包含修饰的包膜蛋白E3的病毒样颗粒制造技术

包含含有修饰的包膜蛋白E3的病毒结构蛋白的病毒样颗粒。所述病毒结构蛋白可为来源于甲病毒属或黄病毒属的病毒结构蛋白。特别地，所述病毒结构蛋白可来源于基孔肯雅病毒或委内瑞拉马脑炎病毒。

Virus like particles containing modified envelope protein E3

Virus like particles containing viral structural proteins containing modified envelope protein E3. The virus structural protein for virus structure derived from alphavirus or flavivirus protein. In particular, the virus structural protein derived from chikungunya virus or Venezuelan equine encephalitis virus.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含修饰的包膜蛋白E3的病毒样颗粒
本申请涉及包含修饰的包膜蛋白E3的病毒样颗粒及其用途。
技术介绍
病毒样颗粒(VLP)为模仿真实天然病毒的组织和构象但缺乏病毒基因组的多蛋白结构，潜在地产生更安全和更便宜的疫苗候选物。少量预防性的基于VLP的疫苗当前已在全世界商品化：葛兰素史克(GlaxoSmithKline)的EngerixR(乙型肝炎病毒)和CervarixR(人类乳头瘤病毒)以及默克(MerckandCo.,Inc.)的RecombivaxHBR(乙型肝炎病毒)和GardasilR(人类乳头瘤病毒)为一些例子。其它基于VLP的疫苗候选物处在临床试验中或处于临床前评估，例如，流感病毒、细小病毒、诺瓦克病毒和各种嵌合VLP。许多其它候选物仍限于小规模基础研究，尽管其在临床前试验中成功。大规模VLP产生的问题在工艺控制、监测和优化背景中讨论。相应地确定和讨论了主要的上游和下游技术挑战。伴随来自临床试验的最新结果和用于治疗性或预防性接种的基于嵌合VLP的技术的近期进展，简要地提出了成功的基于VLP的一鸣惊人的疫苗。迄今为止，已经对超过30种感染人类和其它动物的不同病毒产生基于VLP的疫苗。实例包括AAV(腺伴随病毒)、H5N3(禽流感)、BFDV(虎皮鹦鹉幼雏病病毒)、BTV(蓝舌病毒)、埃博拉、肠道病毒71、GHPV(鹅出血性多瘤病毒)、HBV(乙型肝炎病毒)、HCV(丙型肝炎病毒)、HDV(丁型肝炎病毒)、HEV(戊型肝炎病毒)、HIV、HPV(人类乳头瘤病毒)、IBDV(传染性法氏囊病病毒)、甲型流感、甲型流感H1N1、甲型流感H3N2、JC多瘤病毒、Margurg、MS2、IPCV(印度花生丛簇病毒)、NDV(新城疫病毒)、No(诺如病毒)、Nv(诺瓦克病毒)、PhMV(酸浆斑驳病毒)、多瘤病毒、PPV(猪细小病毒)、RHDV(兔出血症病毒)、轮状病毒、SARS、SIV(猴免疫缺陷病毒)、SV40(猴病毒40)、SVDV(猪水疱病病毒)等。(ExpertRev.Vaccines9(10),1149-1176,2010)。为了迅速产生大量用于临床前和临床试验的VLP或疫苗，几乎所有的药物开发将会面对相同的挑战性难题，即快速产生高稳定性生产者。发展和鉴定稳定细胞系是开发的决定性部分。然而，产生具有高滴度和良好产品质量的稳定细胞系至今仍不能容易地完成。自从2004年基孔肯雅病毒(CHIKV)从肯尼亚再度出现以来，该甲病毒在非洲、欧洲和亚洲感染了数百万人群。在缺乏疫苗或抗病毒治疗的情况下，疾病的严重性和该流行性病毒的传播造成严重的公众健康威胁。据报道，用于流行性基孔肯雅病毒的VLP疫苗保护非人灵长类免于感染(NatMed.2010March;16(3):334-338)。美国专利公开号2012/0003266公开一种包含一种或多种基孔肯雅病毒结构蛋白的病毒样颗粒(VLP)，其可用于配制诱导对感染或至少一种感染症状的免疫的基孔肯雅疫苗或抗原组合物。WO2012/106356公开了修饰的甲病毒属或黄病毒属病毒样颗粒(VLP)和用于提高用于预防或治疗甲病毒属和黄病毒属介导的疾病的修饰VLP的产生的方法。(这些引用的文献通过引用结合到本文中)。引文列表专利文献[PTL1]US2012/0003266[PTL2]WO2012/106356非专利文献[NPL1]ExpertRev.Vaccines9(10),1149-1176,2010[NPL2]NatMed.2010March;16(3):334-338。
技术实现思路
根据本申请，提供以下：(1)病毒样颗粒，其包含含有修饰的包膜蛋白E3的病毒结构蛋白。(2)(1)的病毒样颗粒，其中所述病毒结构蛋白来源于甲病毒属或黄病毒属。(3)(2)的病毒样颗粒，其中所述病毒结构蛋白来源于基孔肯雅病毒或委内瑞拉马脑炎病毒。(4)(3)的病毒样颗粒，其中所述病毒样颗粒来源于基孔肯雅病毒株37997或毒株OPY-1或者委内瑞拉马脑炎病毒株TC-83。(5)(1)-(4)中任一项的病毒样颗粒，其中在病毒结构蛋白的氨基酸序列中置换、添加和/或缺失包膜蛋白E3中的一个或多个氨基酸残基。(6)(5)的病毒样颗粒，其中在包膜蛋白E3的弗林蛋白酶位点的氨基酸序列中置换、添加和/或缺失一个或多个氨基酸残基。(7)(1)-(6)中任一项的病毒样颗粒，其中所述病毒结构蛋白包括衣壳、包膜蛋白E1、包膜蛋白E2和包膜蛋白E3。(8)(1)-(7)中任一项的病毒样颗粒，其中至少一种抗原插入包膜蛋白E3中。(9)(8)的病毒样颗粒，其中所述至少一种抗原进一步插入包膜蛋白E2中。(10)(8)或(9)的病毒样颗粒，其中所述至少一种抗原插入SEQIDNO:1的321和326对应的残基、SEQIDNO:2的残基321和326或SEQIDNO:3的残基330和335之间。(11)(8)-(10)中任一项的病毒样颗粒，其中所述至少一种抗原来源于恶性疟原虫环子孢子蛋白、PD-1、PD-L1、CTLA-4、DISC1、IL-2、HER2、BTLA或HVEM。(12)(11)的病毒样颗粒，其中选自(NPNA)n(n=4-30)、SEQIDNO:6-9和15-29表示的氨基酸序列的肽插入包膜E3蛋白中。(13)(8)-(12)中任一项的病毒样颗粒，其中所述病毒样颗粒为包含下列氨基酸序列或与下列序列具有90%或更多同一性的氨基酸序列的基孔肯雅病毒样颗粒：SEQIDNO:31或SEQIDNO:75表示的氨基酸序列组成的衣壳；SEQIDNO:32或SEQIDNO:76表示的氨基酸序列组成的E1；和SEQIDNO:33或SEQIDNO:77表示的氨基酸序列组成的E2和E3的复合体，其中至少一种抗原的氨基酸序列插入SEQIDNO:2的残基321和326对应的残基之间。(14)(8)-(12)中任一项的病毒样颗粒，其中所述病毒样颗粒为包含下列氨基酸序列或与下列序列具有90%或更多同一性的氨基酸序列的委内瑞拉马脑炎病毒样颗粒：SEQIDNO:35表示的氨基酸序列组成的衣壳；SEQIDNO:36表示的氨基酸序列组成的E1；和SEQIDNO:37表示的氨基酸序列组成的E2和E3的复合体，其中至少一种抗原的氨基酸序列插入SEQIDNO:3的残基330和335对应的残基之间。(15)(8)-(12)中任一项的病毒样颗粒，其中所述病毒样颗粒为基孔肯雅病毒样颗粒，并且所述病毒样颗粒的结构包含下列序列(1)-(4)的任一项或与下列序列(1)-(4)的任一项具有90%或更多同一性的氨基酸序列：(1)SEQIDNO:32表示的氨基酸序列组成的E1；插入了疟疾抗原的E2和E3的复合体，其由SEQIDNO:46表示的氨基酸序列组成；和SEQIDNO:31表示的氨基酸序列组成的衣壳；(2)SEQIDNO:32表示的氨基酸序列组成的E1；插入了PD-1抗原的E2和E3的复合体，其由SEQIDNO:47表示的氨基酸序列组成；和SEQIDNO:31表示的氨基酸序列组成的衣壳；(3)SEQIDNO:32表示的氨基酸序列组成的E1；插入了PD-L1配体抗原的E2和E3的复合体，其由SEQIDNO:48表示的氨基酸序列组成；和SEQIDNO:31表示的氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】
病毒样颗粒，其包含含有修饰的包膜蛋白E3的病毒结构蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.08 US 62/035037;2014.11.13 US 62/079128;201.病毒样颗粒，其包含含有修饰的包膜蛋白E3的病毒结构蛋白。2.权利要求1的病毒样颗粒，其中所述病毒结构蛋白来源于甲病毒属或黄病毒属。3.权利要求2的病毒样颗粒，其中所述病毒结构蛋白来源于基孔肯雅病毒或委内瑞拉马脑炎病毒。4.权利要求3的病毒样颗粒，其中所述病毒样颗粒来源于基孔肯雅病毒株37997或毒株OPY-1或者委内瑞拉马脑炎病毒株TC-83。5.权利要求1的病毒样颗粒，其中在所述病毒结构蛋白的氨基酸序列中置换、添加和/或缺失包膜蛋白E3中的一个或多个氨基酸残基。6.权利要求5的病毒样颗粒，其中在包膜蛋白E3的弗林蛋白酶位点的氨基酸序列中置换、添加和/或缺失一个或多个氨基酸残基。7.权利要求1的病毒样颗粒，其中所述病毒结构蛋白包括衣壳、包膜蛋白E1、包膜蛋白E2和包膜蛋白E3。8.权利要求1的病毒样颗粒，其中至少一种抗原插入包膜蛋白E3中。9.权利要求8的病毒样颗粒，其中所述至少一种抗原进一步插入包膜蛋白E2中。10.权利要求8的病毒样颗粒，其中所述至少一种抗原插入SEQIDNO:1的321和326对应的残基、SEQIDNO:2的残基321和326或SEQIDNO:3的残基330和335之间。11.权利要求8的病毒样颗粒，其中所述至少一种抗原来源于恶性疟原虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：赤畑涉，上野隆司，
申请(专利权)人：VLP治疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US