本发明专利技术公开一种抑制人microRNA-1233表达的反义寡聚核苷酸及其应用。该反义寡聚核苷酸特异性结合于人miR-1233，包含与5’-UGAGCCCUGUCCUCCCGCAG-3’核苷酸序列中至少13个连续核苷酸互补的序列，特别是序列：5’-CUGCGGGAGGACAGGGCUCA-3’。本发明专利技术的反义寡聚核苷酸可以为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或二者的嵌合体，并可对链中任一核苷酸进行修饰。本发明专利技术的miR-1233反义寡核苷酸能够有效抑制人脑胶质瘤细胞中miR-1233表达，抑制该细胞生长和增殖，从而有效治疗脑胶质瘤及其他miR-1233高表达的肿瘤。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学材料
和药物领域。具体地，本专利技术涉及一种 microRNAs(miRNA)的用途，尤其是涉及人microRNA_1233 (人miR-1233)反义核酸及其应 用。该反义核酸可与人miR-1233互补，从而抑制人miR-1233的表达而起到抗肿瘤的作用。 本专利技术还涉及含有该miRNA反义核酸的药物组合物。
技术介绍
miRNAs是小的非编码RNA，长度为20-25bp，通常是由RNA聚合酶II(Pol II) 转录的，一般最初产物为大的具有帽子结构(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的 pri-miRNA。这些pri_miRNA在RNase III Drosha和其辅助因子Pasha的作用下被处理成 70个核苷酸组成的pre-miRNA前体产物。RAN-GTP和exportin 5将这种前体分子输送到细 胞质中。随后，另一个RNase III Dicer将其剪切产生约为22个核苷酸长度的双链。这种 双链很快被引导进入(miRISC)复合体中，其中含有Argonaute蛋白，并且成熟的单链miRNA 保留在这一复合物中。成熟的miRNA结合到与其互补的mRNA的位点通过两种依赖于序列 互补性的机制负调控基因表达，与靶mRNA不完全互补的miRNA在蛋白质翻译水平上抑制其 表达。然而，最近也有证据表明，这些miRNA也有可能影响mRNA的稳定性。使用这种机制 的miRNA结合位点通常在mRNA的3’端非翻译区。如果miRNA与靶位点完全互补(或者几 乎完全互补)，那么这些miRNA的结合往往引起靶分子mRNA的降解。miRNAs在物种进化中 相当保守，在动物，植物和真菌等中发现的miRNAs表达均有严格的组织特异性和时序性。目前，只有很小一部分miRNAs的生物学功能得到阐明。这些miRNAs调节细胞生 长和组织分化，与生物生长发育有关。一系列的研究表明miRNAs在细胞生长和凋亡，血细 胞分化，同源异形盒基因调节，神经元的极性，胰岛素分泌，大脑形态形成，心脏发生，胚胎 后期发育等过程中发挥重要作用。例如，miR-273参与线虫的神经系统发育过程；miR-430 参与斑马鱼的大脑发育；miR-181控制哺乳动物造血细胞分化为B细胞；miR-375调节哺乳 动物胰岛细胞发育和胰岛素分泌；miR-143在脂肪细胞分化起作用；miR-196参与了哺乳动 物四肢形成，miR-1与心脏发育有关。另有研究人员发现许多神经系统的miRNAs在大脑皮 层培养中受到时序调节，表明其可能控制着区域化的mRNA翻译。miRNA表达与多种癌症相关，并且这些基因可能起到肿瘤抑制基因或是癌基因作 用。最先在B细胞慢性淋巴性白血病(CLL)中发现有miRNA表达水平的改变，随后陆续在 各种人类肿瘤中均检测到miRNA表达水平的变化。研究发现，miRNAs与肿瘤形成相关，既能 发挥肿瘤抑制基因的作用(如miR-15a和miR-16-l)，又能起到癌基因的作用(如miR-155 和miR-17-92簇)。目前认为，在肿瘤细胞中，有些miRNA成熟体或前体表达水平异常，而 表达异常的miRNA通过影响靶mRNA翻译发挥作用，参与肿瘤形成过程，并起重要作用。如 Ras原癌基因受let-7家族的调控，BCL2抗凋亡基因受miR-lfe-miR-16-l簇调控，E2F1转 录因子受miR-17-92簇调控，BCL6抗凋亡基因受miR-127的调控等。miRNAs的表达下调也 和肿瘤发生有密切关系，这预示着miRNA具有癌基因的功能。例如，miR-143和miR-145在结肠癌中明显下调。有趣的是，其发夹结构的前体分子在肿瘤和正常组织中含量相似，这表 明，miRNAs的表达下调可能是由于其加工过程受到破坏。但是，miR-143和miR-145的肿瘤 抑制基因功能可能不仅仅局限于结肠癌，在乳腺癌、前列腺癌、子宫癌、淋巴癌等细胞系中 其表达量也明显下调。另一个报道表明，miR-21在胶质母细胞瘤中表达增加。这个基因在 肿瘤组织中的表达量比在正常组织中高5-100倍。miRNAs是天然的反义作用因子，能够调控与真核生物生存和增殖相关的多种基 因。在肿瘤治疗方面，miRNA的应用前景光明。在利用miRNA作为治疗靶点方面，已有实验 数据支持如在吉西他滨(gemcitabine)治疗的过程中，出现miRNA表达谱的变化；调控部 分miRNA的表达水平(如使miR-21过表达)，能增进胆管癌细胞对化疗药物的敏感性。通 过引入与具有癌基因特性的miRNA互补的合成的反义寡聚核苷酸——抗miRNA寡聚核苷酸 (AMOs)——可能有效的灭活肿瘤中的miRNAs，延缓其生长。临床上，可以通过经常的或者持 续的2’ -0-甲基化或者锁核酸(LNA)等修饰的反义寡聚核苷酸给药使miRNA失活。这些 修饰使得寡核苷酸更稳定，比其他治疗手段毒性更低。使用antagomirs (与胆固醇偶联的 AMOs)，注射小鼠后可以在不同器官有效抑制miRNA活性，因而可能成为一种有希望的治疗 药物。相反的，过表达那些具有肿瘤抑制基因作用的miRNAs，如let-7家族，也可以用于治 疗某些特定的肿瘤。反义寡聚核苷酸(Flanagan WM. Antisense comes of age. Cancer & Metastasis Reviews 1998 ;17(幻169-76)是指一段可以与其靶基因的碱基互补的核苷酸。反义寡聚 核苷酸可以抑制相应基因的表达。人microRNA-1233 (has-miR-1233)位于 15 号染色体，前体序列为⑶GA⑶GGGAGGC CAGGGCACGGCAGGGGGAGCUGCAGGGCUAUGGGAGGGGCCCCAGC ⑶ CUGAGCCCUGUCCUCCCGCAG。含有 1 个 成熟 microRNA :hsa_miR-1233 (MIMAT0005588，序列为 UGAGCCCUGUCCUCCCGCAG)。目前还没 有关于microRNA-1233的功能和表达水平的研究报道。近三十年，尽管临床上肿瘤的综合治疗已很普遍，但以手术为主，放化疗为辅的综 合治疗对肿瘤患者的生存率提高并不明显，5年总体生存率仍然较低，徘徊在30% 55% 左右，并没有显著提高，中晚期患者的5年生存率更低，约为20%。而且这些方法都存在各 自的局限性，特别是对中晚期和复发患者疗效不佳，对伴有远处转移者疗效更差。因此，寻 找更安全有效的治疗途径是提高肿瘤患者生存率和生存质量所亟待解决的难题。
技术实现思路
本专利技术要解决的主要问题是提供一组新的miR-1233的反义核酸(抑制剂)，用于 高效、低毒或无毒地抑制miR-1233的表达，进而治疗由miR-1233过度表达引发的疾病，包 括肿瘤，尤其为脑胶质瘤。本专利技术要解决的另一问题是提供上述反义寡聚核苷酸在制备治疗mir-1233过度 表达的相关疾病的药物中的用途。本专利技术要解决的再一问题是提供一种包含上述反义核酸的药物组合物。本专利技术人通过广泛而深入的研究，设计并合成了一系列专一性针对miR-1233不 同区域的长度不同的反义核酸，并在培养细胞中验证具有抑制效果的反义核酸。研本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述反义寡聚核苷酸包含与下述核苷酸序列中１３～２５个连续的核苷酸互补的序列：５’－ＵＧＡＧＣＣＣＵＧＵＣＣＵＣＣＣＧＣＡＧ－３’。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，张佩琢，李捷，段春晓，沈孝坤，
申请(专利权)人：苏州吉玛基因股份有限公司，中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。