本发明专利技术公开了一株海洋石油降解菌、发酵所得化合物及其用途。命名为Alcanivorax dieselolei T6-6，保藏编号为：CGMCC NO：9033。γ-变形菌纲，海洋螺菌目，烷烃降解菌科，食烷菌属，柴油食烷菌种；该菌可用于石油烃的降解与清除，环境污染的治理，生产表面活性剂，降低水的表面张力等多种用途；该菌发酵后的次生代谢产物中分离得到一类化合物，其中一种为：dieseloleiT6-6，2-氨基-6-(N-2-羰基-4-十三烷基-环丁烷)己酸，为一种赖氨酸脂。该化合物对不同有机物有乳化活性，对革兰氏阳性细菌及真菌有抗菌抑菌作用，有较好的细胞毒活性。
【技术实现步骤摘要】
一株海洋石油降解菌、发酵所得化合物及其用途
本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及一株海洋石油降解菌、发酵所得化合物及其用途。
技术介绍
海洋微生物(marinemicroorganism)是海洋中个体微小，构造简单的低等生物的总称。包括细菌、真菌、放线菌、霉菌、酵母、病毒、衣原体、支原体、噬菌体和微型藻及微型原生动物等。90年代以前，关于海洋微生物次生代谢产物的化学研究报道很少，人们研究热点一直是陆生真菌资源；到了90年代以后，关于海洋微生物次生代谢产物的化学研究的报道显著增多；其中1998年和2000年发现的新化合物数目最多，海洋微生物来源的新化合物数目也在增加，许多化合物具有新的骨架，证明了海洋微生物具有独特的代谢和生理机制，是潜在的新化合物及药物先导化合物的丰富资源库。食烷菌(Alcanivorax)是海洋石油污染环境中重要的烷烃降解菌。目前在世界范围内从表层海水到深海沉积物中均分离或检测到了该属细菌的存在。该属目前已报道有6个种，第一个种AlcanivoraxborkumensisSK2是1998年由Yakimov等人分离获得的,产一种糖脂类表面活性剂,葡萄糖脂(一个葡萄糖残基连着四个3-OH脂肪酸)；从黄海表层海水分离的柴油食烷菌AlcanivoraxdieseloleiB-5，在以十六烷为唯一碳源的诱导培养基中均能将发酵液表面张力降低到30mN/m以下，经鉴定为脯氨酸酯(十六烷酸与脯氨酸脱水缩合形成的线性脂肽)。生物表面活性剂一般是由微生物(尤其是一些细菌和真菌)在一定培养条件下产生的代谢产物，通常为糖脂、磷脂、多糖脂复合物、脂蛋白-脂多肽、羟基化合物和交联脂肪酸等。生物表面活性剂的非极性疏水基团一般是长链脂肪酸或是β-羟基脂肪酸、α-烷基-β-羟基脂肪酸；而极性的亲水集团则有多种形式如糖类、氨基酸类、环状肽类、磷酸盐、醇等，它们一般都具有良好的降低表面张力和界面张力的性能。生物表面活性剂具有一些一般化学合成表面活性剂所没有的独特性能：一般具有较低的临界胶束浓度，用量少、高效；具有生物降解性，无毒，对环境友好；可应用于环保、化妆品、药物、食品添加剂；因其化合物性质稳定，故可应用于一些极端环境如高温、高盐、高pH值等；生物表面活性剂可分为糖脂、脂肽、脂蛋白、磷脂、脂肪酸、聚合物表面活性剂、粒状物表面活性剂。脂肽类生物表面活性剂的亲水基团由短肽或氨基酸组成，疏水基团由脂肪酸组成，一种脂肽往往是多种异构单体组成的混合体。由于脂肽中的脂肪酸链长和支链数量以及氨基酸的组成具有多变性，致使脂肽表面活性剂的种类繁多。具有代表性的脂肽有surfactin,lichenysin,fengycin,iturin,mycosubtilin及bacillomycin等。目前发现的脂肽主要来自Bacillus属，如B.subitilis、B.circulans、B.cereus、B.polymyxa、B.mesentericus等。除了Bacillus产生脂肽外，其他一些种类的微生物也产脂肽。例如Mycobacteriumfortuirum、Streptomycescanus、Pseudomonasfluorescens、Serratiamarcescens等。表1几种重要的微生物表面活性剂的来源和性质表脂肽微生物表面张力(mN/m)CMC界面张力(mN/m)Peptide-lipidB.licheniformis2712–200.1-0.3SerrawettinS.marcescens28–33//ViscosinP.fluorescens26.5150/SurfactinB.subtilis27–3223-1601
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株海洋石油降解菌菌株AlcanivoraxdieseloleiT6-6，为实现上述目的，本专利技术提供一株海洋石油降解菌AlcanivoraxdieseloleiT6-6，保藏编号为：CGMCCNO：9033。所述海洋石油降解菌AlcanivoraxdieseloleiT6-6的制备方法，其步骤为：取第20航次西南印度洋深海海水于三角瓶中,121℃,20min，加入预先高温高压灭菌的4.2g/dm3的原油和柴油混合物，按质量比1:1混合，优选加入量为50cm3深海海水中加入0.21g原油和柴油混合物；然后加入预先高温高压灭菌的终浓度为1g/dm3的NH4NO3，pH＝7.5,终浓度为1g/dm3的KH2PO4溶液和0.22μm滤膜过滤除菌的终浓度为0.4μg/dm3FeSO4溶液；取50cm3深海水样加入该三角瓶中,置于28℃,160r/min的摇床中避光培养；培养6d后,黑色油污状消失,从中取2cm3转接入相同的培养基中,共转接5次后，最后把富集物进行梯度稀释，涂布于2216L平板上；固体平板添加1.5％琼脂粉，分离单菌得到权利要求1的菌株。本专利技术还保护所述菌株的用途。所述菌株可用于石油烃的降解与清除，及其所述菌株用于石油烃的降解与清除的方法。所述菌株可用于环境污染的治理，及其所述菌株用于治理环境污染的方法。所述菌株可降低水的表面张力，及其所述菌株用于降低水表面张力的方法；任选的，所述菌株可用于生产生物表面活性剂，及其所述菌株用于生产表面活性剂的用途。所述菌株可用于革兰氏阳性细菌及真菌的抗菌抑菌，及其所述菌株用于革兰氏阳性细菌及真菌的抗菌抑菌的方法。所述菌株发酵可生产一类化合物，其特征在于，这类化合物的结构式如下：当n＝1时，分子式为C18H34N2O3，分子量为326，命名为2-氨基-6-(N-2-氧代-4-壬基-环丁烷)己酸；当n＝2时，分子式为C20H38N2O3，分子量为354，命名为2-氨基-6-(N-2-氧代-4-十一烷基-环丁烷)己酸；当n＝3时，分子式为C22H42N2O3，分子量为382，命名为2-氨基-6-(N-2-氧代-4-十三烷基-环丁烷)己酸，又叫赖氨酸脂dieseloleiT6-6；当n＝4时，分子式为C24H46N2O3，分子量为410，命名为2-氨基-6-(N-2-氧代-4-十五烷基-环丁烷)己酸。所述的化合物赖氨酸脂dieseloleiT6-6，分子式为C22H42N2O3，是通过所述的菌株发酵制备得到，其结构式为:所述的赖氨酸脂dieseloleiT6-6用于乳化有机物和革兰氏阳性细菌及真菌的抗菌抑菌的用途；及其所述赖氨酸脂dieseloleiT6-6用于乳化有机物和革兰氏阳性细菌及真菌的抗菌抑菌的方法。菌株AlcanivoraxdieseloleiT6-6和菌株AlcanivoraxdieseloleiB-5(AY683537)都具有烷烃降解能力和降低液体表面张力的能力。菌株A.dieseloleiB-5现已作为Alcanivorax属dieselolei种的模式菌株被鉴定,其在中国海洋微生物菌种保藏管理中心(MarineCultureCollectionofChina；MCCC)的保藏编号为1A00001。此菌株有非常好的柴油和烷烃降解效果，在以正十六烷为唯一碳源的MSM培养基中生长良好并能将发酵液的表面张力降至31mNm-1左右，是产生表面活性剂的菌株之一。方法步骤见文献(LiuCandShaoZ.Alcanivorax本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株海洋石油降解菌Alcanivorax dieselolei T6‑6，保藏编号为：CGMCC NO：9033。
【技术特征摘要】
1.一株海洋石油降解菌柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6，保藏编号为：CGMCCNO：9033。2.权利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于石油烃的降解与清除的用途。3.权利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于环境污染的治理的用途。4.权利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于降低水的表面张力的用途。5.权利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于生产生物表面活性剂的用途。6.权利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6用于制备革兰氏阳性细菌及真菌的抗菌抑菌的药物的用途。7.一种由权利要求1所述柴油食烷菌(Alcanivoraxdieselolei)T6-6发酵生产的一类化合物，其特征在于，这类化合物的...
【专利技术属性】
技术研发人员：邵宗泽，史小满，王万鹏，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，中国大洋矿产资源研究开发协会，
类型：发明
国别省市：福建;35
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