辐照交联异种皮脱细胞基质制备方法及其产品技术

本发明专利技术属于医学用生物皮制品领域。辐照无菌异种皮脱细胞基质制备方法，主要包括：取皮；上机切皮，真皮、表皮分离，脱细胞：一脱：用１０～２０％的胰蛋白酶在３６～４０℃下，浸泡３０～５０分钟后用纯净水清洗；二脱：将上述沥水后含水量在１０～３０％的皮片，再用１０～２０％的脱氧核糖核酸酶、１０～３０％的核糖核酸酶先后交替地在３６～４０℃下，各浸泡２～４次后，再用脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶０．５～１．５％，３６～４０℃下再次浸泡５～３０分钟，除去真皮内可诱发宿主细胞识别反应的物质；将前述处理后的材料采用常规固定剂，浸泡５０～１２０分钟；辐照灭菌：经过电子加速器或Ｃｏ－６０进行γ射线辐照灭菌。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学用生物皮制品领域，具体地说属于生物皮脱细胞网状支架领域。
技术介绍
生物材料在治疗大面积烧烫伤患者中具有重要作用。近年来，国内外皮肤专家一直 在寻求良好的创面修复覆盖材料，以消除抗原性和排异反应为目的，制作异种皮冷冻保 存，永久性皮肤创面替代材料是当前急需的新技术。为提高抢救大面积烧伤病人的疗效， 具有广阔的前景。在中国专利CN1266716A中公开了一种交联型猪脱细胞皮片。采用0.25%的胰蛋白 酶在4'C下，浸泡16-24小时脱细胞，然后揭去表皮。之所以要这么长时间是因为在4 'C下胰蛋白酶脱细胞水平极低，即使是这么长时间，也达不到完全脱除的目的。另外， 表皮覆盖在真皮上，阻止了胰蛋白酶对真皮细胞的浸入，也对脱细胞不利。在中国专利CN1522766A中公开了 一种脱细胞真皮基质的制备方法，采用 0.04~0.06%的胰蛋白酶在2~4'。下，浸泡16~20小时脱细胞，然后揭去表皮；再次浸入 0.04~0.06%的胰蛋白酶在36.8~37.2°(:下消化30~60分钟，之后预冷，在-70~-80冷冻和 37 39'C融化的冻融，反复冻融3次，治如含抗生素的磷酸盐缓冲液中保存。该方法的 缺点是 一、如此低浓度的胰蛋白酶在此温度下脱细胞不完全；二、反复冻融会损伤支 架结构的柔软性和随意性。在中国专利CN1268401C中公开了一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，也是将带 有表皮的皮片加酶涂覆剂后放置长达18-50小时，脱细胞后再将表皮与真皮分离。最后 采用剂量为6 30KGry/h600)所产生的Y射线辐照灭菌。由于表皮覆盖在真皮上，阻止 了胰蛋白酶对真皮细胞的浸入，对脱细胞不利。另外，采用^Co为放射源，即使装源 50万居里，要想以6~30KGry/h的放射剂量满足对生物皮制剂的灭菌要求，需时长达 15小时以上，在实际生产中会造成极大的不便。在中国专利CN1732867A中公开了一种真皮面脱细胞、去抗原的敷料皮，是指对真 皮部分进行脱细胞、去抗原的处理，而完整地保留了表皮的结构。严格地说，这不能算 作猪皮脱细胞网状支架。在中国专利CN1775189A中公开了一种脱细胞真皮基质及其制备方法，提出的用氢 氧化钠和去污剂脱细胞的方案；该方案脱细胞的机理不明。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，本专利技术旨在提供一种辐照无菌异种皮基质制备方法及其 产品。辐照无菌异种皮脱细胞基质制备方法，主要包括1、 取皮，用5%碘伏浸泡10~30分钟灭菌，脱毛，去脂，裁剪，用纯净水清洗，甩 干至含水量15~25%之间；2、 上机切皮，真皮、表皮分离，取保留基底膜的真皮部分，厚度0.3~0.8mm， (0.5mm ±0. 04mm最佳)3、 脱细胞一脱上述真皮部分首先用1~15%的氯化钠水溶液浸泡30分钟后用纯净水清 洗；然后用10~20%的胰蛋白酶在36-40。C下，浸泡30~50分钟后用纯净水清洗； 使细胞核与细胞壁分离后，用36 4(TC生理盐水清洗2 4次甩干，再用纯净水清洗32~4次甩干，沥水30分。一脱后脱去80%以上组织细胞，只留残余细胞核与细胞碎片； 二脱将上述沥水后含水量在10-30% (25%最佳)的皮片，再用10~20%的 脱氧核糖核酸酶(DNA酶)、10~30%的核糖核酸酶(RNA酶)先后交替地在36~40 'C下，每次浸泡20~40分钟；各浸泡2~4次后，使细胞核与细胞碎片与细胞床完全 分离；再用脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶0.5~1.5%， 36 40'C下再次浸泡5~30分钟， 使成纤维细胞与细胞床壁分离。4、 除去真皮内可诱发宿主细胞识别反应的物质将前述处理后的材料用PH值 7.5 8. 5的纯水清洗甩干；采用常规固定剂，如福尔马林20%， 25 36。C下，浸 泡50~120分钟；5、 中间体检验(显微镜下看)物理性能——乳白色、有弹性、弯曲不断裂、微网状； 组织学结构与正常人体真皮内的细胞外基质结构相同的真皮结构组织； 细菌和异菌检验无菌 6、辐照灭菌经过电子加速器或Co-60进行Y射线辐照灭菌。辐照剂量150万~400万拉德。照射时间60~180秒，(120秒最佳)，使产品成细网结构。放置皮片的吊具与放射源以20~60度角接触，距离10公分。附图说明图1是本专利技术制备方法制得的产品；图2是实施例1患者术后半年愈合效果图3是实施例2患者术后半年愈合效果图。 具体实施例方式1、 取皮，引用标准GB16548-1996，猪皮表面无瘢痕，无硬皮，柔软有弹性。 取2 4个月白皮白毛猪皮背部，用5%碘伏浸泡10~30分钟灭菌，脱毛，去脂，裁剪； 用纯净水清洗，甩干至含水量15~25%之间；放置手术台上进行裁剪与机器刀架相适合(大小在350~600m之间)后进入下道工序；去脂脱脂，先将手工去脂的全皮放入36 37t:温水中加入5%洗涤剂(如白猫洗洁 精)浸泡10-20分钟，手工轻揉，将真皮底层油脂去掉后再用同温度清水冲洗10分钟， 手感皮片涩感。手工拔毛，将上述浸泡后的皮片上的毛连同毛囊一起拔出后，放入36 37'C温水中， 加入10%洗涤剂(如白猫洗洁精)浸泡10~20分钟，手工轻揉，将真皮底层油脂去掉后 再用同温度清水冲洗10分钟，手感皮片涩感。使皮片囊孔中的皮屑一起清除掉。2、 上机切皮，真皮、表皮分离，取保留基底膜的真皮部分，厚度0.34.8mm，(最 佳厚度0.5 111111±0.04 111111)，注意保留基底膜的完整性。将去脂去毛后的猪皮固定在鼓 式切皮机的鼓轮上，将皮片完全贴敷在鼓轮上，并用力加压至使皮片绷紧。用切皮机切 皮，分离表皮，留下真皮厚度0.3mm~0.8mm。用机器切皮比通常用手工撕皮的好处是: 可以更加彻底地准确地清除干净表皮上层细胞和胶原蛋白质。3、 脱细胞一脱上述真皮部分首先用1 15%的氯化钠水溶液浸泡30分钟后用纯净水清 洗；然后用10~20%的胰蛋白酶在36~401:下，浸泡30~50分钟后用纯净水清洗； 使细胞核与细胞壁分离后，用36-40。C生理盐水清洗2 4次甩干，再用纯净水清洗 2 4次甩干，沥水30分。4一脱后脱去80%以上组织细胞，只留残余细胞核与细胞碎片；二脱将上述沥水后含水量在10~30% (25%)的皮片，再用10~20%的脱氧 核糖核酸酶(DNA酶)、10~30%的核糖核酸酶(RNA酶)先后交替地在36~40°C 下，每次浸泡20~40分钟；各浸泡2~4次后，使细胞核与细胞碎片与细胞床完全分 离；再用脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶0.5~1.5%， 36~40°0下再次浸泡5~30分钟， 使成纤维细胞与细胞床壁分离。4、 除去真皮内可诱发宿主细胞识别反应的物质将前述处理后的材料用PH值 7.5 8.5的注射用水清洗甩干；采用常规固定剂，如碘伏0.1%，在36'C下，浸泡 50~120分钟；将脱细胞后的皮片定型。定尺在无菌室内操作，将己甩干的脱细胞真皮用无菌刀裁剪成临床应用尺寸。 压平、进行测量中间体检验、包装、封口、速冻。5、 中间体检验内容(肉眼或显微镜下) 物理性能——乳白色、有弹性、弯曲不断裂、微网状；组织学结构与正常人体真皮内的细胞外基质结构相同的真皮结构组织； 无菌1t验；细菌数为零 6、辐照灭菌经过电子加速器或C本文档来自技高网...

【技术保护点】
辐照无菌异种皮脱细胞基质制备方法，主要包括以下步骤：　ａ、取皮，用５％碘伏浸泡１０～３０分钟灭菌，脱毛，去脂，裁剪，用纯净水清洗，甩干至含水量１５～２５％之间；其特征在于：　ｂ、上机切皮，真皮、表皮分离，取保留基底膜的真皮部分， 厚度０．３～０．８±０．０４ｍｍ；　ｃ、．脱细胞：一脱：上述真皮部分首先用１～１５％的氯化钠水溶液浸泡３０分钟后用纯净水清洗；然后用１０～２０％的胰蛋白酶在３６～４０℃下，浸泡３０～５０分钟后用纯净水清洗；使细胞核与细胞壁分离后，用３ ６～４０℃生理盐水清洗２～４次甩干，再用纯净水清洗２～４次甩干，沥水３０分；二脱：将上述沥水后含水量在１０～３０％的皮片，最佳含水量２５％，再用１０～２０％的脱氧核糖核酸酶、１０～３０％的核糖核酸酶先后交替地在３６～４０℃下，每次浸泡２０～４０分钟；各浸泡２～４次后，再用脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶０．５～１．５％，３６～４０℃下再次浸泡５～３０分钟；　ｄ、．除去真皮内可诱发宿主细胞识别反应的物质：将前述处理后的材料用ＰＨ值７．５～８．５的纯水清洗甩干；采用常规固定剂在２ ５～３６℃下，浸泡５０～１２０分钟；　ｅ、辐照灭菌：经过电子加速器或Ｃｏ－６０进行γ射线辐照灭菌；辐照剂量１５０万～４００万拉德；照射时间６０～１８０秒。...

【技术特征摘要】
1、辐照无菌异种皮脱细胞基质制备方法，主要包括以下步骤a、取皮，用5％碘伏浸泡10～30分钟灭菌，脱毛，去脂，裁剪，用纯净水清洗，甩干至含水量15～25％之间；其特征在于b、上机切皮，真皮、表皮分离，取保留基底膜的真皮部分，厚度0.3～0.8±0.04mm；c、. 脱细胞一脱上述真皮部分首先用1~15％的氯化钠水溶液浸泡30分钟后用纯净水清洗；然后用10～20％的胰蛋白酶在36～40℃下，浸泡30～50分钟后用纯净水清洗；使细胞核与细胞壁分离后，用36～40℃生理盐水清洗2~4次甩干，再用纯净水清洗2~4次甩干，沥水30分；二脱将上述沥水后含水量在10～30％的皮片，最佳含水量25％，再用10～20％的脱氧核糖核酸酶、10～30％的核糖核酸酶先后交替地在36～40℃下，每次浸泡20～40分钟；各浸泡2～4次后，再用脱氧核糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭翔，
申请(专利权)人：郭翔，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]