一种用于基因分析的荧光AFLP试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于基因分析的荧光ＡＦＬＰ试剂盒，包括盒体、六组试剂瓶，盒体内设有瓶架，各试剂瓶放置于瓶架上；第一组试剂瓶为装有适配子的试剂瓶；第二组试剂瓶为装有属于酶切／连接反应预混合体系中的试剂的试剂瓶；第三组试剂瓶为装有ＰＣＲ预混合体系中的试剂的试剂瓶；第四组试剂瓶为装有预扩增引物预混合体系中的试剂的试剂瓶；第五组试剂瓶为装有选扩增引物系列中的试剂的试剂瓶；第六组试剂瓶为装有质控ＤＮＡ的试剂瓶；其中，第五组试剂瓶设有荧光物质。试剂盒使用方便、结构简单，本实用新型专利技术试剂盒能够用于基因分析，能够用于种质鉴定、亲缘关系及种质分类研究。具有数据收集自动化、定量化、灵敏性更好、速度更快、效率更高等特点。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种试剂盒，特别是涉及一种用于基因分析的荧 光AFLP试剂盒。
技术介绍
扩增片断长度多态性 (Amplified fragment length polymorphism, AFLP)标记技术是一种DNA指纹技术，主要用于检测 DNA多态性。AFLP技术是根据基因组DNA水平的差异进行检测，不受 组织和器官、发育阶段、生理条件等诸多因素影响，因此AFLP技术 具有广阔的前景，可作为种质鉴定、亲缘关系及种质分类研究的理想 标记。
技术实现思路
本技术需要解决的技术问题是提供一种用于基因分析的荧 光AFLP试剂盒，该种试剂盒能够用于基因分析，能够用于种质鉴定、 亲缘关系及种质分类研究，并具有数据收集自动化、定量化、灵敏性 更好、速度更快、效率更高等特点。本技术解决技术问题可以通过采取如下技术方案一种用于基因分析的荧光AFLP试剂盒，其特征是包括盒体、 六组试剂瓶，盒体内设有瓶架，各试剂瓶放置于瓶架上；第一组试剂 瓶为装有适配子的试剂瓶；第二组试剂瓶为装有属于酶切/连接反应 预混合体系中的试剂的试剂瓶；第三组试剂瓶为装有PCR预混合体系 中的试剂的试剂瓶；第四组试剂瓶为装有预扩增引物预混合体系中的 试剂的试剂瓶；第五组试剂瓶为装有选扩增引物系列中的试剂的试剂 瓶；第六组试剂瓶为装有质控DNA的试剂瓶；其中，第五组试剂瓶设 有荧光物质。本技术解决技术问题还可以进一步采取以下改进第一组试剂瓶共为一瓶，第二组试剂瓶共为二瓶，第三组试剂瓶 共为四瓶，第四组试剂瓶共为一瓶，第五组试剂瓶共为十六瓶，第六 组试剂瓶共为一瓶。所述盒体由外盒与内盒组成，外盒的一个侧面敞开；内盒与外盒 的大小匹配，内盒置于外盒内，内盒的顶面敞开；瓶架置于内盒内。所述瓶架上设有瓶孔，各试剂瓶置于相应的瓶孔内。本技术具有以下技术效果本技术试剂盒能够用于基因分析，能够用于种质鉴定、亲缘 关系及种质分类研究。试剂盒使用方便、结构简单，里面放置的各种 试剂瓶数量合理，摆放有序，便于进行各种基因分析。本试剂盒在选 择性扩增引物的5'端标记上了荧光物质(本试剂盒标记6-FAM，发 蓝色荧光)，在测序仪上电泳时，由于激光的激发产生不同波长的荧 光，能被测序仪自动收集生成图像信号，在有分子量内参marker(红 色荧光)的前提下，信号可以转换成一定分子量大小的片段，具有数 据收集自动化、定量化、灵敏性更好、速度更快、效率更高等特点。附图说明图1是本技术试剂盒示意图。图2是本技术试剂盒拉出内盒时的示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本技术进行具体描述。如图1、图2所示， 一种用于基因分析的荧光AFLP试剂盒，包 括盒体、六组试剂瓶，盒体内设有瓶架1，各试剂瓶放置于瓶架1上。 所述盒体由外盒2与内盒3组成，外盒2的一个侧面敞开；内盒3与 外盒2的大小匹配，内盒3置于外盒2内，内盒3的顶面敞开；瓶架 1置于内盒3内。所述瓶架1上设有瓶孔4，各试剂瓶置于相应的瓶孔4内。第一组试剂瓶5为装有适配子(Adaptor)的试剂瓶；第二组 试剂瓶6为装有属于酶切/连接反应预混合体系(RLmix)中的试剂的 试剂瓶；第三组试剂瓶9为装有PCR预混合体系(PCRmix)中的试剂 的试剂瓶；第四组试剂瓶8为装有预扩增引物预混合体系(Pr印mix) 中的试剂的试剂瓶；第五组试剂瓶10为装有选扩增引物系列(Selprim) 中的试剂的试剂瓶，其中包括Selprim-M系列和Selprim-E系列；第 六组试剂瓶7为装有质控DNA (ControlDNA)的试剂瓶；其中，第五组 试剂瓶设有荧光物质。第一组试剂瓶5共为一瓶，第二组试剂瓶6共为二瓶，第三组试 剂瓶9共为四瓶，第四组试剂瓶8共为一瓶，第五组试剂瓶10共为 十六瓶，第六组试剂瓶7共为一瓶。本技术试剂盒能够用于基因分析，能够用于种质鉴定、亲缘 关系及种质分类研究。试剂盒使用方便、结构简单，里面放置的各种 试剂瓶数量合理，摆放有序，便于进行各种基因分析。AFLP的基本原理是基因组DNA经两种限制性内切酶酶切，形成 分子量大小不等的随机限制性酶切片段，将特定的、人工合成的、短 的双链接头连在这些片段的两端，形成一个带接头的特异片段，通过 接头序列和PCR引物3'端选择性碱基的识别，对特异性片段进行预 扩增和选择性扩增。最后只有那些两端序列能与选择性碱基配对的限 制性酶切片段才能被扩增；最后将选择性扩增产物在高分辨率的变性 聚丙烯酰胺凝胶上电泳，寻找多态性扩增片段。荧光AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP) 原理与常规AFLP相同，但在选择性扩增引物的5，端标记上了荧光 物质(本试剂盒标记6-FAM,发蓝色荧光)，在测序仪上电泳时，由 于激光的激发产生不同波长的荧光，能被测序仪自动收集生成图像信 号，在有分子量内参marker (红色荧光)的前提下，信号可以转换 成一定分子量大小的片段，具有数据收集自动化、定量化、灵敏性更 好、速度更快、效率更高等特点。本方法将最新的毛细管电泳技术(ABI 3130XL遗传分析系统) 与荧光AFLP相结合，与传统的直板电泳相比，具有明显优势片段 大小全数字化，波动范围在土lbp,方便比对并根据峰高和品系背景 对片段作出合理的取舍；对于低分子量区片段的分析优势独有，直板 电泳在低分子量区带型堆积，肉眼很难分辨，不同的分析者判断主观 性强，结果偏差大，有时不得不放弃大量的多态性信息，而 genemapper3. 5软件会智能化过滤噪音信号，避免了肉眼判带的主观 性，在低于100bp的区域，尤其是60bp左右的区域能获得大量的多 态性信息；实验中每个样品孔中均加入分子量marker，实现了片段 大小的高度均一化，孔间(样本间)及板间(批次间)高度可比性， 避免了直板电泳的缺点(每板只有一个marker泳道，板内尚容易出 现偏差，板间更难客观比对，只能根据主观经验判读)。1).本试剂盒为Msel/EcoRI组合模式，其中酶切/连接反应为一 步完成，为保证AFLP实验的准确性、减少片段丢失，请检测基因组 DNA的纯度及完整性。建议常规方法提取基因组总DNA，溶解为浓度 50ng/ul。 2).本试剂盒组分常温下不稳定，请勿反复冻融，长期不 使用请于-80'C低温保存。3).为确保实验成功，请连续完成实验步 骤中的各个实验过程，尽量不要在单个实验环节完成后长期冻存中间 产物。使用本试剂盒时请按以下操作步骤进行， 操作步骤1.酶切/连接反应(20ul反应体系) 在20lil反应体系中，含有以下成份 RLmix 17ul Adaptor lul 模板DNA (50ng/ul) 2ul 按以下条件进行酶切/连接反应37°C 5小时+ 15'C 5小时，4'C保存备用.*为确保酶切完全，RLmix分装前请充分混匀；模板DNA含量请 勿超过200ng;酶切时间可以酌情增减。2.预扩增反应(20ul反应体系) 在20ul反应体系中，含有以下成份PCR mix17ulPrepmix lul template DNA (连接反应产物) 2ul 按以下条件进行预扩增PCR反应-94。C 2 min9本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于基因分析的荧光ＡＦＬＰ试剂盒，其特征是：包括盒体、六组试剂瓶，盒体内设有瓶架，各试剂瓶放置于瓶架上；第一组试剂瓶为装有适配子的试剂瓶；第二组试剂瓶为装有属于酶切／连接反应预混合体系中的试剂的试剂瓶；第三组试剂瓶为装有ＰＣＲ预混合体系中的试剂的试剂瓶；第四组试剂瓶为装有预扩增引物预混合体系中的试剂的试剂瓶；第五组试剂瓶为装有选扩增引物系列中的试剂的试剂瓶；第六组试剂瓶为装有质控ＤＮＡ的试剂瓶；其中，第五组试剂瓶设有荧光物质。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张宏斌，范钦，
申请(专利权)人：广州华灿医药科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：81[中国|广州]