卵内提供抗火鸡鼻气管炎保护的方法和疫苗技术

保护禽类宿主（如火鸡和／或鸡）免受火鸡鼻气管炎病毒和／或ＴＲＴ或ＳＨＳ呼吸窘迫的方法和组合物，卵内给予每蛋合适剂量水平的ＴＲＴＶ活体减毒株，以提供具有可接受安全性和功效特征的有效高效免疫，并且还在接种的禽中提供比常规给予的疫苗更高的滴度。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及对禽类宿主如火鸡和鸡卵内提供针对火鸡鼻气管炎(TRT)和/或“肿头综合征(Swollen Head Syndrome)”的保护的有用方法。更具体地说，已经证明抗TRT疫苗当如本文所述合适地卵内给予禽类宿主时安全有效。
技术介绍
TRT是由肺病毒引起的火鸡上呼吸道感染。这是一种累及所有年龄火鸡的高度传染性急性疾病。TRT感染的临床症状包括显著频繁的泡沫状鼻排出物、水泡音、咔嗒声、打喷嚏和摇头。在受感染的火鸡中也可以观察到眼睛排出物或肿胀的眶下窦(infraorbitalsinus)。已经在一些患有肿头综合征(SHS)的鸡群(肉用仔鸡和肉用仔鸡/种鸡)中检测到抗TRT病毒(TRTV)的抗体。人们推测TRTV在SHS和相关性呼吸窘迫中起作用。针对TRT的商业化疫苗并不通过卵内给予。而是在孵出后以各种形式给予它们。一般通过劳动密集型的喷洒方法(如手工喷雾、背囊喷雾或自动喷雾设备)或滴剂方法(眼或鼻)给予所述疫苗。根据下文更完全的解释，与目前使用的麻烦并且耗时的孵出后给予途径相比，使用改良的卵内应用TRT疫苗的卵内给予方法提供明显的好处。专利技术简述本专利技术利用商业化TRT疫苗改良用于本专利技术的卵内给予方法。实验结果证实了使用合适给药参数卵内给予火鸡和鸡这些疫苗的安全性和有效性。可以利用本专利技术的方法，通过卵内给予所述疫苗，保护禽类宿主对抗TRT和/或TRT或SHS相关性呼吸窘迫。因此，本专利技术的一个目标是提供保护禽类宿主对抗TRT和/或TRT或SHS相关性呼吸窘迫的方法，所述方法利用更简单并且更便宜地应用于大群禽类的卵内接种技术。本专利技术的另一个目标是使用疫苗以一定剂量提供所述卵内接种，所述疫苗的剂量为孵出的禽类宿主提供合适的免疫反应，而不对孵化率有不良影响。本专利技术的再一个目标是使用根据卵内应用改良的TRT疫苗，提供对抗SHS相关性呼吸窘迫的保护。本专利技术的又一个目标是提供接种禽类宿主以对抗TRT和/或TRT或SHS呼吸窘迫的方法，所述方法比常规接种的禽类提供更高的抗TRTV滴度，使用更少量的疫苗抗原，因此降低费用。专利技术详述本专利技术提供卵内免疫禽类宿主对抗TRTV、因此提供对抗TRT和/或TRT和SHS呼吸窘迫的保护的方法。可以有利地从商业化TRT疫苗制备用于本专利技术方法的疫苗。尤其适用于本专利技术方法的疫苗是商业化Poulvac_TRT疫苗，所述疫苗可以从Fort Dodge Animal Health，Fort Dodge，Iowa or Weesp，The Netherlands获得。Poulvac_TRT商业化制剂包含TRTV减毒K株每剂滴度不低于103.2TCID50，该制剂未批准或指示用于卵内给予。在本申请中，“TCID50”指50％组织培养感染剂量。一般根据进行免疫的禽类，将所述疫苗重悬浮于合适媒介物，以便提供约103.2到约104.5范围内的TCID50，并以每个蛋约0.05到0.1ml的量给予。可以手工进行给予，但更典型经济的方法是使用商业化蛋注射设备给予，所述商业化蛋注射设备例如可以从Embrex，Inc.，North Carolina获得。准确的给予剂量将取决于所述疫苗所给予的禽类物种，如较小的禽需要较少的剂量。通常在孵化第24天或之前给予所述疫苗(如火鸡)，但本专利技术的范围也包括其它卵内给予时间，例如孵化第18天或之前(如鸡)。本专利技术的疫苗和方法所应用的禽类宿主包括鸡、鸭、火鸡、鹅、矮脚鸡、鹌鹑和鸽。优选禽类物种是重要的商业家禽，例如鸡、鸭和火鸡。已经惊人地发现不仅卵内接种方法是安全而更简单的给予方法，而且在用该方法免疫的禽类宿主中存在更高的滴度。此外，当与基本相同的对照(未接种)组进行比较时，所述疫苗和给予方法基本不降低卵内接种后蛋的孵化率。优选所述孵化率降低比对照组低约10％以下，更优选约5％以下。甚至更优选降低少于约1-2％。在一些实施方案中，本专利技术的疫苗和方法可能实际上增加蛋的孵化百分率，有时增加约1-2％或更高。因此，所述疫苗对于给予禽类物种如鸡和火鸡是安全有效的。下面实施例详细描述本专利技术示例性的方法和技术。对于本领域内的技术人员，可以对材料和方法实施许多改变，而不偏离本公开内容的目的和宗旨。实施例实施例1-卵内给予火鸡的安全性研究从已知未感染TRTV并且此前未针对TRT接种疫苗的亲代火鸡群获得用于孵化的可育火鸡蛋。将这些蛋随机分配到2个不同的组。第一组76枚受精卵在孵化第24天卵内给予所述疫苗。孵化的第一天视为第0天。蛋在孵化前放置约2-7天。使用Poulvac_TRT(批号TR015，有效期1997年6月24日，滴度107.5TCID50)制备所述卵内疫苗。将三小管所述商业化产品各自重悬浮于10ml无菌盐水中，获得每0.1ml滴度为105.5TCID50的悬浮液。充分混合并汇集这些内容物。将所述混合/汇集的内容此后在实施例1中重命名为“IOV”。所述卵内给予为每个蛋使用滴度为105.5TCID50的0.1ml IOV，注射入所述76个受精卵中每一个蛋的羊膜液。然后，立即将这些蛋置于孵化器内(不用旋转)，使它们在各自放置的隔离栏内孵化。这些蛋/孵化蛋称为接种的火鸡。第二组66个受精卵不接受接种，在第二个隔离栏内于相似条件下孵化。这些蛋/孵化蛋称为阴性对照火鸡。在孵化第27、28和29天记录所述接种火鸡和阴性对照火鸡的孵化情况。表1显示试验观察到的孵化百分率。关于孵化率，本专利技术的卵内接种产生极好的结果，有93.4％接种的蛋孵出，而有92.4％的阴性对照蛋孵出。表1孵化百分率 孵出后，每组(即接种火鸡和阴性对照火鸡)各随机选出25只幼禽，置于各自隔离栏内地板上的刨花上。剔出每一组的剩余火鸡。每一组内，在21天的时间内每日检查每只火鸡的临床表现。挤压喙，检查鼻溢泌物的存在。根据表2记录临床疾病的严重性。表2临床记录系统 将一组火鸡中每一只火鸡在一天内的个体分数相加，得到该组火鸡的日总分数。表3显示使用表2的相对计分系统得到的试验观察到的临床表现。表3接种火鸡的临床检查结果 同样检查阴性对照火鸡的任何临床表现，没有观察到异常，即所有阴性对照火鸡都获得分数零。上面观察的结果证明本专利技术卵内接种方法是安全的。6日龄火鸡的最高平均分/火鸡(即0.36)提供足够安全限度，表示仅有轻微/轻度的TRT症状。收到所述蛋61/2周后，收集从亲代火鸡群内10只火鸡获取的血液，进行血清学分析。还从下面4组火鸡收集血液(a)1日龄，从20只阴性对照火鸡；(b)21日龄，从21只阴性对照火鸡；(c)1日龄，从20只接种的火鸡；(d)21日龄，从20只接种的火鸡。各个血液样品的血清学分析指示抗TRTV的抗体滴度。该分析使用其中应用A型抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)技术，结果表示为2log滴度。试验测定的2log滴度≥6.0定为阳性。还计算试验测定滴度的几何平均值(GM)和标准差(SD)。所述滴度分析建立以下结果。亲代火鸡群未感染TRTV。在所述10只火鸡中，一只火鸡的滴度高达7.7。此外，1日龄阴性对照火鸡和接种火鸡的GM滴度几乎相同，即分别是4.05和4.06。然而，两只接种火鸡有阳性滴度。与此不同，没有一只阴性对照火鸡的滴度≥6.0。阴性对照火鸡和接种火鸡的SD分别是0.82和1.46。所述2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保护禽类宿主避免ＴＲＴ和／或ＴＲＴ或ＳＨＳ相关性呼吸窘迫的方法，所述方法包括将疫苗卵内给予包含所述禽类宿主胚的受精卵，所述疫苗包含免疫原性有效量的火鸡鼻气管炎病毒活体减毒株，所述免疫原性有效量大致范围为每枚蛋约１０↑［３．２］ＴＣＩＤ↓［５０］到每枚蛋约１０↑［４．５］ＴＣＩＤ↓［５０］，其中在孵化第２４天或之前给予所述疫苗。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：FG达维拉尔，
申请(专利权)人：惠氏公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]