长期稳定的制剂制造技术

一种稳定的Ｇ－ＣＳＦ制剂，所述制剂在２５℃３个月的长期贮存试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，或在４０℃２个月的长期贮存试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，或在５０℃１个月的加速试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，或在６０℃２周的加速试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，且在５０℃１个月或６０℃２周的加速试验后甲硫氨酸－氧化的Ｇ－ＣＳＦ为１％或更少。一种抑制含有甲硫氨酸残基的生理活性蛋白质产生甲硫氨酸残基被氧化的衍生物的方法，其特征在于将甲硫氨酸加到含有该蛋白质的组合物中。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及G-CSF(粒性白细胞集落刺激因子)制剂，尤其涉及活性组分损失少及低甲硫氨酸-氧化的G-CSF含量的特别稳定的G-CSF制剂。现有技术G-CSF是一种分子量约为20,000的糖蛋白，它作用于嗜中性白细胞的前体细胞以促进它们增殖和分化而成熟。通过培养患口腔基底癌病人的一种肿瘤细胞系，可提纯出高纯度的人G-CSF。目前，采用基因工程技术已成功地克隆了人G-CSF基因，可从微生物或动物细胞大量生产重组人G-CSF。我们也已将这种提纯的G-CSF转化为制剂产品，并作为抗感染药供应市场(日本专利2116515)。G-CSF的用量极小，即含有0.1-1000μg(优选5-500μg)G-CSF的制剂通常可供一个成年人每周给药1-7次。但是，这种G-CSF易被安瓿、注射器等的壁吸附。G-CSF不稳定，对环境因素如温度、湿度、氧、UV射线等非常敏感，并可发生物理或化学变化包括缔合、聚合或氧化，这将导致活性大大丧失。因此，设计了多种配方以向市场提供稳定的G-CSF制剂。例如，含有以下至少一种成分的制剂(a)选自苏氨酸、色氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸和甲硫氨酸的至少一种氨基酸；(b)至少一种含硫的还原剂；或(c)至少一种抗氧剂(日本专利2577744)。也有含表面活性剂如聚山梨酯为稳定剂的G-CSF制剂(日本专利申请146826/88)。也有报道含有麦芽糖、棉子糖、蔗糖、海藻糖或氨基糖的G-CSF冻干制剂，它可以限制G-CSF在容器中的沉积从而抑制其化学变化(日本专利公开504784/96)。市场上的一些产品，通常含有蛋白质如人血清白蛋白或纯化的明胶作为稳定剂，用来抑制化学或物理变化。然而，添加这种蛋白质稳定剂也带来了一些问题，例如，必需的且非常复杂的除去病毒污染的过程。然而，在没有这种蛋白质的情况下，又可能产生Met(甲硫氨酸)-氧化的G-CSF，这就带来了变质的问题。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种G-CSF制剂，它可更稳定地长期贮存，并且Met-氧化的G-CSF的含量较低。经过仔细的针对上述目的的研究，我们完成了本专利技术G-CSF制剂，通过加入特定氨基酸联用为稳定剂，可使该制剂在长期贮存后仍含高剩余率的G-CSF，并且其中Met-氧化的G-CSF的含量较低。因此，本专利技术提供了一种稳定的G-CSF制剂，该制剂在25℃3个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在40℃2个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在50℃1个月的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在60℃2周的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，在50℃1个月或60℃2周的加速试验后Met-氧化的G-CSF为1％或更少。本专利技术还提供含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸和天冬酰胺的氨基酸；一种或多种选自疏水性氨基酸的氨基酸；和甲硫氨酸的所述G-CSF制剂。本专利技术提供所述G-CSF制剂，其中的疏水性氨基酸选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸。本专利技术还提供含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的氨基酸；一种或多种选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的氨基酸；和甲硫氨酸的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供含有苯丙氨酸、精氨酸和甲硫氨酸的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供基本上不含蛋白质为稳定剂的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供冻干制剂形式的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供另外含有露醇的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供另外含有表面活性剂的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供其中表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨糖醇烷基酯的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供其中表面活性剂为吐温20和/或80的G-CSF制剂。本专利技术还提供pH值为5-7的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供pH值为5.5-6.8的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供pH值为6.5的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供G-CSF产自CHO细胞的所述G-CSF制剂。本专利技术还提供一种稳定的G-CSF制剂，所述制剂在25℃3个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在40℃2个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在50℃1个月的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在60℃2周的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，其特征在于含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸和天冬酰胺的氨基酸；和一种或多种选自疏水性氨基酸的氨基酸；其中pH值为5-7。本专利技术还提供一种稳定的G-CSF制剂，所述制剂在25℃3个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在40℃2个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在50℃1个月的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在60℃2周的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，其特征在于含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的氨基酸；和一种或多种选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的氨基酸；其中pH值为5-7。本专利技术还提供pH值为6.5的上述两种制剂中的任何一种G-CSF制剂。本专利技术还提供一种抑制含有甲硫氨酸残基的生理活性蛋白质在甲硫氨酸残基上氧化产生变体的方法，包括将甲硫氨酸加到含有所述蛋白质的组合物中。本专利技术提供所述方法，其中生理活性蛋白质为细胞因子或生理活性肽。本专利技术提供所述方法，其中生理活性蛋白质为集落刺激因子或PTH。本专利技术提供所述方法，其中生理活性蛋白质为G-CSF、红细胞生成素或PTH。本专利技术提供所述方法，其中不存在作为稳定剂的其它蛋白质。本专利技术提供所述方法，所述组合物含有具有甲硫氨酸残基的生理活性蛋白质，其中所述组合物为冻干或溶液形式。本专利技术还提供含有具有甲硫氨酸残基的生理活性蛋白质的稳定组合物，其中还含有甲硫氨酸和一种或多种其它氨基酸。本专利技术提供含有具有甲硫氨酸残基的生理活性蛋白质的稳定组合物，其中所述一种或多种的氨基酸选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和酪氨酸。本专利技术提供含有具有甲硫氨酸残基的生理活性蛋白质的稳定组合物，其特征在于它不含其他蛋白质为稳定剂。附图简述附图说明图1为60℃加速试验2周后，用下述方法2测定的试样34和36的色谱图。图2为刚制备后及50℃加速试验1个月后，用下述方法2测定的试样34-36的色谱图。图3为用实施例6中方法测定的甲状旁腺素溶液制剂的HPLC色谱图(50℃下贮存3天)，这表明加入甲硫氨酸可抑制甲硫氨酸残基的氧化。其中，中央最高峰对应着未破坏PTH，而标为Met-8和Met-18的峰分别对应着在第8和18甲硫氨酸残基氧化的PTH。本专利技术最优选实施方案用于本专利技术制剂的G-CSF包括任何高纯度的人G-CSF。具体而言，它可衍生于天然来源或基因重组，只要它基本上具有与哺乳动物的G-CSF特别是人G-CSF一样的生物活性。基因重组的G-CSF可与天然G-CSF具有相同的氨基酸序列，或在所述氨基酸序列中含有中间缺失、取代或添加一个或多个氨基酸，只要它也具有所述的生物活性。本专利技术中的G-CSF可用任何方法制备，例如可用各种技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定的Ｇ－ＣＳＦ制剂，所述制剂在２５℃３个月的长期贮存试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，或在４０℃２个月的长期贮存试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，或在５０℃１个月的加速试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，或在６０℃２周的加速试验后仍剩余９０％或更多的Ｇ－ＣＳＦ，在５０℃１个月的加速试验后或在６０℃２周的加速试验后甲硫氨酸－氧化的Ｇ－ＣＳＦ为１％或更少。

【技术特征摘要】
JP 1999-3-1 52314/991.一种稳定的G-CSF制剂，所述制剂在25℃3个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在40℃2个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在50℃1个月的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在60℃2周的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，在50℃1个月的加速试验后或在60℃2周的加速试验后甲硫氨酸-氧化的G-CSF为1％或更少。2.如权利要求1的G-CSF制剂，其中含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸和天冬酰胺的氨基酸；一种或多种选自疏水性氨基酸的氨基酸；和甲硫氨酸。3.如权利要求2的G-CSF制剂，其中所述疏水性氨基酸选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸。4.如权利要求1的G-CSF制剂，其中含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的氨基酸；一种或多种选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的氨基酸；和甲硫氨酸。5.如权利要求1的G-CSF制剂，其中含有苯丙氨酸、精氨酸和甲硫氨酸。6.如权利要求1-5之一的G-CSF制剂，其中基本上不含蛋白质为稳定剂。7.如权利要求1-6之一的G-CSF制剂，为冻干制剂。8.如权利要求1-7之一的G-CSF制剂，其中还含有甘露醇。9.如权利要求1-8之一的G-CSF制剂，其中还含有表面活性剂。10.如权利要求9的G-CSF制剂，所述表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨糖醇烷基酯。11.如权利要求10的G-CSF制剂，所述表面活性剂为吐温20和/或80。12.如权利要求1-11之一的G-CSF制剂，其中pH值为5-7。13.如权利要求12的G-CSF制剂，其中pH值为5.5-6.8。14.如权利要求13的G-CSF制剂，其中pH值为6.5。15.如权利要求1-14之一的G-CSF制剂，其中G-CSF产自CHO细胞。16.一种稳定的G-CSF制剂，所述制剂在25℃3个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在40℃2个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在50℃1个月的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在60℃2周的加速试验后...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤泰，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]