运动发酵单胞菌的电穿孔遗传操作方法技术

本发明专利技术公开了一种运动发酵单胞菌的电穿孔遗传操作方法，包括下述步骤：将待转化ＤＮＡ通过电穿孔转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中或用运动发酵单胞菌无细胞提取液与待转化ＤＮＡ共同孵育，通过电穿孔将孵育后的ＤＮＡ转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中；本发明专利技术利用运动发酵单胞菌菌株无细胞培养液处理待转化ＤＮＡ，使其获得修饰，提高转化效率；利用本发明专利技术的方法优化了的关键电穿孔物理参数对不同的宿主和ＤＮＡ进行电穿孔，提高了运动发酵单胞菌电穿孔遗传操作的转化效率及稳定性，适应了所有通过电穿孔转化进行的、不同构建目的的遗传操作，从而又具有通用性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种运动发酵单胞菌的电穿孔遗传操作方法，其特征是包括下述步骤：将待转化ＤＮＡ通过电穿孔转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中或用运动发酵单胞菌无细胞提取液与待转化ＤＮＡ共同孵育，通过电穿孔将孵育后的ＤＮＡ转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中；所述运动发酵单胞菌的感受态细胞是将运动发酵单胞菌培养至ＯＤ↓［６００ｎｍ］＝０．３７５～０．４２０的菌液浓缩１００倍而制成；电穿孔操作的参数为：２ｍｍ电击杯中感受态细胞体积为８０μｌ～１６０μｌ；电场强度为１１．０～１４．０ｋＶ／ｃｍ；复苏时间为３ｈ～２４ｈ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹少兰，张鲲，洪解放，马媛媛，井欣，张敏华，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：12[]