具有免疫刺激活性的多糖化合物制造技术

本发明专利技术涉及呈现免疫刺激活性的式Ｉ的多糖化合物，其制备方法，其在免疫抑制疾病中的用途以及包含所述化合物的药物组合物。式Ｉ，其中ｎ＝７－８。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及呈现免疫刺激活性的式I的多糖化合物、其获得方法、其在治疗免疫抑制疾病中的用途以及包含该化合物的药物组合物。
技术介绍
免疫系统可以定义为分子、细胞和器官的集合，其复杂的相互作用形成通常能保护个体免受外部侵袭及其自身变异细胞的应急系统。免疫系统可分为两个功能不同的部分先天的元件和获得性的元件。先天免疫是指非特异性和非适应性的免疫元件，它们能区分外来组织/生物体但不能识别特定的入侵者，它们可最佳地被分成屏障(皮肤和粘膜)、非特异性化学物质(存在于粘膜分泌物中的酶、奎宁和组胺)和非特异性效应细胞(巨噬细胞)。获得性免疫是指特异性并且适应性的元件。它们能将外来细胞与自身区分开来，并能区分一种外来抗原与另一种。获得性免疫具有记忆，这使得对于相同微生物的再次感染产生免疫和抵抗。负责获得性免疫的细胞是淋巴细胞，其存在两个亚群B细胞和T细胞。获得性免疫可通过自然感染或疫苗接种(以主动方式)，或者通过给予免疫细胞(以被动方式)来获得。前种方式呈现出长期持久的效应甚至可以是永久的作用，而后种方式并不持久。免疫抑制疾病患者通过免疫刺激物来治疗以激活其免疫系统。不同的免疫刺激物在US 4801578，US 5417979，WO 9851319中有所记载。多糖免疫刺激物在DE 19817177和EP 0 225 496中有所记载。这些专利公开了具有免疫刺激活性的多糖化合物以及它们可从植物细胞培养物中获得，其中使用了植物紫松果菊(Echinaceapurpurea)、Echinacea angustifolia和金盏花(Calendulaofficinalis)。但是，这些免疫刺激化合物对于免疫抑制疾病都没有呈现出令人满意的活性。因此，本领域中需要呈现改善而广泛活性的可供选择的免疫刺激物。专利技术概述本专利技术提供了呈现出免疫刺激活性的式I的多糖化合物、其获得方法、其在治疗免疫抑制疾病中的用途以及包含该化合物的药物组合物。本专利技术一方面涉及式I的多糖化合物图解I 其中n＝7-8。本专利技术第二方面涉及获得式I多糖化合物的方法。该方法包括首先，根据我们同时待审的一项中请中所公开的方法而从植物金盏花(Calendula officinalis)中获得含水提取物；其次，通过采用由生物测定指导的分离技术的组合来分离该多糖。本专利技术的另一方面涉及本专利技术的式I多糖化合物作为治疗剂在治疗免疫抑制疾病中的用途，所述疾病如癌症、结核病、流感、普通感冒、过敏、红斑狼疮、牛皮癣和艾滋病。本专利技术的另一方面涉及包含式I多糖化合物的药物组合物。本申请包括下列附图和表格附图说明图1是分离PF2的图解。图2是分离PF2R的图解。图3是PF2RS8A的1H-RMN谱。图4是PF2RS8A的13C-NMR谱。图5是用TFA水解PF2RS8A的水解产物及其它单糖的TLC。图6是分离PF2RS8B2即式I多糖的图解。图7是在蒸发光散射探测器下PF2RS8B2的HPLC曲线。图8是在光电二极管UV探测器下PF2RS8B2的HPLC曲线。图9是PF2RS8B2的1H-RMN谱。表1反映了样本PF2RS8A和PF2RS8B2对淋巴细胞转化的作用。图10是PF2RS8B2 即式I多糖的13C-NMR谱。图11是PF2RS8B2的DEPT-135谱。图12是PF2RS8B2的DEPT-90谱。图13是PF2RS8B2的HMQC谱。图14是PF2RS8B2的1H-1H COSY谱。图15是PF2RS8B2的1H-1H COSY谱。图16是PF2RS8B2的HMQC谱。表2反映了PF2RS8B2的13C-NMR谱。图17是PF2RS8B2的HMBC谱。图18是PF2RS8B2的HMBC谱。图19是用TFA水解PF2RS8B2的产物和其它单糖的TLC。图20是分子量测量图专利技术详述正如以上所述，本专利技术的第一方面涉及式I多糖化合物方案I 其中n＝7-8式I化合物的构型结构为图解II 其中n＝7-8该多糖化合物的平均分子量为约10000。本专利技术第二方面涉及获得式I多糖化合物的方法。此方法包括首先，根据我们同时待审的与本申请同时提交的名为“制备植物的含水提取物的方法以及如此获得的提取物”的专利申请中公开的方法从植物金盏花(Calendula officinalis)中获得一种含水提取物；其次，通过由生物测定指导的分离技术的组合来分离该多糖。金盏花(Calendula officinalis)的含水提取物通过使该植物的花经历以下过程来获得a)对花进行去污净化；b)将花粉碎；c)对粉碎的花进行激光辐射处理；d)将步骤c)获得的混合物悬浮于水中；e)对步骤d)中获得的悬浮液进行浸渍处理；f)分离所得的液体。去污净化(步骤a)通过用水清洗金盏花(Calendulaofficinalis)的花来完成。此步骤中所用水量不是决定性的，可根据植物的污染状况而变化。尽管不排除较高和较低的温度，水温应在10-40℃之间，优选在20-35℃之间，最优选28℃。可用洗涤槽来易化此步骤。水量和植物在洗涤槽内停留的时间这两者都不是决定性的，并因此可以根据植物的污染状况而变化。清洗步骤可进行数次，每两次之间要有干燥的步骤。该干燥步骤优选通过将植物置于阳光下来完成。一旦花得到完全净化后，通过传统方法诸如粉碎机或者甚至是手工来进行粉碎。尽管不排除较高和较低的温度，应该在10-40℃之间对花进行粉碎。接下来对粉碎的花进行激光辐射处理(步骤c)。作为激光辐射源，优选使用谐波发生波长在150-810nm范围内的红色线性激光二极管，激光辐射的波长更优选为200-400nm，最优选250nm。激光辐射的能量优选为1-60瓦特，更优选10-30瓦特，最优选20瓦特。光点的直径优选为1至6毫米，更优选2至5毫米，最优选4毫米。将粉碎的植物暴露于激光辐射以使全部或者大部分的混合物受到照射，这可以通过手工操作将激光发生器移动通过粉碎的植物或者通过将粉碎的物质置于传送带上通过一组数个激光发生器。优选每公斤的粉碎物质经激光辐射处理3至10分钟，更优选5分钟。尽管不排除较高和较低的温度，应该在10-40℃之间对粉碎的植物进行激光辐射处理。接着将经激光处理的物质悬浮在水中(步骤d)。此步骤可以使用任何商购的矿泉水。使每升水中存在50至300克，优选100至250克经激光处理的物质来完成悬浮。尽管不排除较高和较低的温度，应该在10-40℃之间将粉碎的植物悬浮在水中。然后将悬浮液在2-10℃优选4-8℃下放置5至20天时间，优选7至15天，从而浸渍混合物(步骤e)。最后，在浸渍步骤之后，将液相与固相分离(步骤f)。可对固体进行挤压以有助于分离。分离可以单单通过倾析来完成，或者优选通过倾析然后过滤来完成。优选在压力下进行过滤。最优选利用5μm、1μm和0.22μm的滤器进行三次连续的加压过滤。尽管不排除较高和较低的温度，应该在10-40℃之间进行分离。最终，获得了一种赭色含水提取物。接下来将这样获得的提取物进行分离过程，包括由生物测定指导的用甲醇进行沉淀、离心和层析分离。运用的生物测定是根据参考文献Max W.等人Journal of Natural Products，vol.54，no.6，pp.1531-1542(1991)将样品加入从小本文档来自技高网...

【技术保护点】
式Ⅰ的多糖＊＊＊其中ｎ＝７－８。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：JM弗里阿斯潘纳，
申请(专利权)人：博桑得集团咨询公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]