本发明专利技术目的在于扩展高良姜提取物的用途：将含有高良姜素的高良姜提取物用于抑制钙离子通道特别是抑制ＴＲＰ通道，从而防治动脉粥样硬化等心脑血管疾病的药物。ＴＲＰ通道是非选择性阳离子通道。ＴＲＰＣ通道与动脉粥样硬化等心脑血管疾病密切相关。通过抑制血管内皮细胞ＴＲＰＣ通道活性，血管功能会明显改善，并且可以明显改善动脉粥样硬化的血管病理改变。既往对高良姜素的化学防护作用、抗氧化作用、抗病毒、抗菌作用、抗肿瘤作用的探索较为深入；本发明专利技术扩展高良姜提取物用于制备防治心脑血管疾病的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种含有高良姜素的高良姜提取物在制备防治高血压、动脉粥样硬化 等心脑血管疾病药物中的应用，尤其涉及高良姜素在制备通过抑制瞬时感受器阳离子通道 (transient receptor potential，TRP)，进而抑制钙离子内流的应用。
技术介绍
瞬时感受器阳离子通道(TRP通道)是一种跨膜蛋白质，被激活时允许包括钙离子 在内的阳离子进行跨膜运输。与其它的钙通道如电压门控通道和配体门控通道参与相对 特化的细胞功能不同，TRP家族的引人入胜之处在于其潜在的细胞功能的普遍性和多样性。 TRP基因在种系发生树中相当保守，存在于从微生物到高等脊椎动物中。其组织分布也极 为广泛，除了中枢神经系统外，还分布于感觉器官和心血管、胃肠道、呼吸、泌尿生殖、造血、 免疫系统中。在28种已经被鉴定的哺乳动物TRP通道亚型中，至少有19种在血管内皮细 胞表达。这些通道参加了多种血管功能，包括调节血管张力、血管通透性，参与机械信号传 导，血管分泌功能，血管新生，内皮细胞增生，内皮细胞凋亡和死亡等等。TRP通道功能异常 可能会导致人类心血管系统的异常。W02006/074802A1专利申请书中论述了 TRPC通道用于心脑血管疾病中的治疗。其 研究表明利用基因技术，在兔动脉粥样硬化模型，通过抑制血管内皮细胞TRPC3，TRPC6和 TRPC7活性，血管功能会明显改善，并且明显改善动脉粥样硬化的血管病理改变。该研究建 立了 TRPC通道与心脑血管疾病如动脉粥样硬化的联系。研究证明在动脉粥样硬化模型中，TRPCl蛋白在被损伤的血管平滑肌和新生内膜 中高表达，D. J. Beech等利用TRPCl的阻断抗体(T1E3)显著降低了体外培养的人隐静脉新 生内膜的形成，并且对内皮功能没有明显的抑制作用；其研究结果提示TRPCl阻断剂可以 抑制血管平滑肌细胞增生和内膜新生，从而证明了 TRPCl拮抗剂在治疗血管损伤性疾病中 的作用，因此以TRPCl为靶标治疗阻塞性血管疾病具有很好的前景[文献Biochim Biophys Acta. 2007，1772 (8) :907-14.]。研究证明TRPC5和TRPM3通道与血管平滑肌细胞的迁移、 增殖密切相关。平滑肌细胞迁移与增殖是动脉粥样硬化、心肌肥厚等疾病的重要病理过程。高良姜是姜科植物高良姜(Alpinia officinarum Hance.)干燥根茎。为常用中 药，具有温胃散寒、止痛解痉之功。高良姜素&3&叫^1，3，5，7—三羟基黄酮)是一种天 然的黄酮醇类化合物，是中药高良姜主要有效成分之一。近年来国外对该成分的药理药效 活性进行了大量研究，对它的化学防护作用、抗氧化作用、抗病毒、抗菌作用、抗肿瘤作用的 探索较为深入。高良姜素可以抑制咖啡因与碳酰胆碱诱导的离体猪膀胱平滑肌的收缩作用 (文献Planta Medica 2005,71(10) :962-964)，其作用机制与平滑肌的钙动员有关。另有 研究表明高良姜素可以抑制对笨肾上腺素或KCL诱导的离体大鼠胸主动脉血管段收缩，高 良姜素可能通过影响血管内皮功能和抑制钙离子内流发挥作用。但是尚没有研究表明高良姜对TRPC通道的抑制作用，以及高良姜素在心脑血管 疾病防治中的用途。
技术实现思路
本专利技术提供了含有高良姜素的高良姜提取物在心脑血管疾病防治中的新用途。高良姜提取物对大鼠胸主动脉的舒张作用取SD大鼠胸主动脉离体血管环，利用氯化钾(终浓度45mmol/L)刺激血管造成血 管收缩模型，用以评价药物对血管的舒张作用。采用ALC-M离体组织器官实验系统，浴槽内加入KH液作为等压等渗溶液。精密称 取2. 43mg高良姜素，加入IOOul的二甲基亚砜(DMSO)和900ul的KH液。配成高良姜素 母液。将高良姜素母液按3倍梯度稀释成梯度溶液，用KCL预激血管使其收缩，至血管张 力稳定后，累计浓度给药，每两次给药时间间隔lOmin。最终的浓度梯度为3X10_7mol/l， lX106mol/l,3X106mol/l,lX105mol/l,3X105mol/l,9X105mol/l,2. 7X10、ol/l，结 果显示高良姜素具有很好的血管舒张作用，半数有效剂量为1. 17mmol/L。高良姜素对TRP通道的抑制作用高良姜素可以通过抑制TRP蛋白，抑制钙离子内流。本专利技术中TRPC通道的活性分析包括以下步骤(1)表达TRPC通道的细胞与荧光染料共同孵育(2)利用离子通道激活剂刺激钙离子内流，然后加入待测化合物。检测荧光变化(3)检测荧光变化。TRP通道的活性分析还包括利用膜片钳技术、全细胞电流技术检测细胞内外的离子变化。本专利技术所述的表达TRPC通道的细胞包括HEK293、SMC、CHO细胞等。本专利技术所 述的荧光染料包括Furo2，Fluo4，Di-4-ANEPPS等。离子通道激活剂包括gadolinium， pregnenolone, OAG 等。HEK293细胞转染TRPC5cDNA，经四环素筛选后，细胞膜稳定表达TRPC5蛋白。荧光 染料Fura2孵育细胞1小时后，高良姜素乙醇溶液10 μ M孵育细胞15分钟，加入gadolinium 50 μ M作为激动剂。在钙离子通道高通量荧光分析仪Flexstation ΙΙ384进行荧光浓度读 取。附附图说明图1是10 μ M高良姜素对TRPC5通道的抑制作用图(Gadolinium 50μΜ作为激动 剂)。高良姜素对TRPC5的半数抑制浓度为0. 2uM。以pregnenolone sulphate 1 μ M为激动剂，高良姜素1 μ M溶液对TRPM3通道具 有明显的抑制作用。本专利技术具有如下优点高良姜素通过抑制TRPC通道，抑制钙离子内流，进而影响 内皮功能及平滑肌细胞的迁移与增生。高良姜素通过抑制TRPC通道用于心脑血管疾病特 别是心肌缺血、动脉粥样硬化的防治，具有全新的作用机制，具有良好的应用前景。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步阐释，但不限制本专利技术实施例1高良姜总黄酮的制备1高良姜10kg，10倍95%乙醇回流提取2小时，8倍95%乙醇回流提取1小时，合并提取液，减压回收至无醇味。等体积乙酸乙酯萃取3-4次(以高良姜素或黄酮颜色反应为指示)，合并乙酸乙酯 萃取液。回收乙酸乙酯，回收物用20%乙醇分散，后上大孔树脂，用30%乙醇洗脱2个柱体 积后，再用70%乙醇洗脱5个柱体积，得高良姜总黄酮。提取路线见附图2实施例2高良姜总黄酮的制备2高良姜10kg，10倍95%乙醇回流提取2小时，8倍95%乙醇回流提取1小时，合并 提取液，减压回收至无醇味。上大孔树脂，先用水洗脱5个柱体积，再用30%乙醇洗脱，以黄酮颜色反应为指 示，洗脱5个柱体积；再用70%乙醇洗脱5个柱体积，得高良姜总黄酮。提取路线见附图3实施例3高良姜总黄酮片剂的制备按照实施例1所述的方法制备得到高良姜总黄酮提取物，提取物80°C以下干燥后 过60-80目筛，取高良姜总黄酮有效部位200克，加入适量微晶纤维素和硬脂酸镁，混勻，干 压成1000片。实施例4高良姜总黄酮颗粒剂的制备按照实施例1所述的方法制备得到高良姜总黄酮提取物，提取物80°C以下干燥 后，取高良姜总黄酮有效部位200克，加本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于，它是一种高良姜提取物，其中高良姜总黄酮为５０－８５％，高良姜素含量为５－１０％。
【技术特征摘要】
1.一种治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于，它是一种高良姜提取物，其中高良姜总 黄酮为50-85%，高良姜素含量为5-10%。2.一种治疗心脑血管疾病药物的制备方法，其特征在于(1)高良姜根茎清洗干净，烘干。(2)醇类回流提取，合并提取液，减压回收，得提取物。提取物加水分散后，上大孔树脂， 先用10-30%浓度的乙醇洗脱除杂，再用60-80%浓度乙醇洗脱得高良姜总黄酮提取物。以 紫外法测定提取物中总黄酮含量达50%以上，采用HPLC法测定提取物中高良姜素的含量 达5%以上。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，回流提取所用的醇类为乙醇、甲醇、乙 酸乙酯，优选乙醇。4.如权利要求1所述的高良姜提取物制备防治心脑血管疾病药物中的用途，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨洪军，游云，黄璐琦，吴宏伟，陈畅，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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