本发明专利技术涉及双特异性单克隆抗体药物，特别涉及抗肿瘤血管新生的抗人血管内皮生长因子（VEGF/VEGF-A）和人血小板衍生生长因子受体（PDGFR）的双特异性单克隆抗体药物；抗VEGF/PDGFRbeta双特异性抗体，其特征在于该抗体由抗VEGF单克隆抗体为基础，并在其FC段末端连接抗PDGFRbeta单链抗体构成。
【技术实现步骤摘要】
本专利涉及双特异性单克隆抗体药物，特别涉及抗肿瘤血管新生的抗人血管内皮生长因子(VEGF/VEGF-A)和人血小板衍生生长因子受体(PDGFR)的双特异性单克隆抗体药物；
技术介绍
早在一个多世纪以前，就有文献报道过肿瘤生长伴随着新生血管生成(!^errara 2002)。但直到1939年，才由Ide及其同事首次提出，可能存在着某种肿瘤来源的血管生长刺激因子为肿瘤的生长提供血管供应(Ide et al. 1939)。数年后，由于观察到血管密度的增高会先于肿瘤的快速生长，Algire等人认为“肿瘤的快速扩散取决于丰富的血管供给”(Algire et al. 1945)。在上个世纪六十年代，Greenblatt、Shubik(Greenblatt et al. 1968)和Ehrmann、Knoth (Ehrmann et al. 1968)两个研究小组的实验相继提供初步证据，证实肿瘤的血管生成是由肿瘤细胞产生的某些可扩散因子介导。1971年，美国科学家福克曼(Judah Folkman)在《新英格兰医学杂志》中提出， 抗血管生成可能是一种有效的抗癌手段(Folkman 1971)。从七十年代早期开始，以这个前瞻性的假说为基础，福克曼及其研究小组致力于从人体和动物的肿瘤中分离某种‘肿瘤血管生成因子‘(Folkman et al. 1971)。1978年，Gullino也提出了抑制血管生成能避免癌症的观点(Gullino 1978)。随后，多种血管源因子(如，表皮生长因子EGF，转化生长因子TGF-α、TGF-beta，肿瘤生长因子TNF-α和血管生长素等)先后被发现(Folkman et al. 1987)。血管内皮生长因子(VEGF)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF，也可写作 VEGF-A)是一个血管生成的关键调节因子，对于VEGF基因家族在血管生成调节中所扮演的角色，人们已经深入研究了十多年之久Perrara 2002)。VEGF家族目前主要包括原型成员(VEGF-A)、胎盘生长因子(placenta growth factor, P1GF) (Magiione et al. 1991)、 VEGF-B (Olofsson et al. 1996), VEGF-C (Joukov et al. 1996), VEGF-D (Orlandini et al. 1996)。其中VEGF-A是诱导肿瘤血管生成作用最强、特异性最高的血管生长因子。VEGF 有3个高亲合性的酪氨酸激酶受体(RTKs)，分别为VEGFR-I (Flt-I) (Shibuya et al. 1990 ； de Vries et al. 1992)、VEGFR-2 (KDR、Flk-1) (Yoshiji et al. 1996 ；Ellis et al. 1998 ； Tomisawa et al. 1999)和 VEGFR3 (Flt_4) (Joukov et al. 1996)。KDR 是血管形成的主要调控分子，具有明显的化学趋化和促分裂作用，与血管岛、血管形成和造血有关。肿瘤的生长有两个明显不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段，血管生成使肿瘤能够获得足够的营养物质，是促成上述转变的关键环节。如果没有血管生成，原发肿瘤的生长不会超过1 2mm3。肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因，而在肿瘤发生侵袭转移的多步骤过程中，血管生成均发挥着重要作用。原位杂交研究已经发现VEGF mRNA在多种人类肿瘤中都有表达，包括肺癌(Volmet al. 1997)、乳腺癌(Yoshiji et al. 1996)、胃肠癌(Ellis et al. 1998)、肾癌(Tomisawa et al. 1999)和卵巢癌(Sowter et al. 1997)。多家实验室使用多种抗VEGF的手段均已实现了肿瘤生长的抑制，这些方法包括针对VEGF或其受体(VEGFRs)的抗体、可溶性受体， VEGFRs酪氨酸激酶的小分子抑制剂以及利用VEGF的突变异二聚体封闭其受体结合位点寸。1993年，费拉拉制备了 VEGF的鼠源性抗体，在体外实验中，鼠源性抗体可以显著抑制数种人类癌细胞系的生长。从此，VEGF抗体的临床应用价值开始显露。为了降低鼠源性抗体的免疫原性，费拉拉将鼠源抗体的骨架换做了人源抗体IgGl的部分，由此诞生了基因泰克公司“重磅炸弹级”药物一贝伐单抗(Avastin)。它是一种抗VEGF的人源化抗体(IgGl)，93 %的人源结构域和7 %的鼠源结合区域组成，是全世界第一个被批准用于抑制血管生长的单克隆抗体药物，2004年2月美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration, FDA)批准该药用于治疗转移性结肠癌(mCRC)、小细胞分子肺癌(GBM)和转移性肾癌。阿瓦斯汀区别于已有抗癌药物，以VEGF为药物靶点，加之抗体的特异性结合能力，使其临床疗效显著。在人体试验中，即使对于晚期的癌症患者，注射阿瓦斯汀也可延长寿命数月。2007年ASCO会议Souglakos报道Avastin联合靶向EGFR的单克隆抗体 Cetuximab (西妥昔单抗)可以安全有效地治疗化疗失败的晚期转移性结直肠癌。基因泰克公司正在用Avastin对超过40种癌症进行适应症研究，希望可以生产出更多的单抗延伸产品。同时，他们也在研究将全抗体分子IgG切割之后，先将蛋白用原核细胞表达，然后再将其通过基因工程的手段连接为IgG。除了癌症外，VEGF也是治疗包括老年性黄斑变性(AMD)，糖尿病引起的眼底病在内的多种眼科疾病关键。为了治疗这些疾病，在Avastin的基础上，基因泰克公司又将其全抗体分子结构进行简化，保留能够中和VEGF的抗体片段，同时将给药途径由静脉注射改为玻璃体直接注射，由此成就另一药物一Avastin的孪生姊妹兰尼单抗(Lucentis)。 2006年，兰尼单抗被美国药监局批准用于治疗老年黄斑变性(age-related macular degeneration, AMD)，很快就成为治疗老年性黄斑变性，糖尿病引起的眼底病的首选药，占领北美市场80%以上的份额。血小板衍生生长因子及其受体血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor，PDGF)是普遍存在的一种由sis原癌基因编码的生长因子，最初从血小板α中分离得到，主要由巨核细胞合成，在组织损伤修复，血管生成和细胞分化过程中起到非常重要的作用(Heldin 1992)。PDGF分子是一个糖蛋白二聚体，可分为_AA，-BB和-AB三种类型。PDGF及其受体 (Platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)在多种人体月中瘤中都有比较高的表达，如胰腺癌，小细胞肺癌，胃癌和乳腺癌等。PDGFR是一种位于细胞表面的受体酪氨酸激酶(Rec印tor tyrosine kinase, RTK)，可分为两个亚型PDGFR α 和 PDGFRbeta (Matsui et al. 1989)。PDGFRbeta 可本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．抗ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦＲｂｅｔａ双特异性抗体，其特征在于该抗体由ＳＥＱ ＮＯ．５的Ｎ端依次连接有ＳＥＱ ＮＯ．４、ＳＥＱ ＮＯ．３、ＳＥＱ ＮＯ．２和ＳＥＱ ＮＯ．１，其中ＳＥＱ ＮＯ．５的Ｃ端通过（ＧＧＧＧＳ）３封闭。
【技术特征摘要】
1.抗VEGF/PDGFRbeta双特异性抗体，其特征在于该抗体由SEQNO. 5的N端依次连接 SEQ NO. 4、SEQ NO. 3、SEQ NO. 2 和...
【专利技术属性】
技术研发人员：霍世元，叶亚东，滕凌，朱文华，潘鹂，路易斯易格那罗，
申请(专利权)人：常州亚当生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：32
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