本发明专利技术涉及一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法，其主要技术特点是采用渤海湾广泛分布的低值贝类-泥螺作为糖胺聚糖的提取原材料，其提取制方法为：将泥螺去壳后称重，加水制成匀浆液，在匀浆液中加入胰蛋白酶酶解，将酶解液离心除去沉淀，上清液加双氧水脱色，离心，调pH值，离心除去酸性、中性蛋白质，上清液醇沉，得粗糖胺聚糖粗品，得率为1.22％，粗品加超纯水溶解，超滤，醇沉，加入CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，离心，将沉淀溶于NaCl溶液中，得解离液，再超滤、醇沉，回收较高纯度糖胺聚糖。本方法反应条件温和、糖胺聚糖得率及纯度高，与其他贝类的糖胺聚糖提取相比，工艺简化，时间缩短，得到的糖胺聚糖纯度可达90％。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程领域，涉及糖胺聚糖，尤其是。
技术介绍
目前糖胺聚糖(GAG)的提取方法主要有三种第一非降解法，指用水或盐溶液从动、植物组织中提取糖胺聚糖的方法；第二碱提取法，基于蛋白多糖中糖肽键对碱的不稳定性，用碱提法使糖与蛋白质分开；第三酶降解法，蛋白酶将蛋白聚糖的蛋白质部分降解，使糖链得到分离，三种方法中以酶降解法效果最好，因其条件温和，且符合目前节能减排的需要。然而，即使同属于酶降解法，由于不同提取材料所含的糖胺聚糖的组成、含量和功能活性不同，提取方法有异，况且还需考虑到生产上的推广应用。本专利技术选取渤海湾最常见的低值贝类-泥螺为原材料，提取，分离，纯化糖胺聚糖，以期为医药、保健品行业提供优质原材料，为海珍动物养殖提供优良的免疫增强剂。通过检索，发现如下三篇与本专利申请相关的公开专利文献1、本专利技术提供了一种生产包括糖胺聚糖的组合物的方法(CN1021M032A)，所述的方法包括利用膜吸附器形式层析基质将包括糖胺聚糖的动物材料勻浆进行层析。2、一种具有血管保护效应的活性物质——椅孔扇贝糖胺聚糖的提取制备方法(CN1746191)，其提取制备工艺如下将栉孔扇贝内脏团称重，加水制成勻浆液，在勻浆液中加入蛋白酶，加热反应得酶解液；将酶解液在离心机中离心，弃去沉淀物，对离心液加二次乙醇溶液，形成沉淀；将分离后的沉淀物加蒸馏水配成水溶液后加热并加入活性炭，冷却后经离心，收集上清液，对上清液抽滤，得清液；将清液用滤膜超滤，得分子量为证 IOOk的滤液；将滤液冷冻干燥即制得栉孔扇贝糖胺聚糖。该方法操作简单、反应条件温和、成本低廉、得率及纯度高，在提取糖胺聚糖的同时还可大量回收蛋白质，有利于栉孔扇贝内脏团的综合利用，提取的物质对于防治心脏血管性疾病有重要价值。3、一种玉足海参糖胺聚糖的提取方法(CN1016M426)，方法一、玉足海参粉与纯化水混合，经酶解和离心后得沉淀A ；二、沉淀A与纯化水混合，经加热、和离心后得沉淀B ；三、沉淀B与纯化水混合，离心取沉淀用纯化水溶解，经离心和洗涤得沉淀C ；四、 沉淀C与缓冲液混合，经层析、洗涤、洗脱和离心后得沉淀D ；五、沉淀D与生理盐水混合，经离心后得沉淀E ；六、沉淀E与注射用水混合，透析或超滤截流后取固相产物，冷冻干燥后即得。本专利技术提取的玉足海参糖胺聚糖质量纯度高达93 % 99 %，能够直接用于制备注射剂。通过比对，上述公开专利文献的技术方案及提取客体均与本专利申请有本质的不同，本专利申请具有新颖性。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种从泥螺中提取高纯度糖胺聚糖的方法，该方法的原料来源充足、提取成本低，为满足医药、保健品行业及海珍动物养殖业的广泛应用提供了可能。本专利技术是通过如下技术方案实现的—种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法，提取包括以下步骤(1)原料处理将泥螺去壳，软体部分洗净后，加入2-2. 5倍体积的蒸馏水勻浆，形成勻浆液；(2)酶解向上述勻浆液中加胰蛋白酶，在45°C水浴条件下酶解7-8小时，酶解液煮沸灭酶后，4000r/min离心lOmin，取上清液；(3)脱色加入双氧水脱色；(4)调pH值去沉淀先用HCl调pH至2.0，离心除去沉淀；再用NaOH调pH至7. 0， 离心除去沉淀；(5)醇沉法提取粗糖胺聚糖上清液在不断搅拌下缓缓加入乙醇至醇含量为 60%，于4°C条件下静置M小时，移去上清液，4000r/min离心IOmin后回收粗糖胺聚糖；(6)超滤将粗糖胺聚糖溶于蒸馏水，配成糖液，4000r/min离心IOmin除去不溶物后进行超滤；(7)溶液络合后解离加入3倍体积的5%CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，40°C下沉淀1-2小时，8000r/min离心30min，收集沉淀，40°C下将沉淀溶于2mol/L的NaCl溶液， 使GAG-CTAB络合物解离，形成解离液；(8)醇沉、超滤、再醇沉上述解离液加入乙醇，使醇量达60%，8000r/min离心 lOmin，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水，用中空纤维膜超滤，在超滤后的溶液中加入乙醇-乙酸钠试剂，使醇量达60%，按醇沉法回收糖胺聚糖，将沉淀物烘干，即制得纯泥螺糖胺聚糖。而且，所述步骤O)中胰蛋白酶的添加量为勻浆液总重量的0. 8_1%。而且，所述步骤(3)中双氧水的添加量为上清液重量的6-8%。本专利技术的优点和积极效果是1、本方法反应条件温和、糖胺聚糖得率及纯度高，与其他贝类的糖胺聚糖提取相比，工艺简化，时间缩短。2、本方法采用泥螺作为提取客体，泥螺是渤海湾常见的低值贝类，原材料成本低， 而糖胺聚糖得率不降低，大大降低了提取成本。3、本方法在提取糖胺聚糖的同时还可大量回收蛋白质，有利于泥螺的综合利用， 所提取的糖胺聚糖对于清除自由基、抗氧化及抗凝血具有重要作用；所得的糖胺聚糖还可为海珍动物养殖业提供优良的免疫增强剂。具体实施例方式下面结合实施例，对本专利技术进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的， 不能以下述实施例来限定本专利技术的保护范围。本实施例所采用的提取客体是选自渤海湾广泛分布的低值贝类-泥螺。，包括以下步骤(1)原料处理将泥螺去壳，软体部分洗净后，加入2-2. 5倍体积的蒸馏水勻浆，形成勻浆液；(2)酶解向上述勻浆液中加胰蛋白酶，该胰蛋白酶的添加量为勻浆液总重量的0. 8-1% ；在45°C水浴条件下酶解7-8小时，酶解液煮沸灭酶后，4000r/min离心lOmin，取上清液；(3)脱色加入双氧水脱色，双氧水的添加量为上清液重量的6-8% ；(4)调pH值去沉淀先用HCl调pH至2. 0，离心除去沉淀；再用NaOH调pH至7. 0， 离心除去沉淀；(5)醇沉法提取粗糖胺聚糖上清液在不断搅拌下缓缓加入乙醇至醇含量为 60%，于4°C条件下静置M小时，移去上清液，4000r/min离心IOmin后回收粗糖胺聚糖，得率为1. 22% ；(6)超滤将粗糖胺聚糖溶于蒸馏水，配成1 %糖液，4000r/min离心IOmin除去不溶物后进行超滤；(7)溶液络合后解离加入3倍体积的5%重量浓度的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，40°C下沉淀1-2小时，8000r/min离心30min，收集沉淀，40°C下将沉淀溶于2mol/L的 NaCl溶液，使GAG-CTAB络合物解离，形成解离液；(8)醇沉、超滤、再醇沉上述解离液加入乙醇，使醇量达60%，8000r/min离心 lOmin，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水，用中空纤维膜超滤，在超滤后的溶液中加入乙醇-乙酸钠试剂，使醇量达60%，按醇沉法回收糖胺聚糖，将沉淀物烘干，即制得纯泥螺糖胺聚糖。 通过检验，得到的糖胺聚糖纯度可达90%。本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法，其特征在于：提取包括以下步骤：（１）原料处理：将泥螺去壳，软体部分洗净后，加入２－２．５倍体积的蒸馏水匀浆，形成匀浆液；（２）酶解：向上述匀浆液中加胰蛋白酶，在４５℃水浴条件下酶解７－８小时，酶解液煮沸灭酶后，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液；（３）脱色：加入双氧水脱色；（４）调ｐＨ值去沉淀：先用ＨＣｌ调ｐＨ至２．０，离心除去沉淀；再用ＮａＯＨ调ｐＨ至７．０，离心除去沉淀；（５）醇沉法提取粗糖胺聚糖：上清液在不断搅拌下缓缓加入乙醇至醇含量为６０％，于４℃条件下静置２４小时，移去上清液，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后回收粗糖胺聚糖；（６）超滤：将粗糖胺聚糖溶于蒸馏水，配成１％糖液，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ除去不溶物后进行超滤；（７）溶液络合后解离：加入３倍体积的５％ＣＴＡＢ（十六烷基三甲基溴化铵），４０℃下沉淀１－２小时，８０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，收集沉淀，４０℃下将沉淀溶于２ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液，使ＧＡＧ－ＣＴＡＢ络合物解离，形成解离液；（８）醇沉、超滤、再醇沉：上述解离液加入乙醇，使醇量达６０％，８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水，用中空纤维膜超滤，在超滤后的溶液中加入乙醇－乙酸钠试剂，使醇量达６０％，按醇沉法回收糖胺聚糖，将沉淀物烘干，即制得纯泥螺糖胺聚糖。...
【技术特征摘要】
1.一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法，其特征在于提取包括以下步骤(1)原料处理将泥螺去壳，软体部分洗净后，加入2-2.5倍体积的蒸馏水勻浆，形成勻浆液；(2)酶解向上述勻浆液中加胰蛋白酶，在45°C水浴条件下酶解7-8小时，酶解液煮沸灭酶后，4000r/min离心lOmin，取上清液；(3)脱色加入双氧水脱色；(4)调pH值去沉淀先用HCl调pH至2.0，离心除去沉淀；再用NaOH调pH至7. 0，离心除去沉淀；(5)醇沉法提取粗糖胺聚糖上清液在不断搅拌下缓缓加入乙醇至醇含量为60%，于 4°C条件下静置M小时，移去上清液，4000r/min离心IOmin后回收粗糖胺聚糖；(6)超滤将粗糖胺聚糖溶于蒸馏水，配成糖液，4000r/min离心IOmin除去不溶物后进行超滤；(7)溶液络合后解离加入3倍...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔青曼，袁春营，许江鹭，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：12
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