西妥昔单抗与负载该物质的胶原支架在制备修复脊髓损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种西妥昔单抗与负载该物质的胶原支架在制备修复脊髓损伤药物中的应用。同时还提供了负载了Cetuximab的神经再生胶原支架材料，其制备方法，包括如下步骤：1)使神经再生胶原支架材料吸收Cetuximab，得到含有Cetuximab的神经再生胶原支架材料；2)对步骤1)中得到的负载Cetuximab的神经再生胶原支架材料进行孵育，即可得到。通过试验发现西妥昔单抗与负载该物质的胶原支架均能达到修复脊髓损伤、促进神经再生和/或减少脊髓损伤部位胶质细胞增生的效果，在未来临床脊髓损伤修复的应用具有重要的现实指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医疗领域，具体涉及一种西妥昔单抗与负载该物质的胶原支架在制备修复脊髓损伤药物中的应用。
技术介绍
脊髓是中枢神经的重要组成部分，主要功能是传送脑与外周之间的神经信息同时也是许多简单反射活动的低级中枢。脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)多见于砸伤、摔伤、交通事故、运动性损伤和一些如地震及矿难等自然灾难中。脊髓损伤后通常表现为损伤节段以下的躯体丢失感觉与自主运动功能，而与外周神经不同，脊髓神经元在损伤后很难自发再生进入或跨越损伤区[NeumannS,BradkeF,Tessier-LavigneM,BasbaumAI.RegenerationofsensoryaxonswithintheinjuredspinalcordinducedbyintraganglioniccAMPelevation.Neuron.2002；34:885-93.；QiuJ,CaiCM,DaiHN,McAteeM,HoffmanPN,BregmanBS,etal.SpinalaxonregenerationinducedbyelevationofcyclicAMP.Neuron.2002；34:895-903.]。影响脊髓损伤后轴突再生的抑制因素主要包括以下两类：首先，脊髓损伤后，星型胶质细胞、小胶质细胞以及少突胶质细胞等胶质细胞活化、增生以致胶质疤痕形成。研究表明，在脊髓损伤后几天之内损伤区周围的反应性星形胶质细胞大量表达硫酸软骨素蛋白聚糖类(CSPGs)这类神经再生抑制分子[FilbinMT.Recapitulatedevelopmenttopromoteaxonalregeneration:goodorbadapproach，PhilosTRSocB.2006；361:1565-74.]。CSPGs除了能以瘢痕的形式在空间上影响轴突再生，还能激活神经元内PKC信号通路继而活化Rho来抑制神经再生[SivasankaranR,PeiJ,WangKC,ZhangYP,ShieldsCB,XuXM,etal.PKCmediatesinhibitoryeffectsofmyelinandchondroitinsulfateproteoglycansonaxonalregeneration.Natureneuroscience.2004；7:261-8.]。此外，髓鞘来源的髓鞘相关蛋白同样具有抑制神经轴突再生的作用，其主要包括Nogo-A，MAG和OMgp等，这三种抑制分子均可以与NgR1识别结合，与配体结合后NgR1会进一步招募p75、TROY和LINGO-1形成受体复合物，随后抑制信号传导进入细胞内引起RhoA磷酸化，细胞骨架重排最终轴突生长被抑制[HeZG,KoprivicaV.TheNogosignalingpathwayforregenerationblock.Annualreviewofneuroscience.2004；27:341-68.]。有研究表明髓鞘相关蛋白与其受体结合后，能引发胞内钙离子浓度提高，进而激活表皮生长因子信号通路，表皮生长因子受体(EGFR)激活后活化Rho-Rac信号，导致轴突生长锥塌陷，从而抑制轴突再生[KoprivicaV,ChoKS,ParkJB,YiuG,AtwalJ,GoreB,etal.EGFRactivationmediatesinhibitionofaxonregenerationbymyelinandchondroitinsulfateproteoglycans.Science.2005；310:106-10.]。目前EGFR抗体已经用于临床的药物是Cetuximab，但是该药物主要是用于临床治疗肿瘤疾病(如直肠癌，食道癌等)[MalikH,KhanAZ,BerryDP,CameronIC,PopeI,SherlockD,HelmyS,ByrneB,ThompsonM,PulferA,DavidsonB.Liverresectionratefollowingdownsizingchemotherapywithcetuximabinmetastaticcolorectalcancer:UKretrospectiveobservationalstudy.EurJSurgOncol.2015；41(4):499-505；TianX,ZhouJG,ZengZ,ShuaiT,YiLJ,MaL,WangY,CaoH,SongGM.Cetuximabinpatientswithesophagealcancer:asystematicreviewandmeta-analysisofrandomizedcontrolledtrials.MedOncol.2015；32(4):127.]，但未见有用于脊髓损伤修复的临床报道。我们前期研制的神经再生胶原支架除了具有良好的生物相容性之外，还根据脊髓神经元细胞的神经纤维纵向有序生长的特点能够引导神经纤维有序延伸。通过大鼠及全横断脊髓损伤模型证实，神经再生胶原支架能够减少损伤面积扩散，引导神经纤维有序再生[HanQQ,SunWJ,LinH,ZhaoWX,GaoY,ZhaoYN,etal.LinearOrderedCollagenScaffoldsLoadedwithCollagen-BindingBrain-DerivedNeurotrophicFactorImprovetheRecoveryofSpinalCordInjuryinRats.TissueEngPtA.2009；15:2927-35.]。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供Cetuximab或负载Cetuximab的神经再生胶原支架材料在制备具有如下(1)、(2)、(3)、(4)和(5)功能中至少一种的产品中的应用：(1)修复脊髓损伤；(2)促进神经再生；(3)减少脊髓损伤部位胶质细胞增生；(4)引导受损神经纤维的有序再生；(5)引导脊髓损伤后内源性的神经前体细胞和神经元向损伤区的迁移。本专利技术所述的Cetuximab购自德国默克里昂制药公司，商品规格为100毫克/20毫升/瓶)。本专利技术的再一个目的是提供具有如下(1)、(2)、(3)、(4)和(5)功能中至少一种的药物，该药物是负载了Cetuximab的神经再生胶原支架材料：(1)修复脊髓损伤；(2)促进神经再生；(3)减少脊髓损伤部位胶质细胞增生；(4)引导受损神经纤维的有序再生；(5)引导脊髓损伤后内源性的神经前体细胞和神经元向损伤区的迁移。本专利技术所述药物中的神经再生胶原支架材料是通过如下方法而制备得到：a)将筋膜用体积百分浓度为1-1.5％的磷酸三丁酯溶液处理24-72h；b)再用含有0.5-1.5mol/LNaCl的25-100mmol/L、pH为7.6-8.5的Tris-HCl缓冲液处理24-72h；c)最后，用0.5-1.5g胰蛋白酶/100ml缓冲液处理48-96h，得到所述有序胶原材料，即神经再生胶原支架材料，其中，所述缓冲液为25-100mmol/LTris-HCl，pH为7-8。上述方法中，步骤a)中，所述磷酸三丁酯溶液的溶剂为PBS缓冲液或Tris-HCl缓冲液。所述筋膜在本文档来自技高网...

【技术保护点】
Cetuximab或负载Cetuximab的神经再生胶原支架材料在制备具有如下(1)、(2)、(3)、(4)和(5)功能中至少一种的产品中的应用：(1)修复脊髓损伤；(2)促进神经再生；(3)减少脊髓损伤部位胶质细胞增生；(4)引导受损神经纤维的有序再生；(5)引导脊髓损伤后内源性的神经前体细胞和神经元向损伤区的迁移。

【技术特征摘要】
1.Cetuximab或负载Cetuximab的神经再生胶原支架材料在制备具有如下(1)、(2)、(3)、(4)和(5)功能中至少一种的产品中的应用：(1)修复脊髓损伤；(2)促进神经再生；(3)减少脊髓损伤部位胶质细胞增生；(4)引导受损神经纤维的有序再生；(5)引导脊髓损伤后内源性的神经前体细胞和神经元向损伤区的迁移。2.具有如下(1)、(2)、(3)、(4)和(5)功能中至少一种的药物，该药物是负载了Cetuximab的神经再生胶原支架材料：(1)修复脊髓损伤；(2)促进神经再生；(3)减少脊髓损伤部位胶质细胞增生；(4)引导受损神经纤维的有序再生；(5)引导脊髓损伤后内源性的神经前体细胞和神经元向损伤区的迁移。3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述药物中的神经再生胶原支架材料是通过如下方法而制备得到：a)将筋膜用体积百分浓度为1-1.5％的磷酸三丁酯溶液处理24-72h；b)再用含有0.5-1.5mol/LNaCl的25-100mmol/L、pH为7.6-8.5的Tris-HCl缓冲液处理24-72h；c)最后，用0.5-1.5g胰蛋白酶/100ml缓冲液处理48-96h，得到所述有序胶原材料，即神经再生胶原支架材料，其中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴建武，肖志峰，陈冰，赵燕南，李星，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11