本发明专利技术公开一种抑制人microRNA-185*表达的反义寡聚核苷酸及其应用。该反义寡聚核苷酸特异性结合于人miR-185*，包含与5’-AGGGGCUGGCUUUCCUCUGGUC-3’核苷酸序列中至少13个连续核苷酸互补的序列，特别是序列：5’-GACCAGAGGAAAGCCAGCCCCU-3’。本发明专利技术的反义寡聚核苷酸可以为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或二者的嵌合体，并可对链中任一核苷酸进行修饰。本发明专利技术的miR-185*反义寡核苷酸能够有效抑制人脑胶质瘤细胞中miR-185*表达，抑制该细胞生长和增殖，从而有效治疗脑胶质瘤及其他miR-185*高表达的肿瘤。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学材料
和药物领域。具体地，本专利技术涉及一种 microRNAs(miRNA)的用途，尤其是涉及人microRNA_185*(人miR-185*)反义核酸及其应用。 该反义核酸可与人miR-185*互补，从而抑制人miR-185*的表达而起到抗肿瘤的作用。本发 明还涉及含有该miRNA反义核酸的药物组合物。
技术介绍
miRNAs是小的非编码RNA，长度为20-25bp，通常是由RNA聚合酶II(Pol II) 转录的，一般最初产物为大的具有帽子结构(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的 pri-miRNA。这些pri_miRNA在RNase III Drosha和其辅助因子Pasha的作用下被处理成 70个核苷酸组成的pre-miRNA前体产物。RAN-GTP和exportin 5将这种前体分子输送到细 胞质中。随后，另一个RNase III Dicer将其剪切产生约为22个核苷酸长度的双链。这种 双链很快被引导进入(miRISC)复合体中，其中含有Argonaute蛋白，并且成熟的单链miRNA 保留在这一复合物中。成熟的miRNA结合到与其互补的mRNA的位点通过两种依赖于序列 互补性的机制负调控基因表达，与靶mRNA不完全互补的miRNA在蛋白质翻译水平上抑制其 表达。然而，最近也有证据表明，这些miRNA也有可能影响mRNA的稳定性。使用这种机制 的miRNA结合位点通常在mRNA的3’端非翻译区。如果miRNA与靶位点完全互补(或者几 乎完全互补)，那么这些miRNA的结合往往引起靶分子mRNA的降解。miRNAs在物种进化中 相当保守，在动物，植物和真菌等中发现的miRNAs表达均有严格的组织特异性和时序性。目前，只有很小一部分miRNAs的生物学功能得到阐明。这些miRNAs调节细胞生 长和组织分化，与生物生长发育有关。一系列的研究表明miRNAs在细胞生长和凋亡，血细 胞分化，同源异形盒基因调节，神经元的极性，胰岛素分泌，大脑形态形成，心脏发生，胚胎 后期发育等过程中发挥重要作用。例如，miR-273参与线虫的神经系统发育过程；miR-430 参与斑马鱼的大脑发育；miR-181控制哺乳动物造血细胞分化为B细胞；miR-375调节哺乳 动物胰岛细胞发育和胰岛素分泌；miR-143在脂肪细胞分化起作用；miR-196参与了哺乳动 物四肢形成，miR-1与心脏发育有关。另有研究人员发现许多神经系统的miRNAs在大脑皮 层培养中受到时序调节，表明其可能控制着区域化的mRNA翻译。miRNA表达与多种癌症相关，并且这些基因可能起到肿瘤抑制基因或是癌基因作 用。最先在B细胞慢性淋巴性白血病(CLL)中发现有miRNA表达水平的改变，随后陆续在 各种人类肿瘤中均检测到miRNA表达水平的变化。研究发现，miRNAs与肿瘤形成相关，既能 发挥肿瘤抑制基因的作用(如miR-15a和miR-16-l)，又能起到癌基因的作用(如miR-155 和miR-17-92簇)。目前认为，在肿瘤细胞中，有些miRNA成熟体或前体表达水平异常，而 表达异常的miRNA通过影响靶mRNA翻译发挥作用，参与肿瘤形成过程，并起重要作用。如 Ras原癌基因受let-7家族的调控，BCL2抗凋亡基因受miR-lfe-miR-16-l簇调控，E2F1转 录因子受miR-17-92簇调控，BCL6抗凋亡基因受miR-127的调控等。miRNAs的表达下调也 和肿瘤发生有密切关系，这预示着miRNA具有癌基因的功能。例如，miR-143和miR-145在结肠癌中明显下调。有趣的是，其发夹结构的前体分子在肿瘤和正常组织中含量相似，这表 明，miRNAs的表达下调可能是由于其加工过程受到破坏。但是，miR-143和miR-145的肿瘤 抑制基因功能可能不仅仅局限于结肠癌，在乳腺癌、前列腺癌、子宫癌、淋巴癌等细胞系中 其表达量也明显下调。另一个报道表明，miR-21在胶质母细胞瘤中表达增加。这个基因在 肿瘤组织中的表达量比在正常组织中高5-100倍。miRNAs是天然的反义作用因子，能够调控与真核生物生存和增殖相关的多种基 因。在肿瘤治疗方面，miRNA的应用前景光明。在利用miRNA作为治疗靶点方面，已有实验 数据支持如在吉西他滨(gemcitabine)治疗的过程中，出现miRNA表达谱的变化；调控部 分miRNA的表达水平(如使miR-21过表达)，能增进胆管癌细胞对化疗药物的敏感性。通 过引入与具有癌基因特性的miRNA互补的合成的反义寡聚核苷酸——抗miRNA寡聚核苷酸 (AMOs)——可能有效的灭活肿瘤中的miRNAs，延缓其生长。临床上，可以通过经常的或者持 续的2’ -0-甲基化或者锁核酸(LNA)等修饰的反义寡聚核苷酸给药使miRNA失活。这些 修饰使得寡核苷酸更稳定，比其他治疗手段毒性更低。使用antagomirs (与胆固醇偶联的 AMOs)，注射小鼠后可以在不同器官有效抑制miRNA活性，因而可能成为一种有希望的治疗 药物。相反的，过表达那些具有肿瘤抑制基因作用的miRNAs，如let-7家族，也可以用于治 疗某些特定的肿瘤。反义寡聚核苷酸(Flanagan WM. Antisense comes of age. Cancer & Metastasis Reviews 1998 ;17(幻169-76)是指一段可以与其靶基因的碱基互补的核苷酸。反义寡聚 核苷酸可以抑制相应基因的表达。人microRNA-185 (has-miR-185)位于 22 号染色体，前体序列为 AGGGGGCGAGGG AUUGGAGAGAAAGGCA⑶UCCUGAUG⑶CCCCUCCCCAGGGGCUGGCUUUCCUCUG⑶CCUUCCCUCCCA，含有 2 个成熟 microRNA :hsa-miR-185 (MIMAT0000455,序列为 UGGAGAGAAAGGCA⑶UCCUGA)和 hsa-miR-185*(MIMAT0004611，序列为 AGGGGCUGGCUUUCCUCUGGUC)。Yang 等利用 microarray 发现肺鳞状细胞癌中miR-185*表达上调(Yang et al.，2010)。Imam等发现miR-185在 卵巢癌，小儿肾肿瘤和乳腺癌细胞株等中表达下调，并伴随其靶基因Sixl的上调(Imam et al. ,2010) ο Liu等利用系统生物学方法发现肾透明细胞癌(clear cell Renal Cell Carcinoma)中miR-185表达发生变化(Liu et al.，2010)。Takahashi等发现在非小细胞肺 癌细胞株H1299中过表达miR-185后抑制了细胞生长(Takahashi et al.，2009)。Gottardo 等发现miR-185在肾细胞癌中表达上调(Gottardo et al.，2007)。Choong等发现miR-185 对脐血来源的CD34细胞成熟有密切关系。但在胶质瘤中还没有关于miR-185的功能和表 达水平的研究报道。近三十年，尽管临床上肿瘤的综合治疗已很普遍，但以手术为主，放化疗本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种反义寡聚核苷酸，其特征在于，所述反义寡聚核苷酸包含与下述核苷酸序列中１３～２５个连续的核苷酸互补的序列：５’－ＡＧＧＧＧＣＵＧＧＣＵＵＵＣＣＵＣＵＧＧＵＣ－３’。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，张佩琢，段春晓，李捷，沈孝坤，
申请(专利权)人：苏州吉玛基因股份有限公司，中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：32
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