可识别HCV NS5A蛋白的核酸适体、核酸适体的衍生物及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种可识别HCV?NS5A蛋白的核酸适体，其为SEQ?ID?NO：1～SEQ?ID?NO：5中任一序列所示的DNA片段，其衍生物为包括核苷酸取代后的RNA核酸适体、骨架改造后的衍生物、改造为肽核酸后的衍生物以及连接上放射性分子后的衍生物。该核酸适体的筛选方法包括：先制备带组氨酸标签的丙型肝炎病毒NS5A蛋白，再制备带组氨酸标签的pET200/D/LacZ蛋白；然后对蛋白进行固定，并设计随机核酸文库；最后进行核酸适体的筛选，筛选过程具体又包括DNA文库预处理、反筛、正筛及反复筛选等步骤，最后获得竞争能力强、序列长度得到优化的核酸适体。本发明专利技术的核酸适体及其衍生物可用于制备丙型肝炎病毒NS5A蛋白的检测试剂盒或诊断试剂，还可用于制备抑制丙型肝炎病毒在肝细胞内复制的试剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于遗传工程
，尤其涉及一种核酸适体、核酸适体的衍生物及其筛选方法和应用。
技术介绍
丙型肝炎病毒(HCV)感染是一种危害严重的全球性健康问题，全世界已有2亿感染者。据估计，每年新增感染者数为300 400万。我国约有4000万至5000万人感染HCV， 仅次于乙型肝炎携带者数量。目前，治疗丙型病毒肝炎的标准方法是采用干扰素或者干扰素联合利巴韦林治疗。在治疗感染基因型2型和3型HCV的患者中有75% 90%的HCV根除率，然而，仍有约50%的1型和4型HCV感染的病人不敏感。虽然加入利巴韦林能够增强持久的抗病毒应答水平，但也能带来严重的副作用(如溶血性贫血)，这些副作用常常导致20%的患者中断治疗。由于HCV基因组有极大的序列差异性，加之组合疗法的副作用大和治疗价格昂贵，急需开发新方法来有效治疗不同HCV基因型感染的肝病患者。核酸适体(Aptamer)是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)从人工合成的 DNA/RNA文库中筛选得到的能高亲和性、高特异性结合生物靶标的单链寡核酸分子(ssDNA 或ssRNA)。核酸适体的靶标包括多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种可识别ＨＣＶ　ＮＳ５Ａ蛋白的核酸适体，其为ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１～ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５中任一序列所示的ＤＮＡ片段。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱海珍，方晓红，杨大荣，徐丽，刘斌，雷少华，刘念礼，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：43