预防鼻病毒感染的新型免疫粘附素制造技术

本发明专利技术涉及预防鼻病毒感染的新型免疫粘附素。本发明专利技术的免疫粘附素可以用于治疗鼻病毒感染。所述免疫粘附素包含嵌合ＩＣＡＭ分子，也可任选包含Ｊ链和分泌成分。该嵌合ＩＣＡＭ分子是具有连接于免疫球蛋白的鼻病毒受体蛋白的一种融合蛋白。本发明专利技术还包括较大提高和改进的在植物内生产免疫粘附素方法。该免疫粘附素的每种成分都在植物细胞内生产，并因此在植物细胞内组装。生产本发明专利技术免疫粘附素的方法使这些分子的生产具有有效性和经济性。本发明专利技术也涉及在植物和哺乳动物细胞等多种真核细胞内生产该免疫粘附素。本发明专利技术免疫粘附素可以用作鼻病毒引起人类的感冒的治疗药物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及融合人类鼻病毒受体蛋白和免疫球蛋白的免疫粘附素及 其在植物内的表达。该免疫粘附素也计划用于人类鼻病毒感染的预防和 治疗。
技术介绍
普通感冒一般是相对轻微的疾病，但感冒也可以导致严重的并发症， 例如中耳炎、鼻窦炎和哮喘加重。人类鼻病毒(HRV)引起成人感冒的50 %和儿童感冒的25% (Bella和Rossmann， J Struct Biol. 128: 69—74， 1999，和Sperber和Hayden， Antimicrob Agents Chemother. 32: 409—19， 1988)。社会花费为此达到每年数十亿美元。这些微小并且棵露的MA病 毒代表小核糖核酸病毒的一种亚组(Rueckert， Virology, pp. 507-548， eds. ， Fields等，Raven Press, Ltd. New York, 1990 )。鼻病毒的X 光晶体图识别到直径300A的二十面体对称的衣壳(1A=0. lnm)，该衣 壳由60拷贝的每种病毒外被蛋白VP1， VP2和VP3构成(Rossmann， Nature 317: 145-153， 1985 )。 HRV表面凹陷或"峡谷"提示受体结合位点(Colonno等，Proc Natl Acad Sci USA. 85: 5449-5453， 1985; Rossmann等，Nature 317: 145-153， 1985 ) 。 HRV的102种血清型中，91种(称作主要组)共 享一种细胞表面糖蛋白为它们的受体，该细胞表面糖蛋白称为细胞间粘 附分子-1 ( ICAM-1) (Greve等，Cell 56: 839-847, 1989; Staunton等， Cell 56: 849-853， 1989);该结合位点位于N-末端结构域1中(Greve 等，J Virol. 65: 6015-6023， 1991; Staunton等，Cell 61: 243-254， 1990)。ICAM-1是一种含有五个细胞外结构域、 一个疏水跨膜结构域和一个 短胞质结构域的膜蛋白。ICAM-l在许多免疫和炎症反应的重要细胞上表 达，并在其它细胞表面诱导表达(Casasnovas等，Proc Natl Acad Sci USA. 95:4134-9, 1998 ) 。 ICAM-1的功能为白细胞整联蛋白LFA-l和Mac-l 的配体(Springer, Cell. 76: 301-14， 1994; Staunton等，Cell 61: 243-254， 1990 )。由于跨膜结构域的相互作用，ICAM-l在细胞表面主要 以二聚体形式存在(Miller等，JExpMed. 182: 1234-41， 1995; Reilly 等，J Immunol. 155: 529-32， 1995 )。由五个细胞外结构域组成的重组可溶性ICAM-1 (sICAM-l)在体外被 证实可以有效的阻断鼻病毒感染人类细胞(Greve等，J Virol.65: 6015-6023, 1991; Marlin等，Nature. 344: 70 - 2, 1990)。 sICAM-l对 抗实验室菌抹和野生分离菌林谱的活性分析证实，HRV的所有主要菌林都 对sICAM-l敏感。不以ICAM为受体的少量菌林并不受sICAM-l影响(Crump 等，Antiviral ChemChemother. 4: 323-327, 1993; Ohlin等，Antimicrob Agents Chemother. 38: 1413-5, 1994 )。可溶性ICAM-1的体外抗病毒活性似乎通过不止一种机制介导。这些 机制包括与细胞表面ICAM-1竟争结合位点、干扰病毒进入或及通过使未 成熟病毒RNA释放形成空衣壳而直接使病毒失活(Arruda等，Antimicrob Agents Chemother. 36 : 1186-1191 ， 1992 ; Greve等，J Virol. 65: 6015-6023， 1991; Marlin等，Nature. 344: 70 - 2， 1990; Martin等，J Virol.67: 3561-8， 1993)。HRV的宿主范围仅限于灵长类动物。 一项新的研究证实，可溶性 ICAM-1可以预防黑猩猩的鼻病毒感染(Huguenel等，Am J Respir Crit CareMed. 155: 1206-10， 1997 )。虽然黑猩猩并不出现临床症状，通过 检测血清转化和病毒释放证实了感染的存在。在给药时或给药后io分钟后给予HRV时，单剂量10mg可溶性ICAM-l的鼻内喷雾可以有效地预防HRV -16感染。人类临床实验证实，可溶性ICAM-1降低实验HRV感冒的严重性 (Turner等，JAMA 281: 1797-804， 1999 )。该实验共有196位受试者接 受不同制剂的可溶性ICAM-1或安慰剂的治疗。 一些受试者在接种HRV 39 前7小时给予可溶性ICAM-1或安慰剂，其他受试者在病毒接种十二小时后 给药。药物以鼻内溶液或粉末形式给药，每日6次持续7天(每天用量 4. 4mg)。该项研究通过病毒分离或血清转化证实可溶性ICAM-1不预防感 染(安慰剂治疗組92%感染率，可溶性ICAM-1治疗组85W感染率)。但是 可溶性ICAM-1对于所有的疾病检测值确实有影响。总体症状评分降低45 %，患有临床感冒的受试者比例降低23%,并且鼻粘液重量降低56%。 在使用粉末和溶液制剂组间或接种前和接种后两组间没有明显区别。使 用可溶性ICAM-l治疗不会导致任何副作用或鼻粘膜吸收。并且使用可溶 性ICAM-1治疗并不抑制抗HRV型特异性抗体的产生。如上述讨论，ICAM-1以二聚体的形式存在于细胞表面。Martin等， 在JVirol.67: 3561-8， ( 1993 )中第一次提出，多聚可溶性ICAM-1多 价结合HRV可能导致更高的有效亲和性，其称为亲和力，使病毒易于脱外 被。他们构建的多价ICAM-1/免疫球蛋白分子假定较单价可溶性ICAM-1在 中和HRV上更为有效，因此可以提高治疗效率。这些ICAM-1/免疫球蛋白 分子包括与IgAl (ICl-2D/IgA) 、 IgM(ICl-2D/IgM)和IgGl (ICl-2D/IgG) 铰链区和重链恒定区融合的ICAM-1氨基末端结构域1和2。而且，五个细 胞外结构域融合于IgAl (IC1-5D/IgA)。在HRV结合、感染性和构象分析中， 比较了这些ICAM-1/免疫球蛋白分子和含有两个(sICl-2D)和五个 (sICl-5D)结构域的可溶性ICAM-1。 ICAM-l/IgA免疫球蛋白分子 (IC1-5D/IgA)是可溶性ICAM-l效率的200倍，ICAM-l/IgM免疫球蛋白分子 (IC1-2D/1gM)和ICAM-1 /1gG免疫球蛋白分子(IC1-2D/1gG)分别是可溶性 ICAM-1效率的25和10倍。这些分子在抑制鼻病毒结合细胞和破坏病毒衣 壳构象上有较高的效率.ICAM-l/IgA免疫球蛋白分子在纳摩尔浓度范围 有效。对比本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫粘附素，包含至少一种嵌合ＩＣＡＭ－１分子，所述嵌合ＩＣＡＭ－１分子包含：　连接于免疫球蛋白重链的至少一部分的鼻病毒受体蛋白；和　结合于该嵌合ＩＣＡＭ－１分子的Ｊ链和分泌成分，　其中所述免疫粘附素是在植物中产生的。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JW拉里克，KL维科夫，
申请(专利权)人：行星生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：US[]