【技术实现步骤摘要】
用作佐剂的包装的病毒样颗粒:制备方法与用途的制作方法
技术介绍
专利
本专利技术涉及疫苗学、免疫学和医学领域。本专利技术提供用于增强针对与包装有免疫刺激物之病毒样颗粒(VLP)混合的抗原的免疫应答的组合物和方法，所述免疫刺激物优选为免疫刺激核酸，更优选含有至少一个非甲基化CpG序列的寡核苷酸。本专利技术可以用来诱导强烈的抗体和T细胞应答，尤其可用于治疗变态反应、肿瘤和慢性病毒性疾病以及其它慢性疾病。
技术介绍
免疫系统的本质建立在两个不同的基础上一个是特异性或获得性免疫，其特征在于相对较慢的反应动力学和记忆能力；另一个是非特异性或先天免疫，其显示快速的反应动力学，但缺乏记忆。淋巴细胞是获得性免疫系统的主要参与者。每个淋巴细胞都表达具有独特特异性的抗原受体。在通过该受体识别抗原后，淋巴细胞增殖并产生效应功能。只有极少的淋巴细胞显示对指定抗原或病原体的特异性，通常需要大量增殖才能检测到效应物应答——因此，获得性免疫系统具有较慢的动力学。由于相当一部分扩增的淋巴细胞存活，并且在抗原消失后仍可保留一定的效应物功能，当第二次遇到该抗原时，获得性免疫系统反应较快。这就是记忆能力的基础。淋巴细胞对病原体的特异性仅局限于极少数细胞，必须增殖才能获得功能，与这种情况相反，先天免疫系统的细胞和分子通常大量存在，并且识别与病原体有关的数量有限的恒定特征(Medzhitov，R.和Janeway，C.A.，Jr.，Cell 91295-298(1997))。这类模式的例子包括脂多糖(LPS)、富含非甲基化CG的DNA(CpG)或双链RNA，它们分别是细菌和病毒感染特异的。大多数免...
【技术保护点】
一种增强动物免疫应答的组合物，其包含： （ａ）病毒样颗粒； （ｂ）免疫刺激物； 其中所述免疫刺激物（ｂ）与该病毒样颗粒（ａ）结合；和 （ｃ）抗原，其中所述抗原与所述病毒样颗粒（ａ）混合。
【技术特征摘要】
US 2002-6-20 60/389,8981.一种增强动物免疫应答的组合物，其包含(a)病毒样颗粒；(b)免疫刺激物；其中所述免疫刺激物(b)与该病毒样颗粒(a)结合；和(c)抗原，其中所述抗原与所述病毒样颗粒(a)混合。2.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是toll样受体激活物。3.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是细胞因子分泌诱导物。4.权利要求2的组合物，其中所述toll样受体激活物选自(a)免疫刺激性核酸；(b)肽聚糖；(c)脂多糖；(d)脂磷壁酸；(e)咪唑并喹啉化合物；(f)鞭毛蛋白；(g)脂蛋白；(h)免疫刺激性有机分子；(i)含非甲基化CpG的寡核苷酸；(j)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和/或(i)中至少一种物质的任意混合物。5.权利要求4的组合物，其中所述免疫刺激性核酸选自(a)核糖核酸；(b)脱氧核糖核酸；(c)嵌合核酸；和(d)(a)、(b)和/或(c)中至少一种核酸的任意混合物。6.权利要求5的组合物，其中所述核糖核酸是聚肌胞苷酸或其衍生物。7.权利要求5的组合物，其中所述脱氧核糖核酸选自(a)含非甲基化CpG的寡核苷酸；和(b)不含非甲基化CpG基序的寡核苷酸。8.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是含非甲基化CpG的寡核苷酸。9.权利要求8的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸含有序列5’X1X2CGX3X43’其中X1、X2、X3和X4是任意核苷酸。10.权利要求9的组合物，其中所述核苷酸X1、X2、X3和X4中至少一个具有磷酸酯骨架修饰。11.权利要求8的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸包含或者基本由或者由选自下列的序列组成(a)TCCATGACGTTCCTGAATAAT(SEQ ID NO116)；(b)TCCATGACGTTCCTGACGTT(SEQ ID NO118)；(c)GGGGTCAACGTTGAGGGGG(SEQ ID NO120)；(d)GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG(SEQ IDNO122)；和(e)“dsCyCpG-253”(SEQ ID NO130)。12.权利要求11的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸具有磷酸酯骨架的一个或多个硫代磷酸酯修饰，或者其中所述寡核苷酸磷酸酯骨架的每个磷酸酯部分都是硫代磷酸酯修饰。13.权利要求8的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸的CpG基序是回文序列的一部分。14.权利要求13的组合物，其中所述回文序列是GACGATCGTC(SEQ ID NO105)。15.权利要求8的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸包含或者基本由或者由序列GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG(SEQ ID NO122)组成。16.权利要求13的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸具有磷酸酯骨架的一个或多个硫代磷酸酯修饰，或者其中所述寡核苷酸磷酸酯骨架的每个磷酸酯部分都是硫代磷酸酯修饰。17.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸，与所述病毒样颗粒非共价结合。18.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸，被包装于所述病毒样颗粒内。19.权利要求13的组合物，其中所述回文序列在其3′端和5′端侧有少于10个鸟苷。20.权利要求19的组合物，其中所述回文序列是GACGATCGTC(SEQ ID NO105)。21.权利要求19的组合物，其中所述回文序列在其N端侧为至少3个、至多9个鸟苷，所述回文序列在其C端侧为至少6个、至多9个鸟苷。22.权利要求19的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸含有选自下列的核酸序列(a)GGGGACGATCGTCGGGGGG(SEQ ID NO106)；(b)GGGGGACGATCGTCGGGGGG(SEQ ID NO107)；(c)GGGGGGACGATCGTCGGGGGG(SEQ ID NO108)；(d)GGGGGGGACGATCGTCGGGGGG(SEQ ID NO109)；(e)GGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGG(SEQ ID NO110)；(f)GGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGG(SEQ ID NO111)；(g)GGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGG(SEQ IDNO112)；和(h)GGGGGGCGACGACGATCGTCGTCGGGGGGG(SEQ IDNO113)。23.权利要求19的组合物，其中所述回文序列在其5’端侧为至少4个、至多9个鸟苷，所述回文序列在其3’端侧为至少6个、至多9个鸟苷，优选所述回文序列在其5’端侧为至少5个、至多8个鸟苷，并且所述回文序列在其3’端侧为至少6个、至多8个鸟苷。24.权利要求19的组合物，其中所述含非甲基化CpG的寡核苷酸含有SEQ ID NO111的核酸序列。25.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸，含有约6-约300个核苷酸，优选约6-约100个核苷酸，更优选地6-约40个核苷酸。26.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸，含有约20-约300个核苷酸，优选约20-约100个核苷酸，更优选约20-约40个核苷酸。27.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸，含有约10-约30个核苷酸。28.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸，选自(a)重组的寡核苷酸；(b)基因组寡核苷酸；(c)合成的寡核苷酸；(d)质粒来源的寡核苷酸；(e)PCR产物；(f)单链寡核苷酸；和(g)双链寡核苷酸。29.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸(b)被所述病毒样颗粒(a)包裹。30.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸(b)与选自寡核苷酸结合位点、DNA结合位点和RNA结合位点的病毒样颗粒位点结合。31.权利要求30的组合物，其中所述寡核苷酸结合位点是非天然存在的寡核苷酸结合位点。32.权利要求30的组合物，其中所述病毒样颗粒位点含有富含精氨酸的重复片段。33.权利要求1的组合物，其中所述免疫刺激物是免疫刺激性核酸，所述免疫刺激性核酸，优选所述含非甲基化CpG的寡核苷酸(b)，含有磷酸酯骨架的一个或多个硫代磷酸酯修饰，或者所述寡核苷酸(b)磷酸酯骨架的每个磷酸酯部分都是硫代磷酸酯修饰。34.权利要求1的组合物，其中所述病毒样颗粒(a)缺乏含脂蛋白的包膜。35.权利要求1的组合物，其中所述病毒样颗粒(a)是重组病毒样颗粒。36.权利要求35的组合物，其中所述病毒样颗粒(a)选自(a)重组乙型肝炎病毒蛋白；(b)重组麻疹病毒蛋白；(c)重组辛德毕斯病毒蛋白；(d)重组轮状病毒蛋白；(e)重组口蹄疫病毒蛋白；(f)重组逆转录病毒蛋白；(g)重组诺瓦克病毒蛋白；(h)重组甲病毒蛋白；(h)重组人乳头瘤病毒蛋白；(i)重组多瘤病毒蛋白；(j)重组噬菌体蛋白；(k)重组RNA噬菌体蛋白；(l)重组Qβ-噬菌体蛋白；(m)重组GA-噬菌体蛋白；(n)重组fr-噬菌体蛋白；(o)重组AP 205-噬菌体蛋白；(p)重组Ty蛋白；和(q)(a)-(p)中任何一种重组蛋白的片段。37.权利要求35的组合物，其中所述病毒样颗粒是乙型肝炎病毒核心蛋白或BK病毒VP1蛋白。38.权利要求1的组合物，其中所述病毒样颗粒包含RNA噬菌体的重组蛋白或其片段，其中所述RNA噬菌体选自(a)噬菌体Qβ；(b)噬菌体R17；(c)噬菌体fr；(d)噬菌体GA；(e)噬菌体SP；(f)噬菌体MS2；(g)噬菌体M11；(h)噬菌体MX1；(i)噬菌体NL95；(k)噬菌体f2；(l)噬菌体PP7；和(m)噬菌体AP205。39.权利要求1的组合物，其中所述病毒样颗粒包含RNA噬菌体的重组蛋白或其片段，其中所述RNA噬菌体是Qβ。40.权利要求1的组合物，其中所述病毒样颗粒包含RNA噬菌体的重组蛋白或其片段，其中所述RNA噬菌体是fr或AP 205。41.权利要求1的组合物，其中所述抗原或抗原决定簇还包含至少一个第二附着位点，该位点选自(i)所述抗原或抗原决定簇非天然存在的附着位点；和(ii)所述抗原或抗原决定簇天然存在的附着位点。42.权利要求41的组合物，它还包含一个氨基酸接头，其中所述氨基酸接头包含或者由所述第二附着位点组成。43.权利要求1的组合物，其中所述抗原(c)选自(a)多肽；(b)脂蛋白；和(c)糖蛋白。44.权利要求1的组合物，其中所述抗原(c)是重组抗原。45.权利要求1的组合物，其中所述抗原(c)分离自天然来源。46.权利要求45的组合物，其中所述天然来源选自(a)花粉提取物；(b)粉尘提取物；(c)尘螨提取物；(d)真菌提取物；(e)哺乳动物表皮提取物；(f)羽毛提取物；(g)昆虫提取物；(h)食物提取物；(i)毛发提取物；(j)唾液提取物；和(k)血清提取物。47.权利要求1的组合物，其中所述抗原(c)来源于(a)病毒；(b)细菌；(c)寄生虫；(d)朊病毒；(e)肿瘤；(f)自身分子；(g)非肽半抗原分子；(h)变应原；和(i)激素。48.权利要求1的组合物，其中所述抗原是肿瘤抗原。49.权利要求48的组合物，其中所述肿瘤抗原选自(a)Her2；(b)GD2；(c)EGF-R；(d)CEA；(e)CD52；(f)人黑素瘤蛋白gp 100；(g)人黑素瘤蛋白melan-A/MART-1；(h)酪氨酸酶；(i)NA17-A nt蛋白；(j)MAGE-3蛋白；(k)p53蛋白；(l)HPV16 E7蛋白；(m)(a)-(l)中任何一种抗原的类似物；(n)(a)-(m)中任何一种肿瘤抗原的抗原性片段。50.权利要求1的组合物，其中所述抗原是变应原。51.权利要求50的组合物，其中所述变应原来源于(a)花粉提取物；(b)粉尘提取物；(c)尘螨提取物；(d)真菌提取物；(e)哺乳动物表皮提取物；(f)羽毛提取物；(g)昆虫提取物；和(h)食物提取物；(i)毛发提取物；(j)唾液提取物；和(k)血清提取物。52.权利要求50的组合物，其中所述变应原选自(a)树；(b)草；(c)室内粉尘；(d)屋尘螨；(e)曲霉菌；(f)动物毛发；(g)动物羽毛；(h)蜂毒；(i)畜产品；和(j)植物产品。53.权利要求1的组合物，其中所述抗原选自(a)蜂毒磷脂酶A2；(b)豚草花粉Amb a1；(c)桦花粉Bet vI；(d)白面大黄蜂毒液5Dol mV；(e)屋尘螨Der p1；(f)屋尘螨Der f2；(g)屋尘螨Der 2；(h)尘螨Lep d；(i)真菌变应原Alt a1；(j)真菌变应原Aspf1；(k)真菌变应原Aspf16；和(l)花生变应原。54.权利要求1的组合物，其中所述抗原(c)是细胞毒性T细胞表位、Th细胞表位或至少两种所述表位的组合，其中所述至少两个表位直接结合或者通过连接序列结合。55.权利要求42的组合物，其中所述细胞毒性T细胞表位选自(a)病毒表位；(b)肿瘤表位；和(c)变应原表位。56.一种增强动物的免疫应答的方法，包括向所述动物体内导入一种组合物，该组合物含有(a)病毒样颗粒；和(b)免疫刺激物；其中所述免疫刺激物(b)与所述病毒样颗粒(a)结合；(c)抗原，其中所述抗原与所述病毒样颗粒(a)混合。57.权利要求56的方法，其中所述免疫刺激物是toll样受体激活物。58.权利要求56的方法，其中所述免疫刺激物是细胞因子分泌诱导物。59.权利要求57的方法，其中所述toll样受体激活物选自(a)免...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丁F巴克曼，沃尔夫冈A伦纳，
申请(专利权)人：赛托斯生物技术公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。