,对农林业生产和环境保护发挥了积极的作用。然而苏云金芽孢杆菌制剂和转Bt基因作物广泛应用,也使得部分害虫对Bt产生了一定抗性,小菜蛾是至今唯一在田间发现对Bt产生抗性的害虫。同时,在实验室内已经筛选出许多昆虫的不同抗性品系。而且其抗性水平有发展的势头。Tabashnik等于1989年检测到田间种群对Bt制剂(kurstaki亚种)产生了 25倍的抗药性,首次报道了田间小菜蛾对Bt杀虫剂产生了抗药性。Tang等测定弗罗里达州田间小菜蛾对Bt制剂(BtK NRD12)的抗药性大于1500倍。Wright等报道马来西亚田间小菜蛾种群在室内筛选饲养7代后对BtA和BtK制剂的抗药性分别为330倍和160倍。此外,日本、中美洲、墨西哥和印度等国家和地区也有抗Bt小菜蛾的报道。2000年Zhao等报道从美国南卡罗尼那州田间采集的对CrylC有31倍抗性的小菜蛾抗性品系,在实验室先用CrylC 原毒素继续汰选,然后用表达高剂量的CrylC毒素的转基因花椰菜汰选,26代后,该品系对 CrylC毒素抗性高达63100倍(2龄幼虫)。国内,冯夏等报道深圳、东莞地区等供港菜区小菜蛾对Bt的抗药性为17. 2-30. 2 倍。李建洪等通过对深圳、东莞和广州菜区的田间小菜蛾种群检测,发现小菜蛾对苏云金芽孢杆菌标准品Cs3ab-1991的抗药性倍数分别为8. 9,6. 5,2. 1倍。周程爱等报道长沙地区的小菜蛾对Bt的抗药性由1997-1999年的敏感性由11_4. 1倍发展到2000年的6. 2倍的低水平抗药性。余德亿等报道福建地区田间种群的小菜蛾对湖北Bt和福建Bt的抗药性分别由1997年的2. 1倍和3. 1倍上升到1999年的8. 2倍和10. 1倍。郭世俭等报道浙江省杭州、萧山、金华、温州四地的小菜蛾对Bt制剂还没有产生抗药性。王崇利等报道广东惠州田间小菜蛾种群对CrylAb和CrylAc的抗性达到了高抗水平;对Btk制剂的抗性达到了中抗水平;对CrylAa和Cry2Aa具有低水平抗性;福建福州、浙江杭州和江苏南京田间小菜蛾种群对CrylAb、CrylAc具有低至中等水平抗性(8_28倍),对Btk制剂具有低水平抗性 (3. 5-7 倍)。 以上可以看出,小菜蛾对Bt产生的抗性问题已经十分突出,因此筛选到对抗Bt小菜蛾高活性的菌株,用于防治抗Bt害虫已迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术提供了一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌。一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,它为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensiS)AH-2,属于芽孢杆菌属(Bacillus),已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号.中国科学院微生物研究所,保藏编号为CGMCC No :5220,保藏日期为2011年9月6日;它为革兰氏阳性好氧杆菌,长为3. 2 μ m 4. 8 μ m,宽为1. 2 μ m 1. 8 μ m,一个营养细胞只有一个芽孢,芽孢为中生、次端生或端生,孢子囊不膨大,伴孢晶体为菱形,有鞭毛;在牛肉膏蛋白胨培养基上形成白色圆形菌落,菌落扁平,表面干燥无光泽,边缘缺刻。本专利技术中一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,它为苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensiS)AH-2,其菌膜试验阳性、伏普试验阳性、卵磷脂酶阳性、不利用水杨苷、不利用蔗糖、利用纤维二糖、不利用甘露糖、不利用七叶灵、甲基红阳性、脲酶试验阳性、明胶液化阳性、不利用乳糖、不利用山梨醇、利用果糖、利用阿拉伯糖、利用麦芽糖、不利用木糖、利用葡萄糖、利用几丁质酶,生长pH值为6. 9 7. 2,生长温度为10 45°C。本专利技术中一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,它为苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis) AH-2,其携带的杀虫晶体蛋白基因有 crylAc、cry2A、cry7 和 cry9。本专利技术一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,它为苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis) AH-2,属于芽孢杆菌属(Bacillus),已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCC No :5220,保藏日期为2011年9月6曰。本专利技术选择了鳞翅目主要害虫(小菜蛾)、鞘翅目害虫(黄粉虫)为靶标昆虫, 同时汰选得到了对Bt (Kurstaki亚种)粉剂具有高抗的抗Bt小菜蛾种群和对CrylAc毒蛋白具有高抗的抗CrylAc毒蛋白小菜蛾种群,作为靶标昆虫,本专利技术中苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis)AH-2同时对上述鳞翅目和鞘翅目主要害虫及抗Bt及CrylAc毒蛋白害虫,均具有较强的毒杀作用。本专利技术中苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) AH_2,可以利用其生产高效、广谱的杀虫剂,用于防止鳞翅目重要害虫小菜蛾及鞘翅目害虫黄粉虫,同时对抗性害虫具有很好的效果,有利于田间抗性小菜蛾的防治,提高了经济价值,切对人、畜及其他动物无害,不污染环境,具有良好经济、生态效益,具有良好的应用推广前景。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,它为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)AH-2,属于芽孢杆菌属(Bacillus),已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院.中国科学院微生物研究所,保藏编号为CGMCC No :5220,保藏日期为20 11年9月6日; 它为革兰氏阳性好氧杆菌,长为3. 2 μ m 4. 8 μ m,宽为1. 2 μ m 1本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一株对抗Bt小菜蛾有活性的苏云金芽孢杆菌,其特征在于它为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)AH-2,属于芽孢杆菌属(Bacillus),已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号.中国科学院微生物研究所,保藏编号为CGMCC No:5220,保藏日期为2011年9月6日。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:杨峰山朱勋张友军李云龙刘春光杨晶郑晓旭薛原滕淼
申请(专利权)人:黑龙江大学
类型:发明
国别省市:93

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