新型呼吸道病毒性疾病治疗药物制造技术

本发明专利技术是一种防治病毒性疾病的药剂，其活性成分为抗白细胞蛋白酶（ＡＬＰ）。含有ＡＬＰ作活性成分的配方对抗病毒性疾病特别有效，尤其是针对由Ｃｌａｒａ类胰蛋白酶激活的病毒引起的病毒性疾病，也即含有包膜糖蛋白、并通过感染呼吸道进行复制的病毒，如：流感病毒，副流感病毒，ＲＳ病毒，麻疹病毒和流行性腮腺炎病毒。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
新型呼吸道病毒性疾病治疗药物专利
本专利技术涉及一种防治病毒性疾病的药剂，其活性成份是抗白细胞蛋白酶(以下简称ALP)。更具体地说，本专利技术涉及一种含ALP作活性成份，用以防治由Clara类胰蛋白酶激活的病毒所导致呼吸道病毒性疾病的药剂。专利技术背景ALP存在于外分泌物中，如：支气管粘液，唾液，精液，宫颈粘液和鼻涕中。它是一种丝蛋白酶抑制剂，分子量12KDa，包含107个氨基酸残基。它也被认为是与分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)，支气管粘液抑制剂，粘性蛋白酶抑制剂和人精液抑制剂相同的物质。ALP的氨基酸序列已被测定(专利公开号：WO86/03497)。其蛋白基团也被分离并测序(专利公开号：WO86/03519)。从同源性比较，已知ALP包含两个抑制剂区，一个是N-端区，被认为起抑制多种胰蛋白酶样酶作用，另一个是C-端区，通过X-衍射晶体结构分析，认为与胰凝乳蛋白酶结合，并具有抑制弹性蛋白酶的作用[M.G.Gruetter，The EMBO.Journal.Vol.7，No.2，PP.345-351(1988)]。由于ALP可抑制胰凝乳蛋白酶样酶如白细胞弹性蛋白酶和组织蛋白酶G，又可抑制胰蛋白酶样酶如胰蛋白酶，纤溶酶，激肽释放酶和凝血酶等，已知它与肺气肿，关节炎，肾小球肾炎，牙周炎，肌肉萎缩，肿瘤侵入(专利公开号：WO86/03497)，慢性支气管炎和慢性宫颈炎(日本未受审查专利公开号62-259591)有关。当然，ALP在病毒性疾病中的作用还是未知的。病毒感染有以下几步，1)病毒附着于靶细胞之膜受体上，2)病毒包膜与靶细胞膜间发生膜融合，3)病毒基因组传输到靶细胞内。在发生膜融合的步骤2)中，病毒包膜中的糖蛋白前体必须转化成有膜融合活性的成熟病毒包膜糖蛋白形式。通过蛋白分解完成这步转化后，病毒获得了使病毒包膜与呼吸道细胞膜融合的能力。流感病毒中的血凝素(HA)和仙台(Sendai)病毒(副粘液副流感一型病毒)中的F0是其包膜糖蛋白前体，它们的蛋白分解断裂对病毒感染性表达及病毒复制都是必需的。近期的专利技术者们已成功地从鼠肺中分离一种新的精氨酸特异性丝蛋白酶，命名为“Clara类胰蛋白酶”(tryptase Clara)(The Journal of Biological Chemistry，Vol.267，PP.13573-13579，1992)。Clara类胰蛋白酶将仙台病毒中的F0断裂成两个亚单位F1和F2，在试管内以剂量依赖方式激活该病毒的感染性。另外，已经知道在鼠肺中Clara类胰蛋白酶抗体抑制仙台病毒的蛋白分解激活作用，从而抑制病毒复制和鼠肺上的病理改变(Journal of Virology.Vol.66，PP.7211-7216，1992)。-->此外，Clara类胰蛋白酶也断裂流感病毒A/Aichi/2/68(H3N2)中的HA成HA1和HA2(TheJournal of Biological Chemistry，Vol.267，PP.13573-13579，1992)。总的来说，Clara类胰蛋白酶被认为是决定在呼吸道中接触性传染病毒之致病性的一个主要因素。本专利技术者们此前已发现肺的表面活性剂可抑制Clara类胰蛋白酶断裂病毒包膜糖蛋白前体，从而阻断了病毒对支气管粘上皮细胞感染及病毒复制(专利公开号：WO94/00181，FEBS Letters，322，115-119(1993))。
技术实现思路
为寻找抑制Clara类胰蛋白酶激活病毒的物质，本专利技术者们不断研究，结果发现ALP能够显著抑制由Clara类胰蛋白酶引起的病毒激活，从而达到抑制被病毒感染动物体内之病毒复制的目的。本专利技术也因此得以完成。本专利技术提供一种含ALP作活性成份的防治病毒性疾病的药剂。依据本专利技术所使用的ALP不仅包括天然分离纯化的和使用基因工程方法(如，用专利公开号：WO86/03519，WO89/06239，日本未经审查专利公开No.62-259591，No.3-123490等提供的方法)制备的ALP，也包括对ALP氨基酸序列的某些部分作取代，消去，插入和加成处理、具有与ALP同样活性的蛋白。本专利技术之防治药剂所针对的病毒性疾病包括由以下病毒所引起的疾病：流感病毒(influenza virus)，副粘病毒(paramyxovirus)，呼吸道合胞体病毒(respiratorysyncytial virus)(以下简称“RS病毒”)，鼻病毒(rhinovirus)，冠状病毒(coronavirus)，呼吸道肠道病毒(reovirus)，腺病毒(adenovirus)，柯萨奇病毒(Coxsackie virus)，艾柯病毒(echovirus)，单纯疱疹病毒(simple herpes virus)，轮状病毒(rotavirus)，肠道病毒(enterovirus)，脊髓灰质炎病毒(poliovirus)，巨细胞病毒(cytomegalovirus)，带状水痘病毒(varicella zoster virus)和爱滋病毒(HIV)。但它更适合感染发生在呼吸道上的病毒性疾病，而该感染是由于Clara类胰蛋白酶所激活的病毒引起的，也即有包膜的病毒，如流感病毒，副粘病毒，RS病毒，麻疹病毒(measles virus)和流行性腮腺炎病毒(mumps virus)。附图简述图1显示了ALP对Clara类胰蛋白酶断裂仙台病毒包膜之糖蛋白前体F0的抑制作用。图2显示了ALP对Clara类胰蛋白酶断裂流感病毒包膜之糖蛋白前体HA的抑制作用。图3显示了ALP对在培养细胞中仙台病毒和流感病毒感染的抑制作用。其中“A”代表仙台病毒感染实验，“B”代表流感病毒感染实验。图4显示了ALP对感染流感病毒(鼠耐(mouse-adapted)流感病毒A/Asia/1/57(H2N2))鼠的作用情况。“A”表示鼠肺上病毒的效价，“B”表示肺部受损害程度。“A”中，实线代表没有ALP时病毒的效价，虚线代表有ALP时病毒的效价，空心圆圈代表病毒总效价，实心圆圈代表活性病毒效价。在箭头所指的点上给予ALP。-->专利技术的最佳实施方案以下将对ALP对病毒性疾病作用情况作描述，在每个实验中使用下列的ALP，病毒和类胰蛋白酶。ALP所使用的天然ALP，依照日本未经审查的专利公开62-259591提供的方法制备。病毒所使用的病毒为仙台病毒，流感病毒[流感病毒A/Aichi/2/68(H3N2)和鼠耐流感病毒A/Asia/1/57(H2N2)]。在发育鸡卵的羊膜腔中培养的仙台病毒和流感病毒被悬浮于不含钙的磷酸盐缓冲液中，比率为254HAU/ml(血细胞凝集作用单位(hemagglutination unit)/毫升)。Clara类胰蛋白酶依据Kido的方法，Clara类胰蛋白酶由鼠肺中制得(The Journal of BiologicalChemistry，Vol.267，PP.13573-13579，1992)。鼠肺用生理盐水清洗后用剪刀剪碎，在PH5.5条件下匀化，然后离心，所得的上清液用作提取物。该粗提取物通过一个CM-52 Cellulose柱(商品名)和一个CM-52 Sephadex柱(商品名)作离子交换色谱分离，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有抗白细胞蛋白酶作活性成份的Ｃｌａｒａ类胰蛋白酶抑制剂。２．一种含有抗白细胞蛋白酶作活性成份的防治病毒性疾病的药剂。

【技术特征摘要】
JP 1994-3-23 52237/941.一种含有抗白细胞蛋白酶作活性成份的Clara类胰蛋白酶抑制剂。2.一种含有抗白细胞蛋白酶作活性成份的防治病毒性疾病的药剂。3.如权利要求2的防治病毒性疾病的药剂，其中，病毒是指含有包膜糖蛋白，通过感染呼吸道进行复制的病毒。4.如权利要求2或3的防治病毒性疾病的药剂，其中，病毒是指由Clara类胰蛋白酶激活的病毒。5.如权利要求2，3或4的防治病毒性疾病的药剂，其中，病毒为流感病毒，副流感病毒，RS病毒，麻疹病毒和流行性腮腺炎病毒。6.一种治疗病毒性疾病的方法，其中，病人被给予有医疗效能的抗白细胞蛋白酶。7.如权利要求6的治疗病毒性疾...

【专利技术属性】
技术研发人员：木户博，田代真人，关户祥三郎，
申请(专利权)人：三菱东京制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]