兔出血症病毒、兔巴氏杆菌双重PCR快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种兔出血症病毒、兔巴氏杆菌双重PCR快速检测方法，该方法根据兔出血症病毒VP60基因和兔巴氏杆菌kmt基因序列，设计了两对可扩增VP60基因和kmt基因的特异性引物。电泳图谱中出现645bp的特异性条带为兔出血症病毒阳性；出现215bp的特异性条带为兔巴氏杆菌阳性。研究表明，本发明专利技术可以在同一个反应体系中对兔出血症病毒和兔巴氏杆菌进行检测，具有快速、特异、敏感、稳定的特点，克服了常规诊断方法的不足，可用于兔病毒性出血症和兔巴氏杆菌病的快速鉴别诊断，对有效防控这两种疫病具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兔病毒和病菌的检测技术，尤其涉及兔出血症病毒、兔巴氏杆菌双重 PCR快速检测方法。
技术介绍
兔病毒性出血症(俗称兔瘟，Rabbit hemorrhagic disease，简称RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus，简称RHDV)引起的一种烈性传染病，其传染性强、病程短，发病率和死亡率都很高，在急性爆发的兔场，发病率和死亡率可达100 %。EKff(Rabbit pasteurellosis) ^￠^#: ^ ^ ‘ (Pasteurellamultocida) 引起的一种急性传染病，常引起大批兔发病和死亡。这两种疫病给养兔业带来了巨大的经济损失，严重制约了养兔业的发展。由于兔病毒性出血症和兔巴氏杆菌病临床症状和病理变化相似，常规的诊断方法很难快速、准确的进行诊断，且容易造成误诊耽误治疗。1985年K. Mullis等专利技术的PCR技术，掀起了一场生物学革命，如今PCR技术已成为诊断应用的一种重要科学手段。多重PCROmiltiplex-PCR，简称MPCR)，是指同一反应管 (或反应体系)中包含两对或两对以上引本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种兔出血症病毒、兔巴氏杆菌双重ＰＣＲ快速检测方法，其特征在于从待检兔的肺脏、脾脏、肝脏、淋巴结等组织中提取总ＲＮＡ，并用兔出血症病毒靶基因特异性下游引物将总ＲＮＡ反转录成ＣＤＮＡ，同时从待检兔病变组织中分离培养疑似兔巴氏杆菌，从培养液中提取ＤＮＡ模板，然后将获得的ＣＤＮＡ和ＤＮＡ模板，以及针对兔出血症病毒ＶＰ６０基因和兔巴氏杆菌ｋｍｔ基因设计合成的两对特异性引物加入到同一个反应体系中进行ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，最后根据电泳结果进行判定；其中，ＰＣＲ反应的引物序列和扩增序列分别为：引物ＶＰ６０　Ｐ１序列５′－ＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＣＡＴＡＣＴＴＴＡＣ－３′引物ＶＰ６０　Ｐ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴健敏，黄红梅，刘梅，覃绍敏，白安斌，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：45