本发明专利技术涉及医药生物学技术领域，具体是利用ＳＯＣＳ１干扰技术对核酸疫苗的载体进行改造，以增强核酸疫苗免疫活性的一种方法。本发明专利技术经过在核酸疫苗骨架添加一种靶向干扰人或者小鼠细胞因子信号转导途径抑制分子１（ＳＯＣＳ１）分子的小干扰ＲＮＡ表达序列及其表达元件而实现，该小干扰ＲＮＡ序列如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１或２所示。更进一步，上述的表达元件具有如ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：３或４所示的核苷酸序列。本发明专利技术制备的核酸疫苗可以有效地抑制体内树突状细胞内ＳＯＣＳ１分子的表达，从而增强核酸疫苗转染后的树突状细胞的存活能力及诱导细胞免疫反应的能力，最终获得显著增强的细胞免疫反应，从而为机体提供有效免疫保护或者治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药生物学
，具体是利用SOCSl干扰技术对核酸疫苗的载体进行改造，以增强核酸疫苗免疫活性的一种方法。
技术介绍
细胞因子信号转导抑制因子(SOCSl)是抗原递呈细胞尤其是树突状细 胞(DC)内广泛分布的一种免疫负向调控分子，其主要作用是对JAK1-STAT1 信号转导通路进行抑制，从而抑制抗原递呈细胞的免疫活化过程。在生理情 况下，该分子对体内免疫反应，尤其是细胞免疫反应的自然衰减过程意义重 大。但是，在疫苗领域，DC中的SOCSl的表达上调可以直接导致DC不能 分泌IL-12等重要细胞因子，进而导致其无能和失活。(Alexander WS, Hilton DJ. The role of suppressors of cytokine signaling (SOCS) proteins in regulation of the immune response. ^4rtrtM Z ev 7m附Mwo/, 2004,22:503-529.)而如果禾lj用 RNA干扰技术抑制了 DC中SOCSl的表达及活性，则可以较持久而显著地 增强机体的细胞免疫反应。国内外研究者己经通过DC疫苗这一特殊疫苗 形式上进行了试验，并发现转染了 SOCSl干扰慢病毒的DC可以在体内外 显著分泌IL-12;该类DC在抗原致敏后，可以在体内诱导很高水平的抗原 特异性细胞免疫反应(Lei Shen， Kevin Evel-Kabler, Randy Stmbe, and Si-Yi Chen. Silencing of SOCSl enhances antigen presentation by dendritic cells and antigen-specific anti-tumor immunity. 7Vflfw,e祝WecA朋/og);, 2004, 22, 1546 -1553)，在黑色素瘤，HIV等疾病模型上均取得了很好的疗效(Kevin Evel-Kabler, Xiao-Tong Song, Melissa Aldrich， Xue F. Huang, and Si-Yi Chen. SOCSl restricts dendritic cells' ability to break self tolerance and induce antitumor immunity by regulating IL-12 production and signaling. / C7/". 2006.116:90-100.)。这点发现对疫苗领域的发展有着重要意义。核酸疫苗是一种重要的新型疫苗(Donndly, J. J., J. B. Ulmer, J. W. Shiver, andM. A. Liu. DNAvaccines. Jmi".及ev. /附柳"fw /" 1997, 15: 617—648)。由于其诱导细胞免疫反应的特殊能力，它在某些病毒感染，胞内菌感染，肿瘤等 疾病的治疗上有着特殊的意义。核酸疫苗免疫后，产生免疫反应的核心在于DC的被转染，激活，以及进一步的抗原递呈过程(Omid Akbari, Naveed Panjwani, and Sylvie Garcia et al. DNA Vaccination: Transfection and Activation of Dendritic Cells as Key Events for Immunity.丄五;c/). 1999, 189:169-177.)。如果采用RNA干扰等技术手段减少SOCSI在核酸疫苗转染后 的DC中的表达，可能对延长核酸疫苗转染后DC的寿命，增强疫苗诱导的 细胞免疫活性及促进免疫记忆形成有很大意义。2006年，美国研究者采用核 酸疫苗与SOCSI靶向干扰质粒共注射的方式，对HIV核酸疫苗有显著增强 细胞免疫的作用(Xiao-Tong Song, Kevin Evel-Kabler, Lisa Rollins, Melissa Aldrich, Feng Gao, Xue F. Huang, Si-Yi Chen. An Alternative and Effective HIV Vaccination Approach Based on Inhibition of Antigen Presentation Attenuators in Dendritic Cells.户丄。S 2006, 3:76-93)，更加证实了这一假设。但是，现有策略中，采用两个质粒载体分别进行SOCSI沉默和疫苗抗原表达的方案面临着很大的安全性问题。两种载体分开注射，可能导致SOCSI沉默质粒与疫苗抗原表达质粒的分离。由于DC表面MHC I分子正 常负载有少量自身抗原肽，当SOCSI沉默质粒转染该类DC而疫苗抗原表 达质粒未能同时转染时，该群DC可能会因SOCSI沉默作用而显著活化， 递呈自身抗原肽并最终引起自身免疫病。在某些以SOCSI沉默为基础的疫 苗学实验中己经出现了白癫风等自身免疫现象(Kevin Evel-Kabler， Xiao-Tong Song, Melissa Aldrich， Xue F. H腿g, and Si-Yi Chen. SOCSI restricts dendritic cells' ability to break self tolerance and induce antitumor immunity by regulating IL-12 production and signaling. / Jmvcs,. 2006,116:90-100.)。这对于其临床应用显然是不能接受的安全缺陷，因此SOCSI 沉默在疫苗领域尚需要进一步开发更好的应用策略来走向临床应用阶段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用socsi干扰技术对核酸疫苗的载体进行改造，以增强核酸疫苗免疫活性的方法。本专利技术提供了一种利用socsi干扰技术增强核酸疫苗免疫活性的方法，该方法是在核酸疫苗的质粒骨架上添加一种表达元件，该表达元件包括人U6启动子(RNA聚合酶III型启动子)和靶向干扰人或者小鼠细胞因子信号转导途径抑制分子1 (SOCSl)分子的小干扰RNA表达序列，该两种小 千扰RNA均经过筛选实验获得，序列分别如SEQ ID NO: 1或2所示。上述的表达元件是以人U6启动子作为启动子，+1G位点为转录起始 点，TTTT序列为转录终止序列。具体方案中，首先设计一段包含两段互补 的小干扰RNA序列及中间连接序列的小发夹RNA序列(shRNA)，随后将 该shRNA的DNA编码序列添加转录终止序列，克隆到U6启动子下游，从 而得到完整的表达元件并进一步克隆进入核酸疫苗质粒载体。上述的表达元件具有如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列，该序列基于 SEQ ID NO: 1所示的小干扰RNA序列设计并可用于人SOCSl分子的干扰。上述的表达元件具有如SEQ ID NO: 4所示的核苷酸序列，该序列基于 SEQ ID NO: 2所示的小干扰RNA序列设计并可用于小鼠SOCSl分子的干 扰。上述的核酸疫苗的质粒是p本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用ＳＯＣＳ１干扰技术增强核酸疫苗免疫活性的方法，其特征在于该方法是在核酸疫苗的质粒骨架上添加一种表达元件，该表达元件包括人Ｕ６启动子和靶向干扰人或者小鼠细胞因子信号转导途径抑制分子１分子的小干扰ＲＮＡ表达序列，该小干扰ＲＮＡ序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１或２所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙树汉，王越，郭瀛军，黄金凤，周奇，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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