抑制血管生成的成分和方法技术

血管内皮生长因子／血管通透因子（ＶＥＧＦ／ＶＰＦ）是肿瘤最常表达的血管生成因子中的一个。ＶＥＧＦ对抗剂的发展成为了一种治疗癌症的重要方法。本发明专利技术涉及抗ＶＥＧＦ策略，其特征是ＶＥＧＦ从肿瘤的分泌被阻止。胎盘生长因子－１（ＰＬＧＦ－１）是ＶＥＧＦ家族成员中缺乏血管生成活性中的一个成员，其在一个同时表达ＰＬＧＦ－１以及ＶＥＧＦ的细胞里倾向于与ＶＥＧＦ形成细胞内异源二聚体。含有人ＰＬＧＦ－１（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７）或Ｃ末端带有ＫＤＥＬ序列的ＶＥＧＦ的反转录病毒载体被构建，上述的ＫＤＥＬ是一个细胞内的内质网滞留信号。以ＰＬＧＦ－１－ＫＤＥＬ反转录病毒载体转导大鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞（ＬＬＣ）几乎完全停止了肿瘤的生长并诱导肿瘤休眠。与这明显的抗肿瘤效果相一致地，大多数ＶＥＧＦ分子仍然保持为细胞内的ＶＥＧＦ／ＰＬＧＦ－１异源二聚体，仅仅有非常少量的ＶＥＧＦ同源二聚体被分泌。结果，在ＰＬＧＦ－１－ＫＤＥＬ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３）肿瘤里，血管仍然维持在非常低的数目，并缺少分枝和毛细血管网络。ＶＥＧＦ－ＫＤＥＬ结构的基因传送进入肿瘤细胞内也产生了明显的抗肿瘤效果。因此，本发明专利技术提供了组合物和方法用于抑制ＶＥＧＦ从细胞内分泌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞生物学领域，尤其涉及含有细胞滞留信号的VEGF结合成员族。 本专利技术的
技术介绍
肿瘤的生长和血管生成很大程度上取决于瘤床新血管形成的程度(Camieliet， P et al., (2000) Nature 407, 249-57; Folkman, J(1995) Nat Med 1, 27-31; Hanahan, D. & Folkman, J. Cell(1996) 86,353-64)。血管内皮生长因子(VEGF)是一个重要的血管生成因子，经常被肿 瘤或其他组织利用来启动血管的生长(Dvorak, H.F. (2000) Semin Perinatol 24, 75-8; Ferrara, N. & Alitalo, K(1999) Nat Med 5， 1359-64; Yancopoulos, GD. et al., (2000) Nature 407, 242-8; Benjamin, L.E. & Keshet, E.(1997) Proc Natl Acad Sci USA 94, 8761-6)。 VEGA也能够增加血 管的通透性，而这对于肿瘤的侵入和转移具有重要作用(Dvorak, H.F et al.， (1999) Curr Top Microbiol Immunol 237, 97-132; Senger, D.R. et al.,(1983) Science 219, 983-5)。除了病理性的血 管生成外，VEGA在胚胎的发育阶段通过刺激血管发生(vasculogenesis)和血管生成 (angiogenesis)而有助于血管系统的形成(Carmeliet, P. et al., (1996) Nature 380， 435-9; Ferrara N. et al.，(1996) Nature 380, 439-42)。VEGF成员族由结构上相关的成员组成，这些成员包括但不限于VEGA，原型VEGA， 胎盘生长因子(PLGF)， VEGF-B，VEGF陽C， VEGF-D和VEGF陽E(Eriksson, U. & Alitalo, K.(1999) Curr Top Microbiol Immunol 237, 41-57)。 VEGF成员的生物功能由至少三种结构同源的酪氨酸 激酶受体，VEGFR-1/Flt-1， VEGFR-2/Flk-l/KDR和VEGFR-3/Flt-4，的活化所介导(Cao,Y. el al.,(1998) Proc Natl Acad Sci USA 95, 14389-94)。 VEGF和PLGF也结合到一个非酪氨酸激酶 受体上(Migdal， M. et al., (1998). J Biol Chem 273, 22272-8, S et al., 1998) Cell 92, 735-45)。根 据它们的受体的结合模式和血管生成的特性，VEGF成员族可被进一步分成亚组，例如，但 是不限于1) VEGF，其与VEGFR-1和VEGFR-2结合，并诱导血管发生，血管生成和血管 通透性；2) PLGF和VEGF-B，它们选择性地与VEGFR-1结合，而它们的生理学和病理学 作用仍然未知；3) VEGF-C和VEGF-D，它们与VEGFR-2和VEGFR-3相互作用，并诱导血 管生成和淋巴管生成(Cao, Y. et al. s寧a; Makinen, T. et al.，(200丄)Nat Med 7, 199-205; Marconcini, L. et al., (1999) Pro Natl Acad Sci USA 96, 9671-6; Skobe, M. et al" (2001) Nat Med 7: 192-8; Stmcker， S.A. et al., (2001) Nat Med 7, 186-91 )。积累下来的证据表明VEGFR-2，对VEGF 做出响应，为血管生长介导血管生成信号，而VEGFR-3则为淋巴管的生长转导信号(Dvorak, H.F. supra; Ferrara, N. & Alitalo， K. supra; Ferrara, N. (1999) Curr Top Microbiol Immunol 237, 1-30)。与血小板生长因子(PDGF)成员族相似，为了与它们特定的受体结合，VEGA成员族 自然地以二聚体的形式存在。除了同源二聚体外，PLGF(SEQ ID NO:2)和VEGF-B(SEQ ID NO: 11或4)在同一个细胞内被产生时也能够形成异源二聚体(Cao,Y.etal.(1996)JBioChem271, 3154-62; DiSalvo， J. et al., (1995) J Biol Chem 270， 7717-23)。分布研究表明这些因子通常在一 些重叠的组织或细胞中表达。因此，当两种因子在同样的细胞群中被合成时，PLGF/VEGF 或VEGF/VEGF-B异源二聚体自然地在组织中出现(Cao, Y. et al. supra; Cao, Y. et al., (1996)supra)。这些异源二聚体与VEGF同源二聚体比较，展现出较低的血管生成活性，可如申请 号为10/346,589，申请日为2003年1月17日的美国专利申请所描述的那样，被用作抑制血 管生成。
技术实现思路
本专利技术的一个方面是提供带有细胞滞留信号的VEGF结合成员。该VEGF结合家族成员 可包括，PLGF(SEQ ID N0.2)' VEGF-B(SEQ ID NO.ll或14)， VEGF受体(VEGFR) l(VEGFR-l)， VEGFR-2，神经菌毛素一l(neuropilin—1)，神经菌毛素—2(neuropilin—2)，或 者针对表达VEGF的细胞的VEGF结合抗体的衍生物。细胞滞留信号可包括内质网滞留信号， 例如KDEL(SEQIDNO:7)。其他合适的细胞滞留信号包括但不限于内质滞留信号序列，高 尔基体滞留信号序列(例如，但不限于YQRL(SEQIDNO:19))，核内体/溶酶体滞留序列(例 如，但不限于KFERQ(SEQ ID NO:16))，线粒体靶序列，细胞核靶序列，和/或过氧物酶 体靶序列。滞留信号在本
的技术人员中是众所周知的，合适的滞留信号能很容易地 被选定并被并入蛋白编码序列中，翻译后形成带有该滞留信号的蛋白。编码滞留信号的CDNA 序列可被直接插入到编码需要被保留的蛋白的CDNA序列的终止密码子前。本专利技术的又一方面是提供一个能够与VEGF形成异源二聚体的分子。在一些的实施方式 中，该分子可包括带有细胞滞留信号的VEGF结合成员或其衍生物。本专利技术的又一方面是提供一种抑制VEGF的方法，该方法包括施加了带有细胞滞留信号 的VEGA结合成员或它们的衍生物。在一个实施例中，抑制VEGF的方法包括施加 VEGF-B-KDEL(SEQ ID NO: 12或15)。进一步地，还提供一种抑制个体内的血管生成的方法，包括对该个体施加有效量的带有 滞留信号的VEGF结合成员，或它们的衍生物。所述的带有滞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种被分离的核酸，包括编码带有细胞内滞留信号的ＶＥＧＦ结合成员或其衍生物的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列是一个ｃＤＮＡ序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹义海，
申请(专利权)人：曹义海，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]