本发明专利技术尤其涉及引起抗病原体的免疫反应的方法，包括：给予(i)源自所述病原体的一种或多种第一免疫原性多肽；(ii)包含一种或多种异源多核苷酸的一种或多种腺病毒载体，所述一种或多种异源多核苷酸编码源自所述病原体的一种或多种第二免疫原性多肽；和(iii)佐剂；其中所述一种或多种第一免疫原性多肽、所述一种或多种腺病毒载体和所述佐剂并行给予。本发明专利技术还涉及采用所述多肽、腺病毒载体和佐剂的病毒、药物组合物、试剂盒和用途。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是2008年2月28日提交的题为"新的方法和组合物"的国家申请号为 200880014359. 7 (PCT/EP2008/052448)的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及新的疫苗组合物及其用于刺激哺乳动物尤其人中的免疫反应的用途， 特别是用于预防和治疗病原体所致的感染。具体地，本专利技术涉及能够在受试者中诱导CD4+ 和CD8+T细胞反应以及抗体反应而不依赖于复杂的初免-加强（prime-boost)方案的组合 物。
技术介绍
十九世纪晚期开始，灭活的整个有机体就已成功地用于疫苗接种。近来，采用了 涉及给予提取物、亚基、类毒素和荚膜多糖的疫苗。自从可以使用基因工程技术以来，重组 蛋白的使用成为了受欢迎的策略，它消除了与使用来自天然来源的纯化蛋白相关的一些风 险。 早期的疫苗方法基于在体内刺激免疫反应的某些方面的蛋白的给药。随后理解到 还可以通过给予可以被宿主转录和翻译成免疫原性蛋白的DNA来增加免疫反应。 哺乳动物免疫反应具有两个重要的组分：体液反应和细胞介导的反应。体液反应 包括循环抗体的产生，该循环抗体结合其所特异性的抗原，从而中和抗原并有助于其随后 的清除，这种清除是通过涉及其他细胞毒性或吞噬性细胞的过程达成的。B细胞负责产生抗 体（浆B细胞），并保持免疫性体液记忆（记忆B细胞），即，在第一次接触抗原（例如，通 过疫苗接种）后若干年识别该抗原的能力。细胞介导的反应涉及许多不同类型的细胞的相 互影响，尤其是T细胞。T细胞分为一些不同的亚型，主要是⑶4+和⑶8+细胞。 诸如巨噬细胞和树突细胞等抗原呈递细胞（APC)充当免疫系统的守卫，屏蔽机体 与外来抗原。当APC检测到胞外的外来抗原时，将这些抗原吞噬（吞入）到APC内，这些抗 原在此被加工成较小的肽。随后，这些肽被呈递到APC表面的II类主要组织相容性复合体 (MHC II)上，它们在此可以被表达⑶4表面分子的抗原特异性T淋巴细胞（CD4+T细胞） 识别。当CD4+T细胞在存在其他足够的共刺激信号的条件下，识别它们在MHC II分子上的 特异性抗原时，它们被激活，并分泌一批细胞因子，这些细胞因子随后激活其他组的免疫系 统。一般地，⑶4+T细胞根据抗原识别后它们所产生的反应类型被分为1类辅助性T细胞 (Thl)或2类辅助性T细胞（Th2)亚型。在识别肽-MHC II复合体后，Thl⑶4+T细胞分泌 白细胞介素和细胞因子（如干扰素Y)，从而激活巨噬细胞释放有毒化学物质，如一氧化氮 和活性氧/氮。IL-2和TNF-a也一般被分为Thl细胞因子。相比之下，Th2⑶4+细胞一 般分泌如IL-4、IL-5或IL-13等白细胞介素。 辅助性CD4+T细胞的其他功能包括为激活B细胞产生和释放抗体提供帮助。它们 还可以参与抗原特异性⑶8+T细胞的激活，⑶8+T细胞是除⑶4+T细胞之外的另一主要的T 细胞亚型。 当在存在适当的共刺激信号的条件下，⑶8+T细胞特异性的肽由I类主要组织相 容性（MHC I)分子呈递到宿主细胞表面时，⑶8+T细胞识别它们。为了呈递到MHC I分子 上，外来抗原需要直接进入细胞内（胞质溶胶或核），如在病毒或胞内细菌直接穿过宿主细 胞或在DNA疫苗接种后的情况下。在细胞内，抗原被加工成小肽，这些小肽将被加载到MHC I分子上，重新定位到细胞表面。在激活后，⑶8+T细胞分泌一批细胞因子，如干扰素y，它 们激活巨噬细胞和其他细胞。具体地，CD8+T细胞的一个亚组在激活后分泌溶解性和细胞 毒性分子（如，粒酶（granzyme)、穿孔素）。这种CD8+T细胞被称为细胞毒性T细胞。 最近，描述了抗原呈递的另一途径，该途径涉及将胞外抗原或其片段加载到MHC I 复合体上，它被称为"交叉呈递"。 T细胞反应的性质还受疫苗中所使用的佐剂的组成的影响。例如，已经显 示含有MPL&QS21的佐剂能激活Thl CD4+T细胞分泌IFN- 丫（Stewart等人Vacci ne. 2006, 24(42-43) : 6483-92)。 尽管已熟知佐剂在增强对蛋白抗原的免疫反应中有作用，但它们一般不与DNA或 DNA基载体疫苗接种结合使用。有一些关于佐剂为何不与DNA载体基疫苗结合使用的假说。 确实，佐剂和载体之间的干涉可能对它们的稳定性有影响。此外，人们可能预测到在减毒载 体中添加佐剂能增加此产品诱导的反应原性。最后，增加DNA载体基疫苗的免疫原性可以 导致抗载体本身的中和免疫反应增强，从而排除了相同载体基疫苗随后注射的任何加强效 应。事实上，在涉及防止恶性疱原虫（P.falciparum)感染中，Jones等人（2001，J infect Diseases 183, 303-312)已报道了在DNA的初次免疫后组合DNA、重组蛋白和佐剂作为加强 组合物的不利后果。确实，在加强组合物只含有蛋白和佐剂的群组中寄生虫血症的水平显 著较低。推断在此方法中使用DNA、重组蛋白和佐剂的组合不利地影响了寄生虫血症和抗体 反应的后果。 另一方面，有加佐剂的DNA基载体疫苗效力增强的报道（Ganne等人 Vaccine (1994) 12(1301190-1196)。具体地，通过添加油佐剂的复制缺陷型腺病毒载体疫苗 效力的增强与较高的抗体水平相关，但是未报道对CD4和CD8 T细胞反应的影响。 W02007/016715公开了非致病性病毒作为佐剂的用途。它未提出所述病毒可以含 有任何异源多核苷酸。 通常认为CD4+和CD8+细胞两者的刺激都是最佳保护性免疫所需的，尤其是在某 些疾病中，如HIV感染/AIDS。为预防性或治疗性地诱导最佳的免疫反应，需要刺激CD4+和 ⑶8+细胞两者。这是"初免-加强"疫苗接种策略的主要目的之一，其中蛋白基疫苗（主要 诱导CD4+T细胞）与DNA载体基疫苗（即，裸DNA、病毒载体或胞内细菌载体，如李斯特菌 (listeria))(主要诱导CD8+T细胞）的交替给药或相反情况很可能激活CD4+和CD8+T细 胞反应。 然而，尽管"初免-加强"疫苗策略一般可能产生更强或更平衡的反应，不止一次， 且当然是超过两次接种的需要可能是繁琐的或甚至不可能的，尤其是在发展中国家的大量 免疫程序中。 此外，如上面已经提到的，通常不可能加强病毒载体组分，因为可能产生抗载体本 身的免疫。 因此，本专利技术的目的包括下列的一个或多个：(a)提供完整的疫苗接种方法和疫 苗组合物，该疫苗组合物刺激CD4+和/或CD8+细胞和/或抗体产生，尤其是能消除或减轻 重复免疫接种的需要；(b)提供疫苗接种方法和疫苗组合物，该疫苗组合物与仅含有免疫 原性多肽或仅含有多核苷酸的疫苗组合物相比，或与包括单独给予免疫原性多肽和多核苷 酸的传统初免_加强方法相比，更好地刺激CD4+细胞和/或CD8+细胞和/或抗体产生；（c) 提供刺激或更好地刺激Thl反应的疫苗组合物；(d)提供疫苗组合物和疫苗接种方法，其中 组分的所需剂量，尤其是病毒载体的所需剂量是最小的；和（e)更一般地提供可用于治疗 或防止病原体引起的疾病的疫苗组合物和疫苗接种方法。所谓"更好地刺激"是指反应的 强度和/或持久性增强。
技术实现思路
因此，根据本专利技术，提供一种引起抗病原体的免疫反本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种引起抗病原体的免疫反应的方法，包括：给予(i)源自所述病原体的一种或多种第一免疫原性多肽；(ii)包含一种或多种异源多核苷酸的一种或多种腺病毒载体，所述一种或多种异源多核苷酸编码源自所述病原体的一种或多种第二免疫原性多肽；和(iii)佐剂；其中所述一种或多种第一免疫原性多肽、所述一种或多种腺病毒载体和所述佐剂并行给予。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：GH沃斯，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE
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