一种*铼-抗人肝癌单抗磁纳米体及其制备方法技术

本发明专利技术目的是提供一种［１８８］↑Ｒｅ标记抗人肝癌单抗磁纳米体颗粒，它能良好的保持单克隆抗体的免疫活性和纳米颗粒性质，并能与人肝癌细胞特异性结合，其［１８８］↑Ｒｅ标记物的放射化学纯度可达９０％以上，能有效的杀死肿瘤细胞。本发明专利技术的技术方案是提供一种［１８８］↑铼－抗人肝癌单抗磁纳米体，即［１８８］↑Ｒｅ标记单克隆抗体Ｈｅｐａｍａ－１磁性纳米颗粒，其化学式为：［１８８］↑Ｒｅ（ＣＯ）↓［３］－Ｌ↑［２］Ｈ－Ｈｅｐａｍａ－ｍａｇｎｅｔｉｔｅ。本发明专利技术且提供一种［１８８］↑铼－抗人肝癌单抗磁纳米体的制备方法，该制备方法分为五个具体步骤。本发明专利技术还提供一种［１８８］↑铼－抗人肝癌单抗磁纳米体的用途，即为制备治疗人肝细胞癌的放射性药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及放射性核素标记的抗人肝癌单抗磁性纳米体，尤其是关于一种核素188铼(188Re)标记抗人肝癌单抗磁性纳米体及其制备方法。
技术介绍
肝癌是临床常见的恶性肿瘤，恶性程度高，大多数肝癌发现时已属晚期和常合并进行性肝癌化，已失去手术指征，仅有少部分病人可实施手术切除治疗，常规的放化疗仅有50％的有效率，平均生存期在18-32周。目前常规使用的临床放化疗技术方法对肝癌的治疗存在明显不足，具有高度靶向性的内放射性治疗是肝癌治疗重要发展途径之一， 从理论上说，内放射治疗可使肝癌组织获得较高的治疗剂量，而正常肝组织受到的辐射剂量则较低。虽然131I及其标记物在肝癌的治疗中取得了较好的疗效，而且价格便宜、来源广泛、标记技术相对简单，但是131I及其标记物在体内的稳定性较差，易脱碘，半衰期长，仪器探测效果差，防护困难，对人体骨髓的生物毒性强。放射性药物作为一类特殊的药物，其作用的基本原理是利用核素发射的特定能量射线当其作为诊断药物时，是利用发射适于显像的γ射线核素标记的药物分子在靶器官或组织的浓集；当其作为治疗药物时，则是利用放射性核素发射的具有较高线性能量传递(Linear EnergyTransfer)本领的粒子(如α粒子、β粒子及Auger电子等。这些粒子在体内的射程一般小于10mm，因此非常有利于短距离内积累大量能量，杀死癌细胞和病变组织，而不会伤及邻近正常组织。188Re(188铼)是医学界公认的极具潜力的治疗用放射性核素，188Re具有优良的辐射特性，半衰期为16.9hr，它发射具有用于体外显像的γ(155kev)射线和具有良好治疗效应的β(2.128Mev)射线，而且188Re不具有亲骨髓性，因此一般不会产生骨髓抑制反应，人们对于它成为体内放疗最佳同位素之一充满了希望。188Re标记单抗不易脱落，核素来源方便，通过188W-188Re发生器随时获得新鲜的188Re溶液。因此，我们选择188Re作为主要载药核素，放射性免疫治疗就是将治疗用核素标记在能与靶点特异结合的生物分子上，利用生物靶向性将核素定位于病变组织和细胞，从而起到治疗的效果。这种核素标记的生物分子将在一定的程度上浓集于作用位点，靶/非靶比可以达到几到几十倍。但到目前为止，这些生物分子的导向作用还不够理想，存在一定的局限性，例如抗体体内的不稳定性、靶向的非高度特异性、靶向性结合的位点及结合量少、放射性标记物体内脱标等方面。为此，采用抗人肝癌单抗磁纳米颗粒为导向物，将188Re标记引入到肿瘤部位，即对及其应用于制备治疗肝癌的医药制品，是一个很有意义的科研工作。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种188Re标记抗人肝癌单抗磁纳米体颗粒，它能良好的保持单克隆抗体的免疫活性和纳米颗粒性质，并能与人肝癌细胞特异性结合，其188Re标记物的放射化学纯度可达90％以上，能有效的杀死肿瘤细胞。本专利技术的技术方案是提供一种188铼-抗人肝癌单抗磁纳米体，即188Re标记单克隆抗体Hepama-1磁性纳米颗粒，其化学式为188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite它是由188Re(CO)3-L2H和单克隆抗体Hepama-1及磁性纳米颗粒交联而成的放射性组合物。同时，本专利技术还提供一种188铼-抗人肝癌单抗磁纳米体的制备方法，该方法采用188Re(CO)3标记中间体L2H，再用188Re(CO)3-L2H作为双向偶联剂，与单克隆抗体Hepama-1及磁性纳米颗粒交联，从而制备出该188铼-抗人肝癌单抗磁纳米体。该制备方法的五个具体步骤为1、磁性纳米微粒的制备；2、磁微粒子的硅胶修饰；3、磁纳米微粒表面生物大分子固载组氨酸；4、磁性纳米微粒表面偶联抗肝癌单抗Hepama-1；5、188Re标记抗肝癌单抗Hepama-1-磁性纳米微粒。5.1中间体fac-+的合成5.2的合成5.3活泼酯188Re(CO)3-L2H-TFP的合成5.4188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite的合成并且，本专利技术还提供一种188铼-抗人肝癌单抗磁纳米体的用途，即为制备治疗人肝细胞癌的放射性药物。其中，Hepama-1单抗是由中科院上海细胞生物学研究所研制的抗人肝癌单抗，属小鼠IgG1亚类，为分子量43000的糖蛋白，它所针对的抗原位于原发性肝癌的细胞膜上，已作专-性分析及鉴定。Hepama-1抗体碘-131标记的放射性免疫药物已经进入临床二期的研究阶段。该药物存在不足的地方主要来源于碘的高毒性及标记的固有不足碘标抗体在体内随着血液循环时间的增加，酶解脱碘，使I-131在病人甲状腺浓积，造成甲状腺辐照损伤。在治疗的病人中，部分存在甲低的现象。纳米微粒特殊的物理化学性质及其在生物体内特殊的生物学行为决定其有可能利于固载于其上的放射性药物实现高靶性。(1)表面效应纳米微粒尺寸小，表面能高，表面原子数多，原子配位不足，使表面原子具有高活性，容易与其它原子结合，将有利于其表面修饰和核素的加载。(2)异常的细胞通性由于比人体组织细胞还要小的尺度，一定粒径的纳米微粒具有能被组织或细胞吸收的特性，同时还可避免网状内皮系统的吞噬。七十年代末，Widder等人首先提出磁性靶向的概念，即注射包覆携载药物的磁感应材料，用外置磁铁引导至靶器官。美国FeRx公司研制微米级的磁性靶向载体(MTC)用于药载成功的靶向于肺、肝、胰脏、肾、大脑和乳腺等。磁性纳米靶向载药系统以往研究载带的药物主要是细胞毒素类药物，例如阿酶素。载带这些药物主要的不足是在靶点，随着药物的释放离开磁载体，这些药物不再具有靶向性。克服这个不足的方法是在磁靶向的过程中保持药物不离开载体。磁纳米放射性免疫治疗药物可以很好的解决磁靶向药物的不足。因此，188Re标记的抗人肝癌单抗磁纳米颗粒用于制备放射性免疫靶向治疗人肝癌的医药制品有着良好的应用前景。本专利技术一种188铼-抗人肝癌单抗磁纳米体(188Re(CO)3-L2H-Hepama-magnetite)的制备方法分五个具体步骤进行1、磁性纳米微粒的制备采用部分还原沉淀法，将FeCl3、Na2SO3及浓氨水混合进行反应，反应温度控制在60℃～80℃，反应中要保持通入氮气。反应产物使用永磁铁将磁性纳米粒子分离，用蒸馏水反复清洗。将制得的产物进行X线衍射(图1)及TEM图像(图2)表征。反应式为6Fe3++SO32-+18NH3·H2O→2Fe3O4↓+SO42-+18NH4++9H2O2、磁微粒子的硅胶修饰反应式Magnetic nanoparticles+Na2SiO3.5H2O→SiO2@Fe3O4将制得的磁微粒子分散于适量蒸馏水中，加冰乙酸调pH4～5，加一定量的硅烷偶联剂(AEAPS)，超声分散后水浴加热过夜。反应完毕后用磁铁分离，弃上清液，用水和甲醇反复洗涤，最后分散于适量甲醇中。经过修饰的磁性纳米颗粒进行SEM和TEM进行表征(图3、图4)，显示粒径均匀，粒径约为20nm，微粒外观呈较规则球形，但有部分团聚，但是基本符合要求显示超顺磁性。3、磁纳米微粒表面生物大分子固载组氨酸在氨基化磁性纳米微粒(SG-Si900修饰的硅胶包裹的四氧化三铁纳米微粒)表面固载了组氨酸，反应示意图如下 固载组氨酸的磁性纳米微粒(MN-His)将氨基化磁性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种［１８８］↑铼－抗人肝癌单抗磁纳米体，其特征在于它是［１８８］↑Ｒｅ标记单克隆抗体Ｈｅｐａｍａ－１磁性纳米颗粒，其化学式为：　　　　［１８８］↑Ｒｅ（ＣＯ）↓［３］－Ｌ↑［２］Ｈ－Ｈｅｐａｍａ－ｍａｇｎｅｔｉｔｅ　　　　它是由［１８８］↑Ｒｅ（ＣＯ）↓［３］－Ｌ↑［２］Ｈ和单克隆抗体Ｈｅｐａｍａ－１及磁性纳米颗粒交联而成的放射性组合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯彦林，谭家驹，梁生，孙静，汪勇先，吴校连，司建华，夏姣云，温广华，
申请(专利权)人：佛山市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]