纯化血清白蛋白及免疫学测定方法技术

本发明专利技术的目的在于提供批次差少的纯化血清白蛋白、及使用该纯化血清白蛋白的反应性高、非特异性反应少的免疫学测定方法。本发明专利技术为一种纯化血清白蛋白，在免疫学测定方法中用于封闭剂和／或不溶性载体的悬浮液，其中，以制成１％水溶液时使用光程长为１．０ｃｍ的石英池在４６３ｎｍ的波长下测定的吸光度为９．０ｍＡｂｓ以下的组分为主成分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及批次差少的纯化血清白蛋白、及使用该纯化血清白蛋白的反应性高、 非特异性反应少的免疫学测定方法。
技术介绍
作为血液、尿等中所含的微量物质的测定方法，采用免疫学测定方法。免疫学测定 方法基于抗原抗体反应的特异性强结合，即使从各种物质混合存在的试样中，也能够特异 性地、灵敏性良好地测定目标物质。但是，近年来，测定血液中的癌标记物、病毒等抗原、抗细菌或病毒的抗体等极微 量成分的需求增高，迫切要求免疫学测定方法具有更高的灵敏性。作为实现免疫学测定方法的高灵敏性的尝试，提出了例如在测定试剂中添加反 应促进剂的方法(专利文献1)、在反应体系中大量添加惰性蛋白的方法(专利文献2)、在 不溶性载体上固定抗原或抗体并用免疫学上为惰性的蛋白等进行封闭时通过加热使封闭 剂变性的方法(专利文献3)等。但是，专利文献1所述的添加反应促进剂的方法中，存在有时诱发非特异性反应 的问题。另一方面，专利文献2、3所述的方法中，通常使用血清来源的白蛋白作为用于防 止非特异性反应的封闭剂。但是，血清白蛋白存在由于批次差有时反应性显著差异、或不能 充分得到效果的问题。专利文献1 日本特开平4-122858号公报专利文献2 日本特开2000-46828号公报专利文献3 日本特开平10-197530号公报
技术实现思路
鉴于上述现状，本专利技术的目的在于，提供批次差少的纯化血清白蛋白、及使用该纯 化血清白蛋白的反应性高、非特异性反应少的免疫学测定方法。本专利技术之一为一种纯化血清白蛋白，在免疫学测定方法中用于封闭剂和/或不溶 性载体的悬浮液，其中，以制成水溶液时使用光程长为1. Ocm的石英池在463nm的波长 下测定的吸光度为9. OmAbs以下的组分为主成分。本专利技术之二为一种纯化血清白蛋白，在免疫学测定方法中用于封闭剂和/或不溶 性载体的悬浮液，其中，以按Imol计胆红素结合量为0. 9mmol以下的组分为主成分。以下，详细说明本专利技术。本专利技术人等进行了深入研究，结果发现，使用以制成1 %水溶液时使用光程长为 1. Ocm的石英池在463nm的波长下测定的吸光度为9. OmAbs以下的组分、或者按Imol计胆 红素结合量为0. 9mmol以下的组分为主成分的纯化血清白蛋白，作为封闭剂和/或不溶性 载体的悬浮液时，可以进行几乎没有批次差、反应性高、非特异性反应少的免疫学测定，从而完成了本专利技术。关于其理由目前尚未明确。血液中的血清白蛋白通常吸附胆红素(黄色色素成 分)、游离脂肪酸等，发挥对它们进行转运的作用。推测以往的血清白蛋白的批次差可能是 由于这些吸附物的有无及量比引起的。满足本专利技术之一、二的条件的组分是吸附物极少的 组分，通过使用以该组分为主成分的纯化血清白蛋白，推测可能可以实现反应性高、非特异 性反应少的免疫学测定。本专利技术之一的纯化血清白蛋白，以制成水溶液时使用光程长为1.0cm的石英 池在463nm的波长下测定的吸光度为9. OmAbs以下的组分为主成分。优选以制成水溶 液时使用光程长为1. Ocm的石英池在463nm的波长下测定的吸光度为8. OmAbs以下的组分 为主成分的纯化血清白蛋白，更优选以制成水溶液时使用光程长为1.0cm的石英池在 463nm的波长下测定的吸光度为7. OmAbs以下的组分为主成分的纯化血清白蛋白。血清白蛋白的这样的组分，是胆红素(黄色色素成分、吸收波长438nm (BSA结合型 胆红素的吸收波长为463nm))等的吸附极少的组分，将以这样的组分为主成分的本专利技术的 纯化血清白蛋白用于封闭剂和/或不溶性载体的悬浮液时，可以进行几乎没有批次差、反 应性高、非特异性反应少的免疫学测定。另外，“作为主成分”是指，优选仅由上述组分构成，但是在不损害本专利技术的目标效 果的范围内可以混入其它组分。容许混入的其它组分的量比因组分而异。127T.U.下的波长700nm下的吸光度变 化量可以维持0. 06Abs以上的比例由表5及附图说明图1求出。例如，在制成1 %水溶液时使用光程长为1. Ocm的石英池在463nm的波长下测定的 吸光度超过9. OmAbs且为13. 5mAbs的组分的情况下，可以混入至总量的45重量％左右。例如，在制成1 %水溶液时使用光程长为1. Ocm的石英池在463nm的波长下测定的 吸光度超过9. OmAbs且为20. OmAbs以下的组分的情况下，可以混入至总量的15重量％左右ο例如，在制成1 %水溶液时使用光程长为1. Ocm的石英池在463nm的波长下测定 的吸光度超过9. OmAbs且为26. OmAbs以下的组分的情况下，可以混入至总量的5重量％左右ο另外，本说明书中，T.U.是利用密螺旋体(tr印onema)抗体测定试剂盒Mediace TPLA (积水医疗公司制)测定的抗密螺旋体抗体效价的单位TITER UNITS的简称。测定WHO 标准品(梅毒病人血清国际标准品、1958年建立)时，1T.U.= 2mIU。另夕卜，将10T.U.以上的作为阳性。本专利技术之二的纯化血清白蛋白，以按Imol计胆红素结合量为0. 9mmol以下的组分 为主成分。优选以按Imol计胆红素结合量为0. Smmol以下的组分为主成分的纯化血清白 蛋白，更优选以按Imol计胆红素结合量为0. 7mmol以下的组分为主成分的纯化血清白蛋 白。在将以血清白蛋白的这样的组分为主成分的本专利技术的纯化血清白蛋白用于封闭剂和/ 或不溶性载体的悬浮液时，可以进行几乎没有批次差、反应性高、非特异性反应少的免疫学 测定。另外，“作为主成分”是指，优选仅由上述组分构成，但是在不损害本专利技术的目标效 果的范围内可以混入其它组分。另外，血清白蛋白的每Imol的胆红素结合量，例如可以通过使用了胆红素测定试 剂(积水医疗公司制、“Autosera BIL-2","AutoseraD-BIL^")的偶氮胆红素法进行测定。容许混入的其它组分的量比因组分而异。127T.U.下的波长700nm下的吸光度变 化量可以维持0. 06Abs以上的比例由表5及图1求出。例如，在以Imol计胆红素结合量超过0. 9mmol且为1. 5mmol以下的组分的情况下，可以混入至总量的45重量％左右。例如，在以Imol计胆红素结合量超过0. 9mmol且为2. Ommol以下的组分的情况下，可以混入至总量的15重量％左右。例如，在以Imol计胆红素结合量超过0. 9mmol且为2. 7mmol以下的组分的情况下，可以混入至总量的5重量％左右。上述制成1 %水溶液时使用光程长为1. Ocm的石英池在463nm的波长下测定的吸 光度为9. OmAbs以下的组分、或者以Imol计胆红素结合量为0. 9mmol以下的组分，例如，可 以通过在阴离子交换层析纯化中用150mM以下的盐浓度的洗脱液洗脱而得到。作为本专利技术的纯化血清白蛋白的原料的血清白蛋白，为动物血清来源的白蛋白， 具体而言，例如优选人、牛、马、羊等大型哺乳动物的血清来源的白蛋白。其中，从廉价且可 以大量获得的观点考虑，特别优选牛血清来源的血清白蛋白。另外，上述血清白蛋白，在进行阴离子交换层析纯化前，优选通过Cohn法、热休克 法等进行粗纯化。上述阴离子交换层析纯化中使用的层析柱的载体没有特别限制，例如，可以举 出本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：原康之，赤峰隆之，吉川胜己，川本道子，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：JP