包含改性糖部分的免疫刺激寡核苷酸类似物制造技术

本发明专利技术涉及包括至少一个ＦＡＮＡ取代的核苷酸类似物和嘧啶－嘌呤二核苷酸的寡核苷酸。本发明专利技术还涉及使用其药物组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】1、
本专利技术主要涉及免疫学领域。更具体地，本专利技术涉及具有增强免疫刺激能力的治疗性寡核苷酸。2、
技术介绍
的讨论细菌DNA对于激活B细胞和天然杀伤细胞具有免疫刺激效果，但是脊椎动物DNA不具有(Tokunaga，T.，et al.，1988.Jpn.J.CancerRes.79：682-686；Tokunaga，T.，et al.，1984，JNCI 72：955-962；Messina，J.P.，et al.，1991，J.Immunol.147：1759-1764；andreviewed in Krieg，1998，In：Applied Oligonucleotide Technology，C.A.Stein and A.M.Krieg，(Eds.)，John Wiley and Sons，Inc.，New York，NY，pp.431-448)。现在理解细菌DNA的这些免疫刺激效应为在特定碱基背景中的未甲基化的CpG二核苷酸(CpG基序)的存在的结果，其在细菌DNA中是常见的，但是在脊椎动物DNA中为甲基化的和表现不足的(underrepresented)(Krieg et al，1995Nature374：546-549；Krieg，1999Biochim.Biophys.Acta 93321：1-10)。细菌DNA的免疫刺激效应可以用包含这些CpG基序的合成寡脱氧核苷酸(ODN)模拟。此类CpG ODN对人类和鼠白细胞具有高度的刺激效应，诱导B细胞增殖；细胞因子和免疫球蛋白分泌；天然杀伤(NK)细胞裂解活性和IFN-γ分泌；和树突细胞(DCs)和其它抗原呈递细胞的激活以表达共刺激分子和分泌细胞因子，特别是在促进Th1-样T细胞应答的发展上重要的Th1-样细胞因子。天然磷酸二酯主链CpG ODN的这些免疫刺激效应的高度CpG特异性在于如果将CpG基序甲基化，改变为GpC，或否则消除或改变，该效应显著降低(Krieget al，1995Nature374：546-549；Hartmann et al，1999Proc.Natl.Acad.Sci USA96：9305-10)。在早期研究中，认为免疫刺激CpG基序符合化学式嘌呤-嘌呤-CpG-嘧啶-嘧啶Krieg et al，1995Nature 374：546-549；Pisetsky，1996J.Immunol.156：421-423；Hacker etal.，1998EMBO J.17：6230-6240；Lipford et al，1998Trends in Microbiol.6：496-500).然而，现在清楚小鼠淋巴细胞对不符合该“化学式的”磷酸二酯CpG基序良好地应答，并且对于人类B细胞和树突细胞而言同样如此(Yi et al.，1998J.Immunol.160：5898-5906)且对于人类B细胞和树突细胞也是同样的(Hartmann et al，1999Proc.Natl.Acad.Sci USA 96：9305-10；Liang，1996J.Clin.Invest.98：1119-1129)。将DNA和RNA寡核苷酸通过外切核酸酶和内切核酸酶进行消化，其分别降解在核酸分子末端处和内部位点处的核苷酸间的磷酸酯键合。降解率可以依赖于核酸的位置而变化，例如细胞外(快速地)vs细胞内(通常较慢)，以及在后一情况下包含核酸的细胞内区室，例如溶酶体(快速地)vs细胞质(较慢)。这样，增加寡核苷酸抗核酸酶的能力具有通过延长其在细胞中的功能寿命增强其功效的潜力。已经报道许多方法产生RNA和DNA的稳定化形式。参见，例如，Uhlmann E et al.(1990)Chem Rev 90：543-84。不幸的是，许多这些方法尚未产生令人满意的备选方案，这要么因为获得的稳定性是不充分的，要么因为在稳定性上的增益与功能的损失相关。-->
技术实现思路
本专利技术提供化学上改性的寡核苷酸，其特征在于与相应的天然发生的DNA分子相比其对核酸酶和酸的增加的稳定性。本专利技术主要涉及这样的免疫调节寡核苷酸，其包含包括至少一个FANA改性的嘌呤核苷的免疫调节基序。本专利技术的免疫调节寡核苷酸用于要求调节免疫应答的组合物或方法的任何设置或应用。本专利技术的免疫调节寡核苷酸具有在制备药物组合物，包括佐剂、疫苗和其它药剂上的特定用途，以用于治疗各种状况，包括感染、癌症、过敏、自体免疫疾病、炎症疾病和哮喘。本专利技术的一个方面为长度上8-200个核苷酸的免疫调节寡核苷酸，包括至少一个免疫调节ZNYZ基序，其中Z为嘌呤核苷或2′-脱氧-2′-氟-β-D-阿拉伯糖(FANA)-改性的嘌呤核苷，N为T，A，或5-取代的U，Y为嘧啶核苷，并且其中至少一个Z包括FANA-改性的嘌呤核苷。在一种实施方式中，所述免疫调节基序为ZNYZ N1N2N3N4。在另一实施方式中，所述免疫调节基序为ZNYG基序，其中YG为内部嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸。在一种实施方式中Z为G。在另一实施方式中至少一个G包括FANA-改性。在一种实施方式中，N为T。在另一实施方式中，N为5-氯-尿嘧啶、5-碘-尿嘧啶、5-乙基-尿嘧啶、5-丙基-尿嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶或(E)-5-(2-溴乙烯基)-尿嘧啶。在一种实施方式中所述寡核苷酸包括在所述免疫调节基序5′的至少4个核苷酸。在另一实施方式中在免疫调节基序外部的至少一个核苷酸具有FANA改性。在一种实施方式中所述寡核苷酸不是反义寡核苷酸。在另一实施方式中所述寡核苷酸包括多个内部YZ二核苷酸。在还另一实施方式中每个内部YZ二核苷酸的Z包括FANA-改性。在某些实施方式中Z为鸟嘌呤核苷、2′-脱氧鸟嘌呤核苷、2′-脱氧-7脱氮鸟嘌呤核苷、2′-脱氧-6-硫代鸟嘌呤核苷、阿拉伯糖基鸟嘌呤核苷(arabinoguanosine)、2′-脱氧肌苷、2′-脱氧2′-取代的阿拉伯糖基鸟嘌呤核苷、2′-O-取代-阿拉伯糖基鸟嘌呤核苷或其它非天然嘌呤核苷。在一种实施方式中Z为G。在一种实施方式中Y为C并且Z为G，并且其中所述CG二核苷酸的C为未甲基化的。在另一实施方式中Y为胞嘧啶、2′-脱氧胞嘧啶、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷、阿拉伯糖基胞嘧啶核苷(arabinocytidine)、1-(2′-脱氧-B-D-呋喃核糖基(ribofuranosyl))-2-氧-7-脱氮--8--甲基嘌呤、2′-脱氧-2′-取代的阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、2′-O-取代的阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、2′-脱氧-5-羟基胞嘧啶核苷、2′-脱氧-N4-烷基胞嘧啶核苷、2′-脱氧-硫代尿苷或其它非天然嘧啶核苷。在一种实施方式中所述免疫调节寡核苷酸为免疫刺激寡核苷酸。在另一实施方式中所述免疫调节寡核苷酸为免疫抑制寡核苷酸。在各种实施方式中，所述免疫调节寡核苷酸为A，B，C，P，T，E或S类寡核苷酸。在一种实施方式中，所述寡核苷酸少于15个核苷酸长。在另一实施方式中，所述寡核苷酸具有至少一个稳定化的核苷酸间键合(internucleotide linkage)。在一种实施方式中所述至少一个稳定化的核苷酸间键合选自：硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、硫代甲基磷酸酯、乙酸磷酸酯、Rp-硫代磷酸酯、Sp-硫代磷酸酯、硼烷磷酸酯(b本文档来自技高网...

【技术保护点】
长度上为８－２００个核苷酸的免疫调节寡核苷酸，包括至少一个免疫调节ＺＮＹＺ基序，其中Ｚ为嘌呤核苷或ＦＡＮＡ－改性的嘌呤核苷，Ｎ为Ｔ、Ａ或５－取代的Ｕ，Ｙ为嘧啶核苷，并且其中至少一个Ｚ包括ＦＡＮＡ－改性的嘌呤核苷。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-10-9 60/998,2151.长度上为8-200个核苷酸的免疫调节寡核苷酸，包括至少一个免疫调节ZNYZ基序，其中Z为嘌呤核苷或FANA-改性的嘌呤核苷，N为T、A或5-取代的U，Y为嘧啶核苷，并且其中至少一个Z包括FANA-改性的嘌呤核苷。2.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中所述免疫调节基序为ZNYZ N1N2N3N4。3.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中所述免疫调节基序为ZNYG基序，其中YG为内部的嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸。4.根据权利要求2所述的免疫调节寡核苷酸，其中N，N1，N2，N3和N4为T。5.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括免疫调节基序的5′的至少4个核苷酸。6.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中在所述免疫调节基序外部的至少一个核苷酸具有FANA改性。7.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中所述寡核苷酸不是反义寡核苷酸。8.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括多个内部YZ二核苷酸，并且其中每个内部YZ  核苷酸的Z包括FANA-改性。9.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中Z为鸟嘌呤核苷(G)、2′-脱氧鸟嘌呤核苷、2′脱氧-7脱氮鸟嘌呤核苷、2′脱氧-6-硫代鸟嘌呤核苷、2′脱氧-8-羟基鸟嘌呤核苷、阿拉伯糖基鸟嘌呤核苷、2′-脱氧肌苷、2′-脱氧2′-取代的-阿拉伯糖基鸟嘌呤核苷、2′-O-取代-阿拉伯糖基鸟嘌呤核苷或其它非天然嘌呤核苷。10.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中Y为C并且Z为G，并且其中所述CG二核苷酸的C未甲基化。11.根据权利要求1所述的免疫调节寡核苷酸，其中Y为胞嘧啶、2′-脱氧胞嘧啶、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷、阿拉伯糖基胞嘧啶核苷、1-(2′-脱氧-B...

【专利技术属性】
技术研发人员：H德贝拉克，M朱尔克，E乌尔曼，M韦伯，
申请(专利权)人：科利制药公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]