【问题】提供具有抗肥胖作用的物质的筛选方法和抗肥胖药。【解决方法】一种筛选方法，其包含下述工序：使被验物质与滑膜蛋白基因表达细胞接触的工序，和确认由上述被验物质产生的对滑膜蛋白基因表达的影响或对滑膜蛋白的蛋白活性的影响的工序。抗肥胖作用的例子是脂肪组织量减少作用或脂肪细胞分化诱导抑制作用。一种抗肥胖药，其包含滑膜蛋白的siRNA、滑膜蛋白的诱捕核酸或滑膜蛋白的反义核酸作为有效成分。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及筛选具有肥胖症的预防和治疗作用的化合物的方法。
技术介绍
肥胖引起脂肪组织的过量蓄积，提高糖尿病、循环器官系疾病、抑郁症等各种健康 上的风险（参照非专利文献1)。该问题在现代社会中产生非常大的经济和社会损失。对脂 肪细胞代谢的分子机制进行了广泛研究（参照非专利文献2和3)。 滑膜蛋白是作为由来自于风湿病患者的滑膜细胞过表达的膜蛋白而发现的蛋白 (参照专利文献1)。而且，通过使用了转基因动物的研究，表明了滑膜蛋白是类风湿性关节 炎的发作所必须的分子。 通过蛋白结构预测系统，暗不出滑13旲蛋白具有环指（RINGfinger)基序。该基序 在对蛋白的泛素化发挥重要作用的E3泛素连接酶这样的酶中被大量发现。而且证明了，滑 膜蛋白具有作为E3泛素连接酶的特征之一的自泛素化活性（参照专利文献1)。 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :国际公开第02/052007号专利技术 非专利文献 非专利文献I:Wickelgren,I. (1998) ? Obesity:how big aproblem? Science280, 1364-1367.非专利文献2:Lefterova, M. I. , and Lazar, M. A. (2009) ? New developments in adipogenesis. Trends Endocrinol Metab 20, 107-114.非专利文献3:Rosen, E. D. , and MacDougald, 0? A. (2006) ? Adipocyte differentiation from the inside out. Nat Rev Mol Cell Biol 7,885-896.
技术实现思路
专利技术所要解决的问题 人们期望开发出筛选具有肥胖症的预防和治疗作用的物质或候选化合物的方法。 用于解决问题的方法 本专利技术人获得了如果使用滑膜蛋白基因的条件性基因剔除小鼠或称敲除小鼠，破 坏滑膜蛋白基因，则引起对象的体重减少和脂肪细胞的分化诱导抑制这样的基于实施例的 见解。因此，本专利技术人发现，通过筛选抑制滑膜蛋白的表达、或抑制滑膜蛋白的活性的化合 物，能够筛选具有脂肪细胞分化诱导调节作用、脂肪组织量调节作用和体重调节作用的化 合物，从而完成了本专利技术。 本专利技术的第1方面涉及具有抗肥胖作用的物质的筛选方法。该方法包括下述工 序：使被验物质与滑膜蛋白基因表达细胞接触的工序，以及确认由被验物质产生的对滑膜 蛋白基因表达的影响或对滑膜蛋白的蛋白活性的影响的工序。对滑膜蛋白基因表达的影响 的例子是对滑膜蛋白mRNA量的影响、对滑膜蛋白的蛋白的自泛素化的影响。所谓具有抗肥 胖作用的物质的筛选方法，为寻找具有抗肥胖作用的物质的候选方法。 第1方面的优选形态是，抗肥胖作用为脂肪组织量减少作用或脂肪细胞分化诱导 抑制作用。即，该形态中，可以筛选具有脂肪组织量减少作用或脂肪细胞分化诱导抑制作用 的化合物。 本专利技术的第2方面涉及抗肥胖药。该抗肥胖药包含滑膜蛋白的SiRNA、滑膜蛋白的 诱捕核酸或滑膜蛋白的反义核酸作为有效成分。该抗肥胖药具有例如脂肪组织量减少作用 或脂肪细胞分化诱导抑制作用。 本专利技术的第2方面所具有的形态是，有效成分为滑膜蛋白的SiRNA的形态。滑 膜蛋白的siRNA的例子为具有选自序列号2~6中的一碱基序列、与这些碱基序列互补 的碱基序列、或从任一这些碱基序列取代、插入、缺失或附加了 1个或2个碱基的碱基 序列的RNA。具有序列号2~4所不的喊基序列的RNA为滑I旲蛋白的siRNA，如Izumi T,etal. ,ArthritisRheum. 2009 ；60 (I) : 63-72. ,YamasakiS,etal. ,EMBOJ. 2007 ； 26(1):113-22.中使用实验而公开地那样是公知的。具有序列号5和6所示的碱基序列的 RNA为滑膜蛋白的siRNA，如W02005/074988号专利技术中使用实验而公开地那样是公知的。 序列号 2 :5 ' -GCUGUGACAGAUGCCAUCA-3 '序列号3 :5' -GGUGUUCUUUGGGCAACUG-3'序列号4 :5' -GGUUCUGCUGUACAUGGCC-3'序列号5 :5' -CGUUCCUGGUACGCCGUCA-3'序列号 6 :5 ' -GUUUTGGUGACUGGUGCUA-3' "具有从任一这些碱基序列取代、插入、缺失或附加了 1个或2个碱基的碱基序列 的RNA"，为具有从选自序列号2~6中的一碱基序列和与这些碱基序列互补的碱基序列任 一碱基序列，取代、插入、缺失或附加了 1个或2个碱基的碱基序列的RNA。取代、插入、缺失 或附加可以发生任1种，也可以发生2种以上。 本专利技术的第2方面所具有的形态是，有效成分为具有序列号7所示的碱基序列或 从序列号7所示的碱基序列取代、插入、缺失或附加了 1个或2个碱基的碱基序列的滑膜 蛋白的诱捕核酸。具有序列号7所示的碱基序列的核酸为滑膜蛋白的诱捕核酸，例如，如 TsuchimochiK，etal.，MolCellBiol. 2005 ;25 (16) :7344-56?中使用实施例而显示地那 样是公知的。序列号 7:5 ' -AUGGUGACUGGUGCUAAGA-3 ' 本专利技术的第2方面所具有的形态是，有效成分为滑膜蛋白的反义核酸。 专利技术的效果 通过本专利技术，可以提供。【附图说明】 图IA是滑膜蛋白条件性基因剔除小鼠（syvnlcKO)的制作所使用的基因标靶载 体的设计图。外显子表示黑色的箱，黑色箭头表示新霉素（Neo)，白底箭头表示白喉毒素基 因亚基A。白底三角形表示IoxP部位，黑圆点表示FRT部位。通过在内源性滑膜蛋白基因 座与标靶载体之间进行同源基因重组，可获得与外显子2~12的上游和下游相邻地导入了 loxP，进一步与新霉素盒的上游和下游相邻地导入了FRT的染色体。"FloxAllele"中，显 示除去新霉素后的、导入了IoxP的等位基因。缺损等位基因表示通过他莫昔芬（Tam)被诱 导的、经由Cre重组酶而被除去的物质。 图IB是将他莫昔芬处理后的来自于（CAG)-Cre-ER;syvnr/+小鼠、（CAG)-Cre-ER; SyvnlfW+小鼠和（CAG)-Cre-ER;syvnlfWfl°x小鼠的基因组DNA进行了PCR解析而得的照 片。野生型等位基因作为70bp的片段（下侧的谱带）被检测到，目的等位基因作为IOObp 的片段（上侧的谱带）被检测到。 图IC是将他莫昔芬处理后的来自于syvnlfWfl°x小鼠（syvnlWT)和 (CAG)-Cre-ER;syvnlfWfl°x小鼠（syvnlcKO)的脂肪细胞进行了实时PCR解析而得的图。 图ID是来自于syvnlWTmice和syvnlcKOmice的尾部蛋白的、使用了抗滑膜 蛋白抗体的蛋白印迹。 图IE是表示新生后的滑膜蛋白条件性基因剔除小鼠的生存比例的图。 图2A是表示新生后的滑膜蛋白条件性基因剔除小鼠的体重变化的图。 图2B是表示滑膜蛋白基因剔除小鼠（雄和雌）的食物摄取量的图。 图2C是表示新生后的滑膜蛋白条件性基因剔除小鼠的皮下脂肪的状态的照片本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗肥胖作用的物质的筛选方法，其包含下述工序：使被验物质与滑膜蛋白基因表达细胞接触的工序，和确认由所述被验物质产生的对滑膜蛋白基因表达的影响或对滑膜蛋白的蛋白活性的影响的工序。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：中岛利博，藤田英俊，荒谷聪子，八木下尚子，
申请(专利权)人：中岛利博，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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