一种用于检测呼吸道病毒的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测呼吸道病毒的试剂盒及其应用。本发明专利技术所提供的试剂盒中含有用于检测呼吸道病毒的引物对组，由16个引物对组成，其序列为序列表中序列1-32。本发明专利技术提供的试剂盒支持高通量，可快速、准确地检测常见呼吸道病毒感染，对于临床而言，能够在1小时内获得16种病毒指标的检测结果不仅快于目前较为普遍采用的实时荧光定量PCR方法，而且对于快速辅助指导治疗和用药也具有重要意义。同时，多指标的检测也可以用于地域性的流行病学调研和疫情监控，以研究呼吸道病毒感染在中国的流行情况。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于核酸扩增
，涉及一种用于检测呼吸道病毒的试剂盒及其应 用。
技术介绍
呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，主要病原体包括细菌、病毒、支原 体、衣原体、真菌等，其中主要以病毒性感染为主，特别是上呼吸呼吸道感染中有80%以上 是病毒性的。该病四季、任何年龄均可发病，通过含有病毒的飞沫、雾滴，或经污染的用具进 行传播。常于机体抵抗力降低时，如受寒、劳累、淋雨等情况，原已存在或由外界侵入的病毒 或细菌，迅速生长繁殖，导致感染，成人一般5-7天痊愈。 儿童感染呼吸道病原体通常诱发急性呼吸道感染（ARI)，ARI是婴幼儿、儿童常见 疾病，常继发支气管炎、肺炎、副鼻窦炎，少数可并发急性脑膜炎、心肌炎、肾炎、风湿热等， 并发症严重危害儿童的身体健康。已证实95%的ARI由细菌以外的病原体所致，病毒为ARI 主要病原体。不同年龄儿童对病毒易感性有所区别，据WHO数据显示，呼吸道感染是世界范 围内低龄儿童（〈5岁）死亡的首位原因，每年可造成约500万儿童死亡。儿童急性呼吸道感 染的患病次数平均为3-8次/年，在1岁儿童中感染的比例约1~3%，学龄儿童至5%~ 10%。由于各时期流行的病毒种类和型别不尽相同，有时少数几种不同病毒又可混合感染， 因此对儿童呼吸道病毒病原的监测有着非常重要的意义。早期快速诊断呼吸道病毒感染能 够及时指导临床治疗为合理选择抗病毒抗细菌药物提供依据并在防止抗生素滥用方面具 有重要意义。 呼吸道病毒指能够侵染呼吸道或通过呼吸道进行传播的病毒，至少涉及到8个 科，200多种型别的病毒。临床常见的可导致呼吸道感染的病毒包括正粘病毒科的甲型流感 病毒（InfA)和乙型流感病毒（InfB)，副粘病毒科的副流感病毒1-3型（PIV1-PIV3)、呼吸 道合胞病毒（RSV)、人偏肺病毒（hMPV)，腺病毒科的腺病毒（AdV)、细小RNA病毒科的鼻病毒 (HRV)、冠状病毒（Corn)以及肠道病毒（Entv)等。目前检测常见呼吸道病毒的方法较多， 但都存在不足，如电镜检测方法复杂昂贵，病毒分离培养耗时极长且假阴性较多，在拿到培 养结果后通常已失去临床意义，酶联免疫法检测的是病毒特异性抗体但一次仅能检测一种 病毒。而基于核酸扩增的核酸检测，由于速度快（通常3小时内可完成检测）、灵敏度高、特 异性好，在病毒检测领域正逐渐成为金标准。 依赖核酸序列的扩增技术（Nucleic Acid Sequence Based Amplification)，即 NASBA扩增技术，是由一对引物介导的、在体外特异性并连续均一的对单链RNA进行恒温扩 增的过程。在41°C恒温条件下，在反应速度方面，NASBA扩增Ih可将模板RNA扩增约IO 9~ 1〇12倍，而通常的PCR反应需要2~3h。在检测灵敏度方面，NASBA可以检测到溶液中低 于IOgene copies/μ 1的痕量革El标，而PCR的检测限在100gene copies/μ 1左右。因此， NASBA技术无论是扩增效率还是检测灵敏度都高于RT-PCR技术。而又由于NASBA的反应仅 需要一个41°C的恒温条件，水浴锅即可满足反应要求，不需要复杂的升降温等常规PCR所 依赖的温控设备，因此NASBA技术的仪器成本非常低廉。与相应的检测技术结合，NASBA还 具有操作简便、特异性强等诸多优点。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种用于检测呼吸道病毒的引物对组。 本专利技术所提供的用于检测呼吸道病毒的引物对组，由如下16个引物对组成： 由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1 ;由序列表 中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2 ;由序列表中序列5和序列6 所示的两条单链DNA分子组成的引物对3 ;由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA 分子组成的引物对4 ;由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA分子组成的引物对 5 ;由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA分子组成的引物对6 ;由序列表中序 列13和序列14所示的两条单链DNA分子组成的引物对7 ;由序列表中序列15和序列16所 示的两条单链DNA分子组成的引物对8 ;由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA 分子组成的引物对9 ;由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA分子组成的引物 对10 ;由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA分子组成的引物对11 ;由序列表 中序列23和序列24所示的两条单链DNA分子组成的引物对12 ;由序列表中序列25和序列 26所示的两条单链DNA分子组成的引物对13 ;由序列表中序列27和序列28所示的两条单 链DNA分子组成的引物对14 ;由序列表中序列29和序列30所示的两条单链DNA分子组成 的引物对15 ;由序列表中序列31和序列32所示的两条单链DNA分子组成的引物对16。 其中，所述引物对I(InfAJT)用于扩增甲型流感病毒；所述引物对2 (InfAJll)用 于扩增甲型流感病毒Hl亚型；所述引物对3(InfA_H3)用于扩增甲型流感病毒H3亚型；所 述引物对4(InfB_TY)用于扩增乙型流感病毒；所述引物对5(RSV_TY)用于扩增呼吸道合胞 病毒；所述引物对6(HRV_TY)用于扩增鼻病毒；所述引物对7(ADV_TY)用于扩增腺病毒；所 述引物对8 (PIVl)用于扩增副流感病毒I型；所述引物对9 (PIV2)用于扩增副流感病毒II 型；所述引物对10 (PIV3)用于扩增副流感病毒III型；所述引物对11 (Corn_0C)用于扩增 冠状病毒HKU1/0C43 ;所述引物对12(Corn_NL)用于扩增冠状病毒229E/NL63 ;所述引物对 13(hMPV_TY)用于扩增人偏肺病毒；所述引物对14(Entv_TY)用于扩增肠道病毒；所述引物 对15(EV71_VP1)用于扩增肠道病毒EV71型；所述引物对16(CA16_VP1)用于扩增肠道病毒 CA16 型。 本专利技术的第二个目的是提供一种用于检测呼吸道病毒的成套单链DNA。 本专利技术所提供的用于检测呼吸道病毒的成套单链DNA，由探针组和所述引物对组 组成；所述探针组由如下16个单链DNA探针组成：序列表中序列33所示的单链DNA探针1 ; 序列表中序列34所示的单链DNA探针2 ;序列表中序列35所示的单链DNA探针3 ;序列表 中序列36所示的单链DNA探针4 ;序列表中序列37所示的单链DNA探针5 ;序列表中序列 38所示的单链DNA探针6 ;序列表中序列39所示的单链DNA探针7 ;序列表中序列40所示 的单链DNA探针8 ;序列表中序列41所示的单链DNA探针9 ;序列表中序列42所示的单链 DNA探针10 ;序列表中序列43所不的单链DNA探针11 ;序列表中序列44所不的单链DNA 探针12 ;序列表中序列45所示的单链DNA探针13 ;序列表中序列46所示的单链DNA探针 14 ;序列表中序列47所示的单链DNA探针15 ;序列表中序列48所示的单链DNA探针16。 其中，所述单链DNA探针I (InfA_TY_MB)用于实时监测所述引物对1的扩增结果； 所述单链DN本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测呼吸道病毒的引物对组，由如下16个引物对组成：由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1；由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2；由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA分子组成的引物对3；由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA分子组成的引物对4；由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA分子组成的引物对5；由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA分子组成的引物对6；由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA分子组成的引物对7；由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA分子组成的引物对8；由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA分子组成的引物对9；由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA分子组成的引物对10；由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA分子组成的引物对11；由序列表中序列23和序列24所示的两条单链DNA分子组成的引物对12；由序列表中序列25和序列26所示的两条单链DNA分子组成的引物对13；由序列表中序列27和序列28所示的两条单链DNA分子组成的引物对14；由序列表中序列29和序列30所示的两条单链DNA分子组成的引物对15；由序列表中序列31和序列32所示的两条单链DNA分子组成的引物对16。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张岩，盖伟，邢婉丽，宋翠丹，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11