一种亲和筛选菠萝蛋白酶的亲和配基的方法技术

本发明专利技术涉及一种亲和筛选菠萝蛋白酶的亲和配基的方法，包括：(1)生物淘洗；(2)噬菌体定向扩增与富集：(3)滴度测试；(4)单克隆噬菌体扩增；(5)ELISA测试；(6)DNA测序，Ile-XXX-Ser-Pro-XXX-XXX-XXX(LXSPXXX)。本发明专利技术的制备方法简单，成本低廉，大肠杆菌与噬菌体的生物资源丰富；选出来的对菠萝蛋白酶有亲和作用的7肽配基对菠萝蛋白酶有较高的亲和作用，并且能够发现其一致序列，对于蛋白质组学中的蛋白质互相作用提供丰富的实验数据；菠萝蛋白酶高亲和力的7肽配基更可用于对菠萝蛋白的分离纯化研究。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．一种亲和筛选菠萝蛋白酶的亲和配基的方法，包括：（１）酶标板包被１００～３００μｌ菠萝蛋白酶溶液，４℃轻微震荡，孵育１２－２４ｈ，之后冲洗包被液，加满封阻液，０～４℃静置１～２ｈ，完成后去除封阻液，用ＴＢＳＴ缓冲液迅速洗酶标板２～１０次；噬菌体７肽库以５～１０倍稀释度加入上述酶标板的酶标孔中，摇动１～２ｈ，ＴＢＳＴ缓冲液迅速洗酶标板２～１０次，用５０～１００μｇ／ｍｌ游离菠萝蛋白酶分子ＴＢＳ洗脱液竞争性洗脱吸附在固相酶标板上的噬菌体，室温摇动１～２ｈ，洗脱下来的噬菌体作滴度测试；（２）挑取ＥＲ２７３８菌株培养于ＬＢ－Ｔｅｔ培养液中，２５～３７℃１８０～２００ｒｐｍ振荡培养１２－２４ｈ，之后用...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱利民，陈天翔，聂华丽，汪雯，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：31