一种负载季铵化壳聚糖和质粒ＤＮＡ复合粒子的皮肤再生材料的制备方法技术

本发明专利技术公开了负载季铵化壳聚糖和质粒ＤＮＡ复合粒子的皮肤再生材料的制备方法。该皮肤再生材料是通过将季铵化壳聚糖／质粒ＤＮＡ粒子导入胶原－壳聚糖／硅橡胶双层支架制备而成。通过导入的季铵化壳聚糖／质粒ＤＮＡ粒子在皮肤缺损创面的原位转染、表达皮肤再生修复过程的促血管生成因子，从而促进皮肤再生材料在创面上的快速血管化，诱导创面细胞的迁移、增殖和分化，实现创面快速、良好的修复。本发明专利技术所制备的皮肤再生材料具有快速的血管化性能和优异的创面修复能力，可广泛应用于创伤和烧伤等全层皮肤缺损的修复与再生，具有较好的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．一种负载季铵化壳聚糖和质粒ＤＮＡ复合粒子的皮肤再生材料的制备方法，包括如下步骤：１）用磷酸盐缓冲液或三蒸水分别配制浓度为１～２０ｍｇ／ｍＬ的季铵化壳聚糖溶液和浓度为０．１～５ｍｇ／ｍＬ的质粒ＤＮＡ溶液；将季铵化壳聚糖溶液与质粒ＤＮＡ溶液等比混合，震荡均匀，静置，制得季铵化壳聚糖／质粒ＤＮＡ粒子溶液；２）用质量浓度为０．３％～５％的乙酸溶液分别配制质量浓度为０．１％～１％的胶原溶液和质量浓度为０．１％～１％的壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液滴入胶原溶液中，搅拌均匀、真空脱泡，得到胶原－壳聚糖混合溶液，其中壳聚糖和胶原的质量比为１∶９～５∶５；将胶原－壳聚糖共混液注入模具中，采用冷冻－干燥法，在－５℃～－５０℃温度下冷冻干燥，获得胶原－壳聚糖三维多孔支架；将胶原－壳聚糖三维多孔支架于质量浓度为０．０５％～１％的戊二醛溶液中交联１～４８小时，反复清洗后，再次在－５℃～－５０℃温度下冷冻干燥；３）将医用胶粘剂以０．０５～０．５ｍｇ／ｃｍ２的量均匀涂覆在厚度为０．０５～０．２ｍｍ的硅橡胶薄膜表面，然后将步骤２）制备好的胶原－壳聚糖三维多孔支架放在涂覆胶粘剂的硅橡胶薄膜表面上，获得胶原－壳聚糖／硅橡胶双层支架。４）将步骤１）的季铵化壳聚糖／质粒ＤＮＡ粒子溶液逐滴加到胶原－壳聚糖／硅橡胶双层支架上，其中质粒ＤＮＡ与支架的重量比为０．５∶１００～１０∶１００，室温下孵化０．２～２小时，在－５℃～－５０℃温度下冷冻干燥，得到负载复合季铵化壳聚糖和质粒ＤＮＡ粒子的皮肤再生材料。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高长有，马列，毛峥伟，郭瑞，徐少骏，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]