辅助诊断结核病的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种辅助诊断结核病的试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒，包括特异抗体组合物；所述特异抗体组合物包括如下五种抗体：(1)IFN-γ抗体；(2)TNF-α抗体；(3)IL-2抗体；(4)MIG抗体；(5)IP-10抗体。本发明专利技术的试剂盒可以区分结核分枝杆菌感染者与BCG接种者。与ELISPOT结核病诊断方法相比，基于多重分子标识物检测的结核病诊断试剂盒诊断活动性结核病的敏感性明显提高(从72％提高到89％)，正常健康人阳性率明显降低(从27％下降到16％)。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种辅助诊断结核病的试剂盒。
技术介绍
目前结核病的诊断还存在很多问题。痰涂片抗酸染色在肺结核诊断上有比较高的特异性，但敏感性低，约为15%-30%。结核分枝杆菌培养需要2-6周，技术较复杂、费用高、 时间长。基于PCR的方法具有简单、快速和敏感性高等特点，但结果受诸多因素影响，稳定性差，不宜单独用于结核病的诊断。X线检查在结核病的诊断上有比较重要的参考价值，但在很多情况下与其他疾病的鉴别诊断还比较困难，特别是不典型病变。血清学诊断方法(如ELISA)具有简单快速的优点，易于推广应用，是目前研究比较多的结核病诊断方法之一，但该方法在结核病诊断的特异性和敏感性方面还有待提高。对血清学诊断方法的系统分析显示，现有商品化血清学试剂诊断肺结核的敏感性在 10%到90%之间，特异性介于47%至100% ；菌阳病人诊断的敏感性和特异性明显高于菌阴患者；肺外结核诊断的敏感性在0%到100%之间，特异性为59% -100% ；说明这些血清学诊断试剂对肺结核，特别是肺外结核的诊断价值有限(Meingart KR, HenryM, Laal S et al. Commercial serological antibody detection tests for thediagnosis of pulmonary tuberculosis :a systematic review. PLOS Medicine 2007a，4 (6) :e202.； Steingart KR，Henry M，Laal S et al. A systematic review ofcommercial serological antibody detection tests for the diagnosis ofextrapulmonary tuberculosis. Thorax 2007b,62 (10) :911-918.)。基于细胞免疫反应的ELISP0T(enzyme-linked immunospot assay)诊断结核病是近年的重大突破，它主要通过检测抗原诱导的IFN-Y分泌来诊断结核病，同以往方法相比具有很好的特异性和敏感性。但该方法基于单一细胞因子的分泌，受影响因素比较多，有报道显示，其诊断活动性结核病的敏感性只有64% (Dewm PK，GrinsdaleJ，Kawamura LM. Low sensitivity of a whole-blood interferon-gamma release assayfor detection of active tuberculosis. Clinical Infectious Diseases 2007，44 :74-77.)。因此，建立更加敏感和特异的结核病诊断新方法是临床上急需的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助诊断结核病的试剂盒。本专利技术提供的辅助诊断结核病的试剂盒，包括特异抗体组合物；所述特异抗体组合物包括如下五种抗体(1) IFN- γ抗体；(2) TNF- α抗体；(3) IL-2抗体；(4) MIG抗体；(5) IP- ο抗体。所述试剂盒还可包括抗原刺激物；所述抗原刺激物为结核分枝杆菌ESAT-6抗原和/或结核分枝杆菌CFP-10抗原。所述结核分枝杆菌ESAT-6抗原具体可为序列表的序列 1至序列4所示的多肽中的至少一种；所述结核分枝杆菌CFP-10抗原具体可为序列表的序列5至序列9所示的多肽中的至少一种。序列1 :MTEQQWNFAGIEAAASAIQG ；序列 2 :WNFAGIEAAASAIQGNVTSIHS ；序列3 EGKQSLTKLAAAffGGSGSEA ；序列 4 TATELNNALQNLARTISEAG ；序列5 :FERISGDLKTQIDQVESTAG ；序列 6 GQffRGAAGTAAQAAVVRFQEAANKQK ；序列7 GQffRGAAGTAAQAAVVRFQE ；序列 8 :AQAAVVRFQEAANKQKQELD ；序列9:E ISTNIRQAGVQYSRADEEQ。所述特异抗体组合物由捕获抗体和检测抗体组成；所述捕获抗体由包被IFN-Y 抗体的微球、包被TNF- α抗体的微球、包被IL-2抗体的微球、包被MIG抗体的微球和包被 ΙΡ-10抗体的微球组成；所述检测抗体由生物素标记的IFN-Y抗体、生物素标记的TNF-α 抗体、生物素标记的IL-2抗体、生物素标记的MIG抗体和生物素标记的ΙΡ-10抗体组成；所述抗原刺激物由序列表的序列1至序列9所示的多肽组成。所述试剂盒具体可由所述特异抗体组合物、所述抗原刺激物和PE标记的链霉亲和素组成。本专利技术还保护一种抗原刺激物，由序列表的序列1至序列9所示的多肽组成。本专利技术同时保护一种特异抗体组合物，包括如下五种抗体= (I)IFN-Y抗体；(2) TNF-α抗体；C3) IL-2抗体；(4)MIG抗体； ΙΡ-10抗体。所述的特异抗体组合物具体可由IFN- γ抗体、TNF- α抗体、IL-2抗体、MIG抗体和ΙΡ-10抗体组成。所述抗原刺激物和/或所述特异抗体组合物可用于制备辅助诊断结核病的试剂品.ο上述所有抗体可为商业途径获得的单克隆抗体或多克隆抗体，也可为体外培养分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞获得的单克隆抗体。本专利技术的试剂盒的诊断原理如下首先从病人外周血分离淋巴细胞，用结核分枝杆菌特异性抗原刺激，如果出现抗原特异性的T细胞激活反应，产生细胞因子等分子标识物，说明机体受到结核分枝杆菌的感染。五种细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2, MIG和 ΙΡ-10)中，如果2个细胞因子的浓度与正常健康人具有显著差异，则该样本很有可能来自活动性结核病人。现在广泛接种的结核预防性疫苗为BCG(卡介苗)。由于BCG疫苗与结核分枝杆菌抗原存在差异，可以采用只在结核分枝杆菌表达而BCG缺乏的抗原及其多肽刺激，所以本专利技术的试剂盒可以区分结核分枝杆菌感染者与BCG疫苗接种者。与ELISP0T结核病诊断方法相比，基于多重分子标识物检测的结核病诊断试剂盒诊断活动性结核病的敏感性明显提高(从72%提高到89% )，正常健康人阳性率明显降低 (从27%下降到16% )。附图说明图1为结核病人和健康对照人PBMC经特异抗原刺激后培养上清IFN-Y浓度检测结果分析点图。图2为结核病人和健康对照人PBMC经特异抗原刺激后培养上清TNF- α浓度检测结果分析点图。图3为结核病人和健康对照人PBMC经特异抗原刺激后培养上清IL-2浓度检测结果分析点图。图4为结核病人和健康对照人PBMC经特异抗原刺激后培养上清IP-10浓度检测结果分析点图。图5为结核病人和健康对照人PBMC经特异抗原刺激后培养上清MIG浓度检测结果分析点图。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1、试剂盒的制备试剂盒由包被抗体的微球混合物、生物素标记抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．辅助诊断结核病的试剂盒，包括特异抗体组合物；所述特异抗体组合物包括如下五种抗体：（１）ＩＦＮ－γ抗体；（２）ＴＮＦ－α抗体；（３）ＩＬ－２抗体；（４）ＭＩＧ抗体；（５）ＩＰ－１０抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程小星，王心静，蒋静，曹志红，
申请(专利权)人：程小星，王心静，蒋静，曹志红，
类型：发明
国别省市：11