一种莱鲍迪苷C的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种高纯度甜菊糖苷莱鲍迪苷RC的制备方法，属于食品添加剂技术领域。本发明专利技术以甜菊糖为原料，原料中莱鲍迪苷RC含量约为3-15%之间，利用重结晶和柱层析技术相结合，以甲醇溶解甜菊糖原料进行重结晶，于4℃搅拌结晶24-48小时，结晶母液减压回收溶剂得浓缩物，将浓缩物进行硅胶柱层析，条件为：固定相为200-300目硅胶，拌样硅胶为浓缩物质量的2.5倍，空白硅胶为浓缩物质量的20-50倍；二氯甲烷-乙醇（2:1）或二氯甲烷-乙醇（2:1）混合溶剂系统洗脱，其中乙醇中含水量为2%-10%。收集含莱鲍迪苷RC的主段洗脱液，合并，浓缩，干燥，检测，包装。使用本发明专利技术可以得到纯度95%以上的莱鲍迪苷C产品，工艺简单，适合工业化大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种莱鲍迪苷C的制备方法
本专利技术属于医药
，涉及一种莱鲍迪苷C (Rebaudioside C)的制备方法， 具体涉及的是从甜菊糖中分离高纯度的莱鲍迪苷C的方法。
技术介绍
甜菊糖中的甜味成分均属糖苷类。苷(glycoside或heteroside)亦称甙或 配糖体杂糖体，是糖或糖的衍生物与另一非糖化合物，通过糖的端基碳原子连接缩合而 成的化合物。苷水解后能生成糖和非糖两部分，其非糖部分称为苷元或配基，配糖基 (agly-cone, genin)，国外研究先后从甜菊叶提取物中分离出8种不同甜味成分即甜菊糖 苷(stevioside)；莱鲍迪苷(renaudiside) A、B、C、D、E ；杜尔可苷(dulcoside) A、B，这 8 种 成分是以相同的双萜配基构成的配糖体，属于四环双萜化合物，它们在C-4位的α-羧基 上连接一个葡萄糖，其次C-13位上连接有二糖或三糖。其中以在C-13上连接一个槐糖的 甜菊糖苷(Mevioside简称Mv)和C_13上槐糖分子上又连一个葡萄糖分子的莱包迪甙A (RebaudiosideA简称RebA )为主要。现已确定的甜菊甜味成分有6种即甜菊苷；莱鲍迪 苷A、D、C、E ；杜尔可甙Α。它们均属甙类化合物，具有相同甙元——甜菊醇(steviol)。它们 之间的区别在于甙键上结合糖的种类数量和构成型式不同。甜叶菊糖不但对人体没有任何 不良影响，相反，它还有降血压、强壮身体、治糠尿病等药用价值，它不但夺得了 “甜味世界” 的冠军，还被称作“时髦的甜味品”。其中瑞鲍迪甙A甜度最高口感最接近蔗糖，甜菊甙具有 甜菊甙产品特有的甜味和清凉感，其他成分不仅甜度较低，而且还带有不同程度的苦涩味， 虽然含量不高，但对产品的品质影响较大，特别是瑞鲍迪甙C苦涩味较重，严重影响了甜菊 糖甙产品的口感和品质，成为生产厂家千方百计想要出去的成分。但是，正是这种具有苦涩 味的物质蕴含着很多不为人知的潜在功效，成为科研开发的一个新方向，因其具有抗肿瘤、 降血压、降血脂、减肥等功效，在日本被制成药品在临床上进行应用。我国作为一个甜菊甙 产品的生产和出口大国，科研开发部门也在时刻关注瑞鲍迪苷C的发展动向，因其潜在的 经济价值，国内外众多生产厂家也把目光聚焦到该产品上来，成为甜菊糖甙产品深加工的 又一个新方向。目前甜菊糖的生产厂家大多数都采用结晶的方法来获得高纯度的STV及RA， 经美国学者研究发现，莱鲍迪苷C可以作为甜味增强剂进行应用并能显著降低蔗糖的使 用量，作为替代糖源的莱鲍迪苷C越来越受到人们的关注。因此获得高纯度莱鲍迪苷C (Rebaudioside C)的制备工艺，是该领域科研人当前急待解决的课题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以甜菊糖为原料制备高纯度莱鲍迪苷C分离工艺，从 而获得了高纯度莱鲍迪苷C产品。为实现上述目的本专利技术采用的实施方案如下 一种高纯度莱鲍迪甙C的制备工艺，实施步骤如下以甜菊糖为原料，原料中RC的含量为3%-15%之间，采用重结晶及柱层析技术相结合， 制备高纯度的莱鲍迪苷C产品；其步骤如下1)将甜菊糖用甲醇于40°C水浴中加热溶解进行重结晶，甲醇的体积用量为干燥物质量 的8 12倍；2)将结晶后的母液进行硅胶柱层析，柱层析条件如下拌样硅胶用量为母液质量的 2. 5倍量，空白硅胶用量为母液质量的20-50倍量，洗脱剂为三氯甲烷或二氯甲烷与含水乙 醇的混合溶剂，以薄层板进行监测，薄层条件为展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定 相为GF2M硅胶，显色剂为50%硫酸-水溶液；3)根据薄层检识结果，将莱鲍迪苷C主段合并，减压浓缩，干燥，检测，得到高纯度莱鲍 迪苷 C (Rebaudioside C，RC)。所述的甜菊糖中莱鲍迪苷C的含量为3%_15%。所述的含水乙醇中其中乙醇含水量为2%_10%。所述的混合溶剂选自三氯甲烷-拟％乙醇、三氯甲烷_拟％乙醇、三氯甲烷-95%乙 醇、二氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-98%乙醇、二氯甲烷-90%乙醇。所述的混合溶剂的比例为氯仿或二氯甲烷含水乙醇=2:广4 1。本专利技术采用了一种重结晶与柱层析技术相结合的方法制备了莱鲍迪苷C，该方法 简便易行，适合工业化生产，且能提高产物的纯度。附图说明图1为工艺流程图； 图2 RC对照品；图3实施例1附图； 图4实施例2附图； 图5实施例3附图； 图6实施例4附图； 图7实施例5附图； 图8实施例6附图。具体实施方式实施例一取甜菊糖:3Kg(RC含量为3. 5%，RA含量为38%，ST含量为33. 58%)，加入30L甲醇溶解， 于40°C加热溶解，降至室温后，置于4°C水浴中搅拌结晶M小时，过滤，将结晶母液减压回 收溶剂得浓缩物1.52Kg，备用；取20Kg硅胶(200-300目)，加入三氯甲烷-拟％乙醇(4 :1)混合溶剂，充分排除气 泡，装入直径273mm、高1.5m的层析柱中；另取1. OKg浓缩物，加入适量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅胶，于45°C烘箱干燥M小时；将拌好样品的硅胶装入层析柱中，以三氯 甲烷_拟％乙醇(4 :1)混合溶剂进行洗脱，IOL/份收集洗脱液，采用薄层监测，薄层条件为 展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相为GF2M硅胶，显色剂为50%硫酸-水溶液。 根据薄层检测结果进行合并，得莱鲍迪苷C主段洗脱液，减压回收溶剂得浓缩物，干燥，经检测莱鲍迪苷C的纯度为97.四％，包装，得莱鲍迪苷Cl 13. 2g ； 实施例二取甜菊糖Ig ((RC含量为3. 5%，RA含量为38%，ST含量为33. 58%)，加入ML甲醇溶 解，于40°C加热溶解，降至室温后，置于4°C水浴中搅拌结晶36小时，过滤，将结晶母液减压 回收溶剂得浓缩物1. 56Kg，备用；取25Kg硅胶(200-300目)，加入三氯甲烷_拟％乙醇(4 1)混合溶剂，充分排除气 泡，装入直径273mm、高1.5m的层析柱中；另取1. OKg浓缩物，加入适量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅胶，于45°C烘箱干燥M小时；将拌好样品的硅胶装入层析柱中，以三氯 甲烷_拟％乙醇(4 :1)混合溶剂进行洗脱，IOL/份收集洗脱液，采用薄层监测，薄层条件为 展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相为GF2M硅胶，显色剂为50%硫酸-水溶液。 根据薄层检测结果进行合并，得莱鲍迪苷C主段洗脱液，减压回收溶剂得浓缩物，干燥，经 检测莱鲍迪苷C的纯度为96. 76%，包装，得莱鲍迪苷Cl 15. 4g ； 实施例三取甜菊糖Ig (RC含量为10. 80%, RA含量为37. 14%，ST含量为35. 53%)，加入36L甲 醇溶解，于40°C加热溶解，降至室温后，置于4°C水浴中搅拌结晶48小时，过滤，将结晶母液 减压回收溶剂得浓缩物1. 54Kg，备用；取30Kg硅胶(200-300目)，加入三氯甲烷-95%乙醇(3 :1)混合溶剂，充分排除气 泡，装入直径273mm、高1. 5m的层析柱中；另取1. OKg浓缩物，加入适量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅胶，于45°C烘箱干燥M小时；将拌好样品的硅胶装入层析柱中，以三氯 甲烷-95%乙醇(3 :1)混合溶剂进行洗脱，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种莱鲍迪苷Ｃ的制备方法，其特征在于，采用重结晶及柱层析技术相结合，其步骤如下：１）将甜菊糖原料用甲醇于４０℃水浴中加热溶解进行重结晶，甲醇的体积用量为干燥物质量的８～１２倍；２）将结晶后的母液进行硅胶柱层析，柱层析条件如下：拌样硅胶用量为母液质量的２．５倍量，空白硅胶用量为母液质量的２０－５０倍量，洗脱剂为三氯甲烷或二氯甲烷与含水乙醇的混合溶剂，以薄层板进行监测，薄层条件为：展开剂为正丁醇－冰醋酸－乙醚－水，固定相为ＧＦ２５４硅胶，显色剂为５０％硫酸－水溶液；３）根据薄层检识结果，将莱鲍迪苷Ｃ主段合并，减压浓缩，干燥，检测，得到高纯度莱鲍迪苷Ｃ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王继文，李英娜，王文，雷茂林，张春婷，朱兵兵，
申请(专利权)人：沈阳天峰生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：89