一种石油降解菌剂及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种石油降解菌剂及其制备方法和用途，其制备方法为：将聚乙烯醇与海藻酸钠溶液按比例混合均匀，再加入活性炭混匀，冷却后加入以10:1的比例与包含金黄杆菌：柄杆菌：无色杆菌：伯克氏菌（各菌株质量比为36：22：18：5）的石油降解菌液进行混合；再用注射器将得到的混合溶液滴入氯化钙饱和硼酸溶液，进行成球；静置后，将溶液中的微球取出，用灭菌后的0.9% NaCl溶液洗涤，得到固体微球形的石油降解菌剂。本发明专利技术的石油降解菌剂可用于修复石油污染土壤；固体菌剂的形式也便于运输和贮存，为微生物修复石油污染土壤的实际运用提供了技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种石油污染土壤修复的混合菌剂制备，尤其涉及一种石油降解菌剂及其制备方法和用途。
技术介绍
石油是现代社会的最主要能源之一，被称作“工业的血液”、“黑色的金子”。石油被广泛应用于制备天然气、汽油、煤油、挥发油、润滑油、石蜡和沥青等工业领域。在原油的加工、使用及运输过程中容易造成溢洒及泄漏事故，导致石油进入水体、土壤等环境中造成石油污染。石油是由多种烃类、少量非烃化合物组成的复杂混合物，它在环境中难以被降解，其组分中的多环芳烃是一种持久性有机污染物(POPs)。石油污染物有致癌、致畸、致突变的危害。国内外处理石油污染有物理方法、化学方法、生物方法三类。物理、化学方法存在处理成本高、污染物处理不彻底的问题，微生物修复方法因其经济、有效、无二次污染等优点被广泛研究。将实验室富集的高效石油降解菌液运用到实际污染场地并发挥高效的修复效果是一个亟待解决的问题。微生物对石油污染的降解过程在不同的环境条件下效果不同，以致影响修复效率；并且在实际运用中使用的菌液是用含有丰富的营养物质发酵的菌液，存在保存时间有限、运输不便的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的不足，并提供一种石油降解菌剂及其制备方法和用途。—种石油降解菌剂的制备方法，具体步骤如下: 1)将聚乙烯醇在80~100°C下完全溶解，与海藻酸钠溶液按比例混合均匀，得到海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液；2)向海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液中加入活性炭混匀，使活性炭浓度为5g/L; 3)将步骤2)得到的溶液冷却到40°C后，与石油降解菌液以10:1的体积比混匀； 4)在0~4°C、搅拌条件下，用注射器将步骤3)得到的溶液滴入浓度30%的氯化钙饱和硼酸溶液，进行成球； 5)将步骤4)得到的溶液置于4°C冰箱中静置26h后，将溶液中的微球取出，用灭菌后的0.9% NaCl溶液洗涤，得到固体微球形的石油降解菌剂。所述的步骤I)中的海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液中海藻酸钠的质量百分比为1%~2%，聚乙烯醇的质量百分比为8%~10%。所述的步骤3)中的石油降解菌液的为含有金黄杆菌、柄杆菌、无色杆菌和伯克氏菌的菌液，金黄杆菌:柄杆菌:无色杆菌:伯克氏菌各菌株质量比为36:22:18:5，石油降解菌液的OD6。。为1.5，基质为发酵培养基。所述的发酵培养基配制方法为:将20.0 g/L葡萄糖，20.0 g/L玉米淀粉，0.2 g/L磷酸二氢钾，5.0 g/L碳酸钙，5.0 g/L蛋白胨，10.0 g/L黄豆饼粉和100mL去离子水进行混合，调节pH值为7.0，并于120°C灭菌15min。所述的固体微球形的石油降解菌剂直径为2~5mm。一种利用所述的石油降解菌剂的制备方法制备得到的石油降解菌剂。—种使用所述的石油降解菌剂修复石油污染土壤的方法，具体为:对石油污染土壤进行翻耕预处理，将石油降解菌剂以质量比1:20的投加量加入到石油污染土壤中，混匀；整个土壤修复过程中使土壤含水量保持在20%~30%。本专利技术中使用海藻酸钠(SA)和聚乙烯醇(PVA)作为载体将菌液包埋于微球内部的网状结构中，解决了微生物的环境影响因素，同时成球的固体微球便于保存和运输。该方法作为微生物固定化技术的一种，在微生物修复石油污染实际运用中具有广阔的应用前景。本专利技术采用高效石油降解菌群作为功能菌液，在包埋过程中加入活性炭增强吸附性，改良微生物固定化技术，得到一种新型高效石油降解菌剂的制备方法。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是: (I)本专利技术中使用以金黄杆菌等为主要功能菌的高效石油降解菌群，该菌群降解率高，各菌株之间的协同效果好，环境适应性强；(2)本专利技术中在包埋过程中加入活性炭增强吸附性；(3)球状固体菌剂的形式有助于保持微生物的活性，便于运输和贮存，为微生物修复石油污染土壤的实际运用提供了技术支持。【附图说明】图1本专利技术实施例1中的菌剂加入石油污染土壤后土壤中石油含量变化； 图2本专利技术实施例2中的菌剂加入石油污染土壤后土壤中石油含量变化； 图3本专利技术实施例3中的菌剂加入石油污染土壤后土壤中石油含量变化； 图4本专利技术实施例4中的菌剂加入石油污染土壤后土壤中石油含量变化。【具体实施方式】本专利技术中的菌种可购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)和中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)，其编号分别为:金黄杆菌(CICC菌种编号N0.10999)，无色杆菌dArcwoAacter，CICC菌种编号N0.10400)，伯克氏菌(Burkholderia, CICC 菌种编号 N0.10877 )，柄杆菌(Caulobac ter, CGMCC 菌种编号 N0.4.1475)0本专利技术提供的一种石油降解菌剂的制备方法，具体步骤如下: 1)将聚乙烯醇在80~100°C下完全溶解，与海藻酸钠溶液按比例混合均匀，得到海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液； 2)向海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液中加入活性炭混匀，使活性炭浓度为5g/L； 3)将步骤2)得到的溶液冷却到40°C后，与石油降解菌液以10:1的体积比混匀； 4)在0~4°C、搅拌条件下，用注射器将步骤3)得到的溶液滴入浓度30%的氯化钙饱和硼酸溶液，进行成球； 5)将步骤4)得到的溶液置于4°C冰箱中静置26h后，将溶液中的微球取出，用灭菌后的0.9% NaCl溶液洗涤，得到固体微球形的石油降解菌剂。所述的步骤I)中的海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液中海藻酸钠的质量百分比为1%~2%，聚乙烯醇的质量百分比为8%~10%。所述的步骤3)中的石油降解菌液的为含有金黄杆菌、柄杆菌、无色杆菌和伯克氏菌的菌液，金黄杆菌:柄杆菌:无色杆菌:伯克氏菌各菌株质量比为36:22:18:5，石油降解菌液的OD6。。为1.5，基质为发酵培养基。所述的发酵培养基配制方法为:将20.0 g/L葡萄糖，20.0 g/L玉米淀粉，0.2 g/L磷酸二氢钾，5.0 g/L碳酸钙，5.0 g/L蛋白胨，10.0 g/L黄豆饼粉和100mL去离子水进行混合，调节pH值为7.0，并于120°C灭菌15min。所述的固体微球形的石油降解菌剂直径为2~5mm。一种利用所述的石油降解菌剂的制备方法制备得到的石油降解菌剂。—种使用所述的石油降解菌剂修复石油污染土壤的方法，具体为:对石油污染土壤进行翻耕预处理，将石油降解菌剂以质量比1:20的投加量加入到石油污染土壤中，混匀；整个土壤修复过程中使土壤含水量保持在20%~30%。以下的实施例可以使本专业
的技术人员更全面的了解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1: 本实施例中的一种石油降解菌剂的制备方法，具体步骤如下: 1)将聚乙烯醇在80~10当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种石油降解菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1）将聚乙烯醇在80~100℃下完全溶解，与海藻酸钠溶液按比例混合均匀，得到海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液；2）向海藻酸钠与聚乙烯醇混合溶液中加入活性炭混匀，使活性炭浓度为5 g/L；3）将步骤2）得到的溶液冷却到40℃后，与石油降解菌液以10:1的体积比混匀；4）在0~4℃、搅拌条件下，用注射器将步骤3）得到的溶液滴入浓度30%的氯化钙饱和硼酸溶液，进行成球；5）将步骤4）得到的溶液置于4℃冰箱中静置26h后，将溶液中的微球取出，用灭菌后的0.9% NaCl溶液洗涤，得到固体微球形的石油降解菌剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵和平，孟帆，钟亮，温丽莲，张吟，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33