一种具有免疫活性的多糖及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫制剂，具体涉及一种具有免疫活性的多糖（简称李特多糖）及其制备方法。本发明专利技术的多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。本发明专利技术的多糖对特异性和非特异性免疫、体液免疫或细胞免疫均有促进作用，其效果胜于云芝多糖。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫制剂，具体涉及一种具有免疫活性的多糖(简称李特多糖)及其制备方法。多糖具有较强的生物活性及功能，并具有非特异性免疫调节作用，因此为肿瘤、艾滋病及其他疾病治疗开辟了新方向。经过研究开发，目前已有多种多糖问世。但是，现有的多糖活性不高，服用剂量大，从甜菜中提取的多糖尚不尽如人意。本专利技术的目的在于克服上述缺点，研制一种从甜菜中提取的李特多糖。本专利技术提供了一种李特多糖，其特征在于该李特多糖是由从甜菜中提取的多糖与药用辅料组成的，其中多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。本专利技术的李特多糖理化数据如下1、分子量＞670k。2、含碳量38～40％，含氮量5～16％。3、中性糖含量40～70％，糖醛酸含量45～70％。4、旋光度+50～+705、组成其结构的单糖有阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖6、红外吸收光谱数据3430～3433cm-1、2935～2940cm-1、2150～2160cm-1、1742～1748cm-1、1620cm-1、1440cm-1、1245～1248cm-1、1146cm-1、1022cm-1、633cm-1。7、紫外吸收光谱数据323～327nm本专利技术的李特多糖对免疫功能的实验研究如下(上海医药工业研究院药理室试验)1、受试药物1.1名称李特多糖1.2送样单位上海交大昂立股份有限公司1.3批号986041.4溶剂生理盐水1.5配制方法精确称取所需样品量，以生量盐水稀释至所需浓度即可。2、动物2.1来源、种属、品系昆明种小鼠，由上海医药工业研究院动物组提供，动物合格证号“沪动(字)第107号”。C57BL/6及ICR小鼠由上海中科院实验动物中心提供，动物合格证号“中科动管会第005号”。实验动物环境清洁级。2.2体重20±2克2.3性别根据实验所需，每批实验使用同一性别动物。2.4动物数试验组及阳性对照组每组10只，阴性对照组每组20只。3、其他材料3.1培养基RPMI 1640，Difco产品，内含10～15％灭活小牛血清(NBS)。3.2培养细胞Yac-1、L929本实验室传代维持。3.3刀豆球蛋白A(ConA)Sigma产品。3.4阳性对照品云芝精华，香港百草堂产品。4、剂量设置李特多糖50、10及2mg/kg。阳性对照云芝精华2g/kg。5、给药方案灌胃，每天一次，连续十四天。6、试验主要步骤6.1李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验取C57BL/6小鼠随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日在无菌条件下取小鼠脾脏，用100目筛制成单个脾细胞悬液，用含10％灭活小牛血清的RPMI1640培养液调节细胞浓度为1×107个细胞/ml，加入96孔细胞培养板，每孔100μl(1×106个细胞/孔)，再加入含ConA(5ug/ml)的培养液100μl，置37℃5％CO2条件培养72小时。轻轻吸弃上清液100μl，加入MTT溶液(MTT溶液为5mg/ml)20μl。放置37℃5％CO2条件培养2小时后加入消化液100μl，再放置至次日测各孔OD值并以公式计算刺激指数。刺激指数＝实验组OD值/对照组OD值实验结果表明，李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案能促进正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖作用，各剂量组的刺激指数与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01)。详见表1、2。表1 李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验组别 剂量给药方案 OD值 刺激指数/kgX±SD李特多糖50mgpo×14qd 0.89±0.08***2.23李特多糖 10mgpo×14qd0.87±0.05***2.18李特多糖 2mg po×14qd0.79±0.08***1.98云芝精华 2g po×14qd0.86±0.07***2.15对照 相应溶剂 po×14qd0.40±0.07与对照组相比***P＜0.01表2 李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验组别 剂量 给药方案OD值 刺激指数/kg X±SD李特多糖 50mg 0.79±0.07***2.19李特多糖 10mg 0.74±0.08***2.06李特多糖 2mg0.68±0.06***1.89云芝精华 2g 0.78±0.07***2.17对照 相应溶剂 0.36±0.04与对照组相比***P＜0.016.2李特多糖对正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验取C57BL/6小鼠随机分组，按实验设计给药，末次给药后次日在无菌条件下取小鼠脾脏，用100目筛网制成单个脾细胞悬液，低渗除去红细胞，将细胞悬液转入培养瓶中，37℃ 5％CO2条件培养1小时后去除贴壁细胞，计数活细胞并调整细胞浓度为3×106个细胞/ml作为效应细胞。靶细胞取L929体外培养细胞，常规培养24小时，以培养液调整细胞浓度为1.5×105个细胞/ml，使效靶细胞之比为20∶1。取96孔培养板分别加入效应细胞和靶细胞，另设效应细胞和靶细胞对照，于37℃5％CO2条件培养4小时后，加入MTT染色液，再培养2小时后加入消化液于次日测各孔OD值，按公式计算NK细胞毒活性。NK细胞毒活性％＝{/靶细胞对照组OD均值}×100。实验结果表明，李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案能明显地激活正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性，NK细胞活性提高率与剂量有一定的相关性，详见表3、4。表3 李特多糖对正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验组别 剂量 给药方案OD值 NK活性/kgX±SD 提高率％李特多糖 50mg0.39±0.06***30.36李特多糖 10mg0.40±0.07***28.57李特多糖 2mg 0.46±0.08**18.57云芝精华 2g 0.39±0.06***30.89对照 相应溶剂 0.56±0.09与对照组相比***P＜0.01**P＜0.01表4 李特多糖对正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验组别 剂量 给药方案 OD值NK活性/kg X±SD 提高率％李特多糖 50mg 0.40±0.06***29.82李特多糖 10mg 0.42±0.07***25.96李特多糖 2mg 0.47±0.06**18.07云芝精华 2g0.38±0.08***34.21对照 相应溶剂0.57±0.11与对照组相比***P＜0.01**P＜0.016.3李特多糖对正常C57BL/6小鼠的溶血素抗体生成影响取C57BL/6小鼠，每鼠腹腔注射5％生理盐水配制的鸡红细胞混悬液0.2ml/只进行免疫。当日随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日摘眼球取血，离心，取血清用生理盐水稀释100倍。取稀释血清1ml与鸡红血球悬液0.5ml、10％补体0.5ml混合，在37℃恒温箱中保温30分钟后，0℃冰箱中止反应、离心取上清液于分光光度计570nm处比色，测录光密度(OD值)，另设不加血清的空白对照，取其上清液作为比色时调“0”的基准。以光密度(OD值)读数作为判定血清溶血素的指标，比较各组的差异。实验结果表明李特多糖以50、10、2mg/kg po本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有免疫活性的多糖，其特征在于该多糖是由从甜菜中提取的多糖与药用辅料组成的，其中多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：范小兵，
申请(专利权)人：上海交大昂立股份有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]