用于检测等位基因变体的方法、组合物和试剂盒技术

在一些实施方式中，本发明专利技术大体上涉及用于区分不同等位基因之间的序列差异的组合物、方法和试剂盒。更具体地，在一些实施方式中，本发明专利技术提供了用于以高特异性和选择性定量包含丰富的（例如野生型）等位基因变体的样品中的稀少的（例如突变的）等位基因变体，例如SNP或核苷酸（NT）插入或删除的组合物、方法和试剂盒。特别地，在一些实施方式中，本发明专利技术涉及用于检测突变的高度选择性的方法，其被称作竞争性等位基因特异性TaqMan PCR(“cast-PCR”)。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
用于检测怀疑包含至少靶序列的第二等位基因变体的核酸样品中的靶序列的第一等位基因变体的方法，包括：a）通过组合：i)核酸样品；ii)第一等位基因特异性引物，其中所述第一等位基因特异性引物的等位基因特异性核苷酸部分互补于靶序列的第一等位基因变体；iii)第一等位基因特异性封闭探针，其互补于包含第二等位基因变体的靶序列的区域，其中所述区域包含对应于所述第一等位基因特异性引物的等位基因特异性核苷酸部分的结合位置的位置，并且其中所述第一等位基因特异性封闭探针包含小沟结合剂；iv)第一基因座特异性引物，其互补于在第一等位基因变体的3’并且在相对链上的靶序列的区域；和v)第一检测探针；形成第一反应混合物；b）使用第一基因座特异性引物和第一等位基因特异性引物在第一反应混合物中进行扩增反应，以形成第一扩增子；和c）通过检测第一检测探针的可检测性质的变化来检测第一扩增子，从而检测核酸样品中的靶基因的第一等位基因变体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：C·陈，R·谭，
申请(专利权)人：生命技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US