【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物合成
,特别是。
技术介绍
菁染料是指发色团共轭体系两端建立在N-N原子间的脒离子插烯物,具有较好 的平面刚性结构或大的平面共扼体系,荧光量子产率高,荧光波长长,能很好地与DNA 自身的淡蓝色荧光相区别,而且与DNA作用后荧光量子产率增强。因而,菁染料得到了 人们越来越多的重视。水溶性菁染料是性能优良的荧光标记染料,广泛用于抗体、核酸及其他生物 分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度,可改变其荧光发射波长。Amershan Pharmacia Biotech公司首先将荧光发射波长不同的水溶性含磺酸基菁染料应用于基因芯片 的双色荧光检测,目前已有商品化的成套仪器和试剂出售,并注册了 Cy3,Cy5商标名, 其商品化的菁染料与核苷连接物售价竟高达500美元/毫克,价格昂贵。菁染料已成为 基因芯片测试用的首选荧光标记物,但由于菁染料,尤其是不对称菁染料的合成副反应 多,副产物极性相近,产物的分离提纯相当困难。水溶性菁染料分子极性大,分离提纯 越加困难。文献报道用HPLC (C-18反相柱)纯化,而国内实验室一般没有相应的条件。吲哚类水溶性菁染料Cy3.5,Cy5.5,Cy7.5等是生物芯片、分子信标常用的荧 光染料,但是基于上述制备,分离困难等原因,且至今尚无相应的合成文献报道。为 了解决吲哚菁染料在国内需求长期依赖进口的现状,我们探索合成并用薄层色谱法分离 提纯出Cy5.5,该方法操作简单,中间体不需分离,后续分离简便,摒弃了价格昂贵的 HPLC(C_18反相柱)纯化方法,不仅填补了 Cy5.5在的合成文献方面的空白,而且对于 实现 ...
【技术保护点】
一种水溶性菁染料Cy5.5的制备及纯化方法,其特征在于步骤如下:1)将1,3-二磺酸-6-萘肼、甲基异丙基甲酮和醋酸钾加入醋酸中,常压下进行回流反应,产物经甲醇提纯得到1,1,2-三甲基苯并吲哚1,3-二磺酸盐;2)将上述制得的1,1,2-三甲基苯并吲哚1,3-二磺酸盐加入碘乙烷和邻二氯苯中,在氮气保护下进行反应,反应温度为90℃-130℃,反应时间为24h,生成N-乙基-2,3,3-三甲基苯并吲哚5,7-二磺酸盐,然后将生成物以正丁醇和醋酸的水溶液为展开剂,用制备薄层色谱分离提纯;3)将1,1,2-三甲基苯并吲哚1,3-二磺酸盐加入6-溴己酸和邻二氯苯中,在氮气保护下进行反应,反应温度为140℃,反应时间为24h,生成N-(ε-羧戊基)-2,3,3-三甲基苯并吲哚-5,7-二磺酸盐,然后将生成物以正丁醇和醋酸的水溶液为展开剂,用制备薄层色谱分离提纯;4)将N-乙基-2,3,3-三甲基苯并吲哚-5,7-二磺酸盐和β-苯胺基丙烯醛缩苯胺盐酸加入醋酸酐与醋酸混合液中,在氮气保护下进行反应,反应温度为100℃-130℃,反应时间为3-4h,生成中间体N-乙基-2-(δ-苯胺基甲基乙酮基)丁烯 ...
【技术特征摘要】
1.一种水溶性菁染料Cy5.5的制备及纯化方法,其特征在于步骤如下1)将1,3-二磺酸-6-萘胼、甲基异丙基甲酮和醋酸钾加入醋酸中,常压下进行回流 反应,产物经甲醇提纯得到1,1,2-三甲基苯并吲哚1,3-二磺酸盐;2)将上述制得的1,1,2-三甲基苯并吲哚1,3-二磺酸盐加入碘乙烷和邻二氯苯 中,在氮气保护下进行反应,反应温度为90°C-13(TC,反应时间为24h,生成N-乙 基-2,3,3-三甲基苯并吲哚5,7-二磺酸盐,然后将生成物以正丁醇和醋酸的水溶液为 展开剂,用制备薄层色谱分离提纯;3)将1,1,2-三甲基苯并吲哚1,3-二磺酸盐加入6-溴己酸和邻二氯苯中,在氮 气保护下进行反应,反应温度为140°C,反应时间为24h,生成Ν-(ε_羧戊基)_2,3, 3-三甲基苯并吲哚-5,7-二磺酸盐,然后将生成物以正丁醇和醋酸的水溶液为展开剂, 用制备薄层色谱分离提纯;4)将N-乙基_2,3,3-三甲基苯并吲哚-5,7-二磺酸盐和β-苯胺基丙烯醛缩苯胺 盐酸加入醋酸酐与醋酸混合液中,在氮气保护下进行反应,反应温度为100°C-13(TC, 反应时间为3-4h,生成中间体N-乙基-2-( δ-苯胺基甲基乙酮基)丁烯基-3,3-二甲 基苯并吲哚-5,7-二磺酸盐;5)将Ν-(ε_羧戊基)_2,3,3-三甲基苯并吲哚-5,7_二磺酸盐、醋酸酐、醋酸 和醋酸钾依次加入到N-乙基-2-( δ-苯胺基甲基乙酮基)丁烯基-3,3-二甲基苯并吲 哚-5,7-二磺酸盐中,在氮气保护下进行反应,反应温度为100°C-140°C,反应时间为 0.5-lh,生成水溶性菁染料Cy5.5的初级产品;6)水溶性菁染料Cy5.5初级产品的分离提纯采用制备薄层色谱法,反复展开,得到3 条蓝色展开带,取中间的蓝色带经淋洗...
【专利技术属性】
技术研发人员:郗日沫,赵秀杰,王文虎,
申请(专利权)人:天津三箭生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:12
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