一株耐盐多环芳烃降解菌Tzyjm及其在海洋污染环境中的应用制造技术

一株耐盐的多环芳烃降解菌，其特征在于，该菌株为半乳糖地霉Galactomyces geotrichum Tzyjm，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NO:M 2014625，具备在高盐环境下降解多环芳烃的能力。本发明专利技术具有以下优点：本发明专利技术提供的Tzyjm对高盐环境中的多环芳烃有快速降解能力，且降解底物范围广，在短时间内降解率高。由于该菌具有耐高盐作用，使其在海洋等高盐环境中多环芳烃的修复中具有广阔的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
一株耐盐多环芳烃降解菌Tzyjm及其在海洋污染环境中的应用
本专利技术属于环境工程和微生物工程
，尤其涉及一株耐盐多环芳烃的半乳糖地霉(Galactomycesgeotrichum)Tzyjm及在多环芳烃污染环境修复中的应用
技术介绍
多环芳烃(PAHs)是一类持久性有机污染物(POPs)。海洋环境中PAHs的来源主要是海底原油渗漏、海上运输、油轮事故、油井渗漏、陆源入海污染等。随着人类海洋活动的日益频繁，PAHs污染水平呈现逐年加重趋势。苯并芘、芘、苯并荧蒽等强致癌的高分子量PAHs都有检出。PAHs通过黏附于海洋沉积物经年累月地在海洋中积累，会在海洋生物体内会富集放大，对高营养级生物造成危害。在受PAH污染的海域进行渔业养殖，其产品的食用品质会受到严重影响，一旦被人体摄入则会严重危害健康。多环芳烃(PAHs)污染修复是当前环境修复中研究的热点。微生物降解是对PAHs污染土壤进行修复的重要途径之一。对于多环芳烃污染，国内外进行了大量多环芳烃降解微生物的筛选工作。到目前为止，已分离出多个具有多环芳烃降解能力的菌株，如假单胞菌属(PseudomonasputidaG7)、分枝杆菌属(MycobacteriumvanbaaleniiPYR-1)、芽孢杆菌属(Bacillussp.P1)等。传统分离出的多环芳烃降解菌在遇到高盐环境时，会抑制微生物的代谢作用，从而使微生物失去降解能力，并且由于条件限制，一般海洋等高盐环境在进行多环芳烃降解时不会进行脱盐处理，因此在实际应用中，筛选出耐盐降解菌为高盐环境多环芳烃生化降解提供了可行性。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中多环芳烃降解菌不耐高盐的不足之处，提供一种降解多环芳烃菌株，该菌株可以应用于海洋等高盐环境中多环芳烃的污染治理。为达到上述目的，本专利技术是通过以下技术方案得以实现的：本专利技术提供的半乳糖地霉(Galactomycesgeotrichum)，命名为GalactomycesgeotrichumTzyjm，于2014年12月4日保藏于“中国典型培养物保藏中心”，其保藏号CCTCCNO:M2014625。地址：中国武汉武汉大学。所述菌株具有以多环芳烃为唯一碳源和能源进行生长的能力。所述降解多环芳烃的菌株在被多环芳烃污染的海洋等高盐环境的生物修复中的应用。所述菌株的ITS序列如SEQNO.1所示。利用所述耐盐的多环芳烃降解菌进行海洋等高盐环境生物修复的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：选取浙江台州湾的滩涂围塘养殖沉积泥100g，半乳糖地霉(Galactomycesgeotrichum)Tzyjm按质量百分比2.0％与沉积泥均匀，加水使泥土含水率保持在15％，放入恒温振荡器中，控制培养温度在20℃的恒温条件下，振荡培养修复5天至20天。Tzyjm是从浙江省台州市的滩涂围塘养殖沉积泥中分离并筛选得到。本专利技术Tzyjm可在15～30℃，pH值5.0～6.5培养条件下较好生长；菌株在YEPD平板上培养一天开始有白色菌落出现，培养两天后可以观察到菌丝，菌丝无色，匍匐状。三天后可以观察到分生孢子，分生孢子梗直立、疏松，很短呈绒毛状，顶端生长成串的分生孢子。分生孢子短圆筒形，两端平切，无色。作为优选，本专利技术所述菌株能以多环芳烃为唯一碳源和能源生长。上述耐高盐多环芳烃降解菌的筛选方法，可按如下步骤依次实施：(1)从滩涂围塘养殖沉积泥距地表下5～20cm处取表层泥土，作为菌源进行富集培养；所述富集培养基含有：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、MgSO4、多环芳烃(包括但不限于萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘)；(2)取(1)中所述富集培养液接种于液体无机盐选择培养基中进行选择培养，所无机盐选择培养基含有：NaCl、MgCl2﹒6H2O、Na2SO4、CaCl2﹒2H2O、TAPSO、KCl、NH4Cl、Na2HPO4﹒7H2O、NaBr、NaHCO3、H3BO3、SrCl2﹒6H2O、NaF、FeCl2﹒4H2O，将pH调至7.6(此为模拟天然海水组成的培养基)；添加多环芳烃(多环芳烃萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘的浓度均为150mg/L～250mg/L；)；(3)取(2)中所述选择培养物稀释涂布于固体无机盐选择培养基上，进行分离即得到多环芳烃降解菌Tzyjm。上述多环芳烃降解菌Tzyjm可用于海洋等高盐环境中多环芳烃的生物修复。本专利技术Tzyjm可在15～30℃，pH值5.0～6.5培养条件下较好生长；菌株在YEPD平板上培养一天开始有白色菌落出现，培养两天后可以观察到菌丝，菌丝无色，匍匐状。三天后可以观察到分生孢子，分生孢子梗直立、疏松，很短呈绒毛状，顶端生长成串的分生孢子。分生孢子短圆筒形，两端平切，无色。Tzyjm在YEPD(葡萄糖：0.5％～4.0％；胰蛋白胨：0.5％～4.0％；半乳糖地霉粉：0.5％～3.0％)培养培养一天开始有白色菌落出现，培养两天后可以观察到菌丝，菌丝无色，匍匐状。三天后可以观察到分生孢子，分生孢子梗直立、疏松，很短呈绒毛状，顶端生长成串的分生孢子。分生孢子短圆筒形，两端平切，无色。Tzyjm的ITS基因的PCR扩增、测序由上海美吉生物公司完成，得到了长度为584bp的序列。选择同源性大于97％的基因序列进行系统发育分析，表明菌株与GalactomycesgeotrichumLMA-317同源性最高，结合菌株形态、菌落特征，鉴定菌株属于半乳糖地霉(Galactomycesgeotrichum)。本专利技术Tzyjm既可以在营养培养基，如：YEPD、马铃薯葡萄糖培养基、查氏培养基中生长，又可在以多环芳烃为唯一碳源、能源的无机盐基础培养基中生长。综上所述，本专利技术具有以下优点：本专利技术提供的Tzyjm对高盐环境中的多环芳烃有快速降解能力，且降解底物范围广，在短时间内降解率高。由于该菌具有耐高盐作用，使其在海洋等高盐环境中多环芳烃的修复中具有广阔的应用潜力。拉丁文名：GalactomycesgeotrichumTzyjm保藏单位：中国典型培养物保藏中心地址：中国武汉武汉大学保藏日期：2014年12月4日保藏编号：CCTCCNO:M2014625。附图说明图1为Tzyjm对污染滩涂围塘养殖沉积泥中的多环芳烃的降解率具体实施方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步具体的说明，但是本专利技术并不限于这些实施例。实施例1本专利技术提供的Tzyjm的分离筛选方法。从滩涂围塘养殖沉积泥距地表下5～20cm处取表层泥土，作为菌源进行富集培养，将葡萄糖10g，胰蛋白胨10g，萘60mg、菲60mg、荧蒽60mg、芘60mg、苯并蒽60mg、苯并芘60mg；加入到一定量的蒸馏水中，滤膜除菌，在此培养基上培养二天。再配制模拟天然海水组成的培养基，将22.79gNaCl、11.18gMgCl2﹒6H2O、3.98gNa2SO4、1.46gCaCl2﹒2H2O、1.30gTAPSO、0.72gKCl、0.27gNH4Cl、89.00mgNa2HPO4﹒7H2O、83.00mgNaBr、31.00mgNaHCO3、27.00mgH3BO3、24.00mgSrCl2﹒6H2O、2.60mgNaF、2.00mgFeCl2﹒4H2O加入800mL蒸馏水中，加入萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株耐盐的多环芳烃降解菌，其特征在于，该菌株为半乳糖地霉Galactomyces geotrichum Tzyjm，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NO:M 2014625，具备在高盐环境下降解多环芳烃的能力。

【技术特征摘要】
1.一株耐盐的多环芳烃降解菌，其特征在于，该菌株为半乳糖地霉GalactomycesgeotrichumTzyjm，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCNO:M2014625，具备在高盐环境下降解多环芳烃的能力。2.根据权利要求1所述耐盐的多环芳烃降解菌在海洋多环芳烃污染环境的生物修复中的应用。3.利用权利要求1所述耐盐的...

【专利技术属性】
技术研发人员：于红艳，张昕欣，吴翰桂，奚立民，
申请(专利权)人：台州职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33