测定多等位基因单倍型的方法技术

扩增含两种等位基因的区域时，所述等位基因之一的多态型位于或接近扩增引物的３’末端，从而所述链仅可从两个引物之一延伸，一个匹配突变型核苷酸，一个匹配于野生型核苷酸。其他引物不受等位基因的影响，但定位于在扩增子中包括其他等位基因。ＰＣＲ仅扩增具有一种第一等位基因的特异等位基因的靶基因组ＤＮＡ。所述技术探索出，如果可鉴定扩增子中的第二等位基因的等位基因，则可测定第一和第二等位基因的单倍型。设计具有互补于用于鉴定第二等位基因的两种等位基因（主要和次要）的序列的探针，并将所述探针组固定于固体支持物上，并将其与扩增子杂交，以鉴定形成杂交体的探针是本发明专利技术的特征。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
测定在３’侧具有第一杂合多态性位点、且在５’侧具有第二杂合多态性位点的靶核酸的单倍型的方法，其特征在于包括：　（ｉ）用下列正向引物（ａ－１）之一和正向引物对靶核酸进行ＰＣＲ：　（ａ－１－１）正向引物，其含互补于所述第一多态性位点 的碱基序列，且当所述第一多态型是突变型时可延伸所述靶核酸，而当所述第一多态型是野生型时不延伸所述靶核酸，和　（ａ－１－２）正向引物，其含互补于所述第一多态性位点的碱基序列，且当所述第一多态型是野生型时可延伸所述靶核酸，而当所述第一多态 型是突变型时不延伸所述靶核酸，和　（ｂ－１）反向引物，其含互补于不含所述第二多态型的特定碱基序列的碱基序列，且位于在所述靶核酸的互补链上的所述第二多态型的３’侧；及　（ｉｉ）将通过（ｉ）得到的产物与碱基序列等于含所述第二多态型的 野生型核苷酸的所述靶核酸的碱基序列的特定片段的第一探针杂交，且与碱基序列等于含所述第二多态型的突变型核苷酸的所述靶核酸的碱基序列的特定片段第二探针杂交，及检测与所述第一和第二探针形成杂交体的信号。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：高滨慎一郎，水谷有里，
申请(专利权)人：佳能株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]