三重一步法RT-PCR同时检测烟草上三种病毒的方法技术

三重一步法RT-PCR同时检测烟草上三种病毒的方法，其特征在于：是同时检测烟草普通花叶病毒、马铃薯Y病毒和黄瓜花叶病毒的方法，该方法包括甄别比对病毒基因组中保守区域，人工筛选合成适用于三种病毒病复合RT-PCR特异性引物；分析获得TMV、PVY、CMV侵染烟叶样本；整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液，通过反应条件优化，建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY、CMV的方法。本发明专利技术所采用的三重一步法RT-PCR反应，具有操作简便、省时省力、结果可靠、成本低廉的优点，同时可有效减少操作过程中造成样品交叉污染的可能性，对于烟草农业生产中TMV、PVY、CMV的监测监控具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物病毒病害检测
，提供一种三重一步法RT-PCR同时检测烟草普通花叶病毒病(Tbhcco fflosaic virus, TMV)、烟草马铃薯Y病毒Y virus, PVY)和烟草黄瓜花叶病毒知rvirus, CMV)的方法，具体涉及针对三种烟草病毒特异性核苷酸引物序列的合成和该检测方法的有效建立。
技术介绍
烟草普通花叶病毒(TbAacco mosaic virus, TMV)、马铃薯Y病毒(Fotato virus Y, PVY)、黄瓜花叶病毒(Ω/c腫知r^>狀，CMV)寄主范围广泛，主要危害烟草、番茄、黄瓜、马铃薯等多种经济作物和园艺作物。其地理分布极广，属于世界性病毒病害，世界各大洲的作物生产都曾因其导致的病毒病而受到重大损失。以上三种病毒病是烟草上发生普遍、危害严重的重要病毒病害，减轻烟草农业生产中病毒病危害的关键是大面积推广培育应用无病毒壮苗、加强田间管理和采取有效地病毒防控技术措施。病毒检测监控是防控技术措施中的一个重要环节，针对烟草病毒病具有危害大、流行广、防治难的特点，尽快尽早建立快速、准确和高效的检测技术十分必要。目前大田烟草病毒病本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．三重一步法ＲＴ－ＰＣＲ同时检测烟草上三种病毒的方法，其特征在于：是同时检测烟草普通花叶病毒、马铃薯Ｙ病毒和黄瓜花叶病毒的方法，该方法包括甄别比对病毒基因组中保守区域，人工筛选合成适用于三种病毒病复合ＲＴ－ＰＣＲ特异性引物；分析获得ＴＭＶ、ＰＶＹ、ＣＭＶ侵染烟叶样本；整合反转录和ＰＣＲ反应所需酶和缓冲液，通过反应条件优化，建立基于一步法ＲＴ－ＰＣＲ复合检测烟叶感染ＴＭＶ、ＰＶＹ、ＣＭＶ的方法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨军，张俊祺，罗朝鹏，王燃，李锋，金立锋，宋纪真，林福呈，翟妞，周会娜，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：41