一种碘普罗胺高效降解菌的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种碘普罗胺高效降解菌的提取方法，包括：将城市污水处理厂二沉池的回流污泥经定向驯化培养，然后将驯化培养后的样品通过富集分离和纯化，即得。本发明专利技术的碘普罗胺高效降解菌的提取的种源为城市污水处理厂的活性污泥，种源易得且分离纯化方法简便快捷；本发明专利技术所得的碘普罗胺高效降解菌在共代谢条件下可以有效地降解碘普罗胺，且易于灭活，在紫外线照射2h后即失去活性，保证了使用的生态安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于含氮的芳香杂环化合物的降解菌的提取领域，特别涉及。
技术介绍
ΕΙ^^^^Α^ Μβπ (pharmaceuticals andpersonal care products, PPCPs)成为了受到国内外广泛关注的新型痕量污染物。尽管这类物质在环境中的浓度很低，其中有些药品在环境中通常以ng/L μ g/L水平存在，但是考虑到污染物在环境中的累积效应，因此不能排除其对环境的不利影响。在常见的PPCPs化合物中，抗生素、消炎药、抗癫痫药物、碘化造影剂在各类环境介质中均有检出。碘普罗胺(分子结构如图1所示)，是用于血管造影、肾动脉造影、尿路造影、CT的对比增强检查、体腔显示(关节腔造影，子宫输卵管造影，娄道造影)的一种碘化造影剂(iodinated contrast media compounds，ICM)。随着现代放射诊断技术和介入治疗技术的发展，ICM市场需求日益增加，其全球年销量达到3. 5 X IO3吨，在中国，碘普罗胺的销量在ICM中居第二位。ICM的使用剂量较高，每个成人每日ICM的消费剂量可高达200g，且其具有极强的生化稳定性，人体注射后，大部分不经新陈代谢而直接排出体外，大量ICM进入城市污水处理厂。然而碘普罗胺是含氮的芳香杂环化合物，城市污水处理厂的常规工艺对其几乎没有去除效果，从而使其随污水处理厂出水进入地表径流，地下水，甚至饮用水中。 欧洲一些国家如德国已经在各种水体环境中频繁检测到碘普罗胺，有时浓度高达10μ g/L， 对饮水安全造成了潜在的危害。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种碘普罗胺高效降解菌(Pseudomonas sp) 1-24的提取方法，该提取方法中种源易得，且分离纯化方法简便快捷；该细菌在共代谢条件下可以有效地降解碘普罗胺，易于灭活，保证了使用的生态安全性。本专利技术的一种碘普罗胺高效降解菌(Pseudomonas sp) 1-24的提取方法，包括将城市污水处理厂二沉池的回流污泥经定向驯化培养，然后将驯化培养后的样品通过富集分离和纯化，即得该碘普罗胺高效降解菌。所述的定向驯化培养为将活性污泥按5%的接入量接种于无机盐培养基中，以梯度压力式驯化法驯化；其中碘普罗胺浓度为10mg/L、50mg/L、80mg/L、100mg/L、130mg/L、 150mg/L, 150mL锥形瓶中装填量lOOmL，在30°C、160r/min的摇床中避光振荡培养，总驯化时间为2个月。所述的无机盐培养基为NH4Cl 2. lg, K2HPO4 4. 35g，KH2PO4 1. 7g，MgSO4 0. 2g， CaCl2 · 2H20 0. 03g, MnSO4 0. 05g, FeSO4 · 7H20 0. Olg,蒸馏水 IOOOmL, pH = 6. 8 7. 0。所述的富集分离和纯化为将驯化培养后的样品静置30分钟，取上层水样lmL，作 IO-1 ΙΟ,梯度稀释，然后将每种稀释浓度分别取ImL菌液涂布于固体培养基中，并将其倒置于30°C培养箱中培养48h;挑取形态清晰的单一菌落，编号，在固体培养基上划线，将培养皿倒置于30°C培养箱中培养48h，再观察结果；反复几次，并在电子显微镜下观察，确保是纯的单一菌株后，将分离出的菌种接种到斜面培养基上，4°C下保存于冰箱中。上述的富集培养基为牛肉膏3. 0g，蛋白胨10. 0g，NaCl 5. 0g，琼脂粉18g，蒸馏水 IOOOmL, ρΗ = 7. 0 7. 2。经16S rDNA序列测定及在NCBI数据库中进行同源性比较，得到与本专利技术的碘普罗胺高效降解菌最相近的种属是假单胞菌属(Pseudomonas)，同源性达到99%。结合细菌形态特征、生理生化鉴定结果确定该碘普罗胺高效降解菌为假单胞菌属，其16S rDNA序列在 GenBank 中的登录号为 JN226399，命名为(Pseudomonas sp)I_24。该碘普罗胺高效降解菌(Pseudomonas sp) 1_24经16S rDNA序列测定，基因全序列如下TGCTCCCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTCCGAAAGGGACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGTGGGGGATCTTCGGACCTCACGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCTGCAAGTTAATACCTTGTAGTTTTGACGTTACCAACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGGTAAGATGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCATAACTGCCTGACTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCGATAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGT-GGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATGTCCGGAATCCTGCAGAGATGTGGGAGTGCCTTCGGGAATCGGAACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCGGGTTATGCCGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCACAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACC本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种碘普罗胺高效降解菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ）Ｉ－２４的提取方法，包括：将城市污水处理厂二沉池的回流污泥经定向驯化培养，然后将驯化培养后的样品通过富集分离和纯化，即得该碘普罗胺高效降解菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚男，刘凯英，薛罡，刘振鸿，石为民，杨琦，吴瑶，冯菲，李姗珊，杨萍，刘琼，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：31