使君子提取物及其提取方法技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体涉及使君子提取物及其提取方法。该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，再加上乙醇回流提取、水提、抽滤、离心、过DEAE柱分离纯化、真空浓缩和雾化干燥，获得多糖纯度较高的使君子提取物。获得的使君子多糖的纯度在72.7～78.2％，多糖分子量为21800～38900D。药效试验表明，本发明专利技术提供的使君子提取物对S180肉瘤均具有抑制作用，对移植性肝癌H22小鼠生命均有延长作用，可以用于制备抑制肿瘤的药物和/或保健品；同时提高了对蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的治疗效果，可以用于制备治疗蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的药物和/或保健品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及。
技术介绍
使君子(Quisqualicindica L)为使君子科(Combretaceae)使君子属(Quisqualis)植物，落叶攀援状灌木，生于平地、山坡、路旁等向阳灌丛中，主要分布于东南亚以及我国福建、台湾、四川、广东、广西等地。《本草纲目》记载，该植物的果实、根、叶均可入药，具有杀虫、消积、健脾的作用，临床常用于治蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢等等。 现代研究表明，使君子中主要含有氨基酸、单宁、多糖及其甙类、生物碱、挥发油、蒽醌、留体、香豆素和萜类化合物。其中，使君子种仁含使君子氨酸约0. 5%，以使君子酸钾形式存在；还含有脂肪油23. 9 %，油中含油酸48. 2 %，棕榈酸29. 2%，硬脂酸9. 1%，肉豆蘧酸4. 5%及花生酸、留醇等。临床上常将使君子水煎或炒制后服用，无法有效提取利用使君子中多糖成分，因此，提供一种使君子提取物及从使君子中提取多糖的方法，并将该使君子提取物用于制备治疗肿瘤的药物和/或保健品，具有现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种。该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，获得的使君子提取物中多糖的纯度为72. 7 78. 2%。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案本专利技术提供了一种使君子提取物的提取方法，包括步骤I :将使君子果实粉碎过20 80目筛后，乙醇回流，收集剩余物得到使君子粗粉；所述乙醇回流为以kg/L计，在得到的使君子粉中按照质量体积比I : 2 5加入95%乙醇溶液，60 80°C回流提取2 4h ;步骤2 :将步骤I所述使君子粗粉按照步骤I所述乙醇回流I 3次，收集沉淀得到使君子细粉；步骤3 :在步骤2所述的使君子细粉中加入重量比为I : 8 15的水，加热至50 60°C浸泡2 4h，用酸调节pH值至3. 5 4. 0，每kg所述使君子细粉中分别加入8 160万IU的纤维素酶和8 80万IU的果胶酶，在40 45°C酶解6 8h后，得到使君子酶解液；步骤4 :将步骤3所述的使君子酶解液在90 100°C下浸提I 2h，抽滤后得到第一滤液，收集滤渣，以kg/L计，加入质量体积比为I : 3 5的水，在90 100°C浸泡I 2h后抽滤，得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液，得到使君子滤液，将所述使君子滤液离心后收集上清液，用碱调节pH值至5. 5 6. 8，过DEAE柱分离纯化，收集洗脱液浓缩后，雾化干燥，制得使君子提取物。纤维素酶是一种复合酶，主要由外切￠-葡聚糖酶、内切￠-葡聚糖酶和￠-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶活力。内切葡聚糖酶随机切割纤维素多糖链内部的无定型区，产生不同长度的寡糖和新链的末端。外切葡聚糖酶作用于这些还原性和非还原性的纤维素多糖链的末端，释放葡萄糖或纤维二糖。β-葡萄糖苷酶可以将纤维二糖、纤维三糖及其他低分子纤维糊精分解为葡萄糖。果胶酶，分解果胶的一个多酶复合物，通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶，通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。天然的果胶质在原果胶酶作用下，转化成水可溶性的果胶；果胶被果胶甲酯水解酶催化去掉甲酯基团，生成果胶酸；果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。果胶酶可以由黑曲霉(AspergiIlusniger)经发酵精制而得，对分解果胶具有良好的作用。作用pH值为2. 5 6. 0，最适作用PH值为3. 5 4. 5。鉴于此，本专利技术酶解反应采用纤维素酶和果胶酶共同对使君子进行酶解，是使君子破壁，有利于提取细胞内多糖。为了保证酶解在纤维素酶和果胶酶的最适条件下进行，本专利技术提供的提取方法步骤3中用酸调节pH值，所述酸选自磷酸、柠檬酸、盐酸、硫酸中的一种或两种以上的混合酸。 为了将使君子滤液中固液分离，本专利技术提供的提取方法步骤4中的离心为在6000 8000r/min的条件下离心10 15min。DEAE凝胶吸附针对性强，解析性能好，回收率高，因此本专利技术采用DEAE纤维素层析柱分离纯化使君子抽滤、离心后的上清液。为了达到过DEAE柱分离纯化的最佳效果，本专利技术提供的提取方法用碱调节步骤4中离心后的上清液的pH值，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠、氨水中的一种或两种以上的混合碱。作为优选，所述步骤4中的过DEAE柱分离纯化为在浓度为10 50mmol/L、pH值为5. 5 6. 8的磷酸缓冲溶液和O. lmol/L的氯化钠溶液以流速为5mL/min进行洗脱。作为优选，所述步骤4中浓缩为在真空度为-O. 10 -O. 08MPa、温度为60 70°C的条件下进行真空浓缩。作为优选,所述步骤4中雾化干燥为在进料温度为50 80°C,进风温度为160 200°C，出风温度为70 100°C，喷头气压为O. I O. 2MPa，进料速度为20 50mL/min的条件下进行雾化干燥。作为优选，本专利技术还提供了由上述提取方法获得的使君子提取物。作为优选，本专利技术提供的使君子提取物中使君子多糖的浓度为72. 7 78. 2%。此外，本专利技术还提供了上述提取方法制得的使君子提取物在制备抑制肿瘤，治疗蛔虫腹痛、小儿疳积、乳食停滞、腹胀、泻痢的药物和/或保健品中的应用。本专利技术提供了使君子提取物的提取方法，该方法利用生物酶解技术从使君子中提取多糖，再加上乙醇回流提取、水提、抽滤、离心、过DEAE柱分离纯化、真空浓缩和雾化干燥，获得多糖纯度较高的使君子提取物。获得的使君子多糖的纯度在72. 7 78. 2%，多糖分子量为21800 38900D。药效试验表明，本专利技术提供的使君子提取物对S18tl肉瘤均具有抑制作用，对移植性肝癌H22小鼠生命均有延长作用，可以用于制备抑制肿瘤的药物和/或保健品；与阳性药物对照组相比，本专利技术提供的使君子提取物提高了对蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的治疗效果，可以应用于制备治疗蛔虫腹痛，小儿疳积，乳食停滞，腹胀，泻痢的药物和/或保健品。具体实施方式本专利技术公开了一种，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术实施例I本专利技术提供的使君子提取物将晒干的使君子果实用清水清洗干净后，去壳，取2. Okg用粉碎机进行粉碎，过20目筛网，得到使君子粉，称取I. Okg使君子粉装入圆底烧瓶中，加入的95%乙醇3. 0L，放置80°C的水浴中，装上冷却装置后，打开冷却开关，加热回流提取2h，收集剩余物，再加入95%的乙醇3. 0L,回流提取得到使君子粗粉，重复乙醇回流I次，收集沉淀物晾干，得到使 君子细粉。取晾干的使君子细粉O. 5kg，加水6. 00L，加热升温至50°C浸泡提取3h，冷却至室温，用lmol/L的柠檬酸调pH值至3. 5，每kg使君子粉中加入8万IU的纤维素酶和8万IU的果胶酶，控制温度为40°C的水浴中进行酶解，酶解时间为6h，在酶解过程中使酶解液的PH值保持3. 5。酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种使君子提取物的提取方法，其特征在于，包括：步骤１：将使君子果实粉碎过２０～８０目筛后，乙醇回流，收集剩余物得到使君子粗粉；所述乙醇回流为：以ｋｇ／Ｌ计，在得到的使君子粉中按照质量体积比１∶２～５加入９５％乙醇溶液，６０～８０℃回流提取２～４ｈ；步骤２：将步骤１所述使君子粗粉按照步骤１所述乙醇回流１～３次，收集沉淀得到使君子细粉；步骤３：在步骤２所述的使君子细粉中加入重量比为１∶８～１５的水，加热至５０～６０℃浸泡２～４ｈ，用酸调节ｐＨ值至３．５～４．０，每ｋｇ所述使君子细粉中分别加入８～１６０万ＩＵ的纤维素酶和８～８０万ＩＵ的果胶酶，在４０～４５℃酶解６～８ｈ后，得到使君子酶解液；步骤４：将步骤３所述的使君子酶解液在９０～１００℃下浸提１～２ｈ，抽滤后得到第一滤液，收集滤渣，以ｋｇ／Ｌ计，加入质量体积比为１∶３～５的水，在９０～１００℃浸泡１～２ｈ后抽滤，得到第二滤液，合并第一滤液和第二滤液，得到使君子滤液，将所述使君子滤液离心后收集上清液，用碱调节ｐＨ值至５．５～６．８，过ＤＥＡＥ柱分离纯化，收集洗脱液浓缩后，雾化干燥，制得使君子提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩金光，王唐洪，伍曾利，
申请(专利权)人：韩金光，
类型：发明
国别省市：66