本发明专利技术提供了一种用于检测葎草花粉过敏患者血中Ｈｕｍ ｊ３ｓｐｅｃｉｆｉｃ－ｓＩｇＥ（Ｈｕｍ ｊ３特异性ＩｇＥ）水平的ＥＬＩＳＡ试剂盒。该试剂盒的捕获抗体为Ｈｕｍ ｊ３单克隆抗体，该抗体不与Ｈｕｍ ｊ３特异性ＩｇＥ抗体产生竞争抑制。该试剂盒具有良好的敏感性、特异性、线性检测范围、显色稳定性，为监测葎草花粉主要致敏蛋白Ｈｕｍ ｊ３过敏患者血样本中Ｈｕｍ ｊ３特异性ＩｇＥ水平以及以后的分子免疫治疗提供了全新的、易于标准化的途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种以小鼠杂交瘤单抗和天然潷草花粉纯化主要致敏蛋白Hum j3为 基础的用于检测潷草花粉过敏患者血中Hum j3specific-sIgE(Hum j3特异性IgE)水平的 ELISA试剂盒，为将来Hum j3过敏的分子免疫治疗提供了全新的、易于标准化的途径。
技术介绍
蔷薇亚纲大麻科一年生缠绕草本植物潷草(Humy Ius japonicus或Humy Ius scandens)，原产我国，广泛分布于远东地区，是一种重要的夏秋季花粉致敏原。我国除新 疆、青海以外的各省区均有分布，东亚各国(朝鲜、日本、俄罗斯、越南)以及欧洲、美国西海 岸地区亦有分布。上世纪八十年代由北京协和医院牵头的第一次全国性气传致敏花粉调查 中，在79个花粉收集点中有53个点可收集到潷草花粉，仅次于蒿属花粉，其分布范围基本 上覆盖全国，播散高峰为八、九月。北京协和医院首次发现潷草花粉是我国夏秋季节仅次 于蒿属花粉的重要致敏原，是导致临床上出现变应性鼻炎、过敏性结膜炎、花粉性皮炎、季 节性哮喘等花粉症症状的重要病因，很大程度上影响了患者的生活质量。现阶段对于花粉症的诊断和治疗，依赖于特异性变应原疫苗(Specific Allergenic Vaccines)，而变应原特异的免疫治疗(Allergen -Specific Immunotherapy, SIT)是目前成熟的针对花粉症病因治疗的方法。变应原疫苗是指包括变应原提取物以及 其它成分的生物制剂，可有效用于人类过敏性疾病的诊断、预防和治疗。变应原特异的免 疫治疗(Allergen-Specific Immunotherapy, SIT)通过调节抗原提呈细胞、B淋巴细胞和 T淋巴细胞的免疫应答以及调节介导变态反应效应细胞的功能和数量，从而减轻患者症状 M。WHO发布指导文件指出，SIT是唯一能影响过敏性疾病自然病程、有效阻止变应性鼻 炎进展为哮喘的治疗方法。尽管SIT是目前成熟的针对花粉症病因治疗的方法，但现阶段以变应原浸液为基 础的变应性疾病免疫诊断和治疗模式并非是最理想的模式，而基于变应原组分(allergen component-resolved diagnosis andtreatment)的诊断和治疗模式的尝试,则代表了一种 新的方向。因为即使是对于同一种花粉过敏，不同患者的血清致敏蛋白反应谱也不一 样，例如同为潷草过敏患者，由于潷草花粉变应原种类很多，其不同个体血清中可能含有针 对潷草花粉变应原浸液中不同致敏成分反应的特异性IgE(SlgE)。因此，以花粉浸液作为 皮试和体外IgE检测试剂，仅能得出对该花粉过敏的信息，但无法确认对何种致敏蛋白过 敏。最近，由于分子生物学的进展，大量的变应原被纯化、鉴定和重组表达，基于变应原组分 (allergen component-resolved diagnosis andtreatment)的诊断禾口治疗模式的尝试，更 为科学的反应了过敏患者的体内致敏蛋白血清slgE反应谱，所以诊断更为特异，相应也就 能达到个体化免疫治疗的目的。同时由于排除了对个体患者无意义的致敏蛋白和非致敏蛋 白，也使得该个体化免疫治疗更为安全，使变应原特异的免疫治疗在医疗实践中能达到WHO 关于医疗保健的质量定义，即“高度的专业诊断标准”、“有效的利用资源”、“患者承担风险 最低”、“患者高度满意”、“以及患者治疗的连续性”。最近，有较多基于变应原组分的诊断和治疗的文章发表。如以重组的胡萝卜变应原来体外诊断过敏患者究竟对于何种胡萝 卜变应原过敏。作者发现，该诊断模式有较好的敏感性与特异性，能作为一种标准的诊断模 式。而G. Pittnerm以纯化的天然和重组螨变应原来对屋尘螨过敏患者进行体外诊断研究 也发现，大于95%的尘螨过敏患者能由nDer pi和rDer p2联合诊断，该方法能用于筛选适 用于免疫治疗的的过敏患者以及正在接受免疫治疗的患者的免疫状态监测。A. Reuter等 利用重组的rPru av 1，3，4三种分子分别以单独和混合的方式对樱桃过敏患者进行了 血清学诊断试验的评价，重组分子混合模式的诊断其敏感度为95 %，而樱桃变应原浸液的 诊断敏感度仅为65%。而在免疫治疗方面，Adriano Mari等特异性免疫治疗的模式做 了新的探讨，认为有一些单变应原分子致敏的患者，可以以纯化或重组的变应原分子进行 免疫治疗；而对同一种花粉的多种变应原或引起交叉反应的不同花粉的变应原，则可以按 传统的变应原浸液进行免疫治疗；对于多种花粉致敏的患者，则可以按照“鸡尾酒”的模式 进行变应原分子的混合后再行免疫治疗。以Chimeric ELISA的模式进行过敏原的血清学诊断，基本原理在于，以变应原特 异的小鼠单抗为捕获抗体包被酶标板，然后加入变应原浸液或纯化的变应原，然后加入标 准血清、待测血清和阴性血清，最后加入鼠抗人IgE单抗，显色后经酶标仪读数，通过与标 准曲线对照，计算待测血清样本中针对该变应原的sIgE，模式图见附图1。Martin等 认为该Chimeric ELISA模式与CAP系统检测变应原特异的slgE有较好的相关性，在临床 和流行病研究中很有用，又由于其简单实用，在基层医院即可操作。Trombone AP_等以 Chimeric ELISA的方法研究分析了尘螨过敏患者血中IgE抗体对于尘螨变应原Derpl和 Der p2的反应情况，并与CAP系统检测对于螨体变应原浸液Dpt的情况作了比较，发现前者 前者与后者明显相关。所有尘螨过敏患者中，70%患者对于Dpt的slgE检测为阳性，76. 5% 患者对Der pi血清阳性，79. 2%患者对Der ρ2血清阳性，83. 对于Der pi和Derp2联 合检测为阳性。作者认为当Der pi或者Der p2的Cut-off值在2IU/ml的时候，对于CAP 系统检测Dpt阳性预期值大于95%。由于潷草花粉由于地理分布广、流行病学意义重大而倍受国内外研究者重视。在 国内李东栋等对武汉地区潷草花粉变应原蛋白质组分的进行了双向电泳分析，孙秀珍 等对潷草花粉变应原致敏组分进行了研究；刘昀等构建潷草和初步鉴定了花粉cDNA 表达文库，陶爱林等创建了潷草及豚草过敏原的嵌合基因，并对其抗原性作出评价；尹 佳等研究了皮内试验和血清特异性IgE检测在诊断潷草花粉症中的临床价值等。但一直 以来，对于潷草主要变应原一直没有足够的认识。直至最近，率先由北京协和医院变态反应 科尹佳等纯化、克隆、鉴定一个潷草花粉致敏蛋白，其过敏患者血清slgE结合率约为74%， 确定为潷草主要致敏蛋白，拟定名为Hum j3。本申请专利技术人利用纯化的天然潷草主要致敏蛋白，免疫BALB/c小鼠，得到了杂交 瘤单抗，通过对单抗的筛选，首次构建了以ChimericELISA方法测定潷草花粉过敏患者血 中Hum j3 specific-sIgE水平的ELISA方法，该方法具有很好的敏感性、特异性、线性检测 范围、显色稳定性，为筛选和监测Hum j3进行分子免疫治疗的患者提供了全新的、易于标准 化的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测Hum j3特异性IgE抗体的ELISA试剂盒。为实现上述目的，本专利技术首先利用通过纯化本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测Ｈｕｍ ｊ３特异性ＩｇＥ抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒，其包括包被捕获抗体的酶标板，所述捕获抗体为Ｈｕｍ ｊ３单克隆抗体，且该抗体不与Ｈｕｍ ｊ３特异性ＩｇＥ抗体产生竞争抑制。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：尹佳，周俊雄，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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