用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸及其制备方法技术

一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸，包括一个纤维膜，纤维膜上设置有测试带和对照带，测试带中喷涂有鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原抗体溶液，对照带上喷涂有抗鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原抗体的抗抗体，在纤维膜上靠近对照带的一侧设置有吸水垫，在纤维膜上靠近测试带的一侧设置有金标垫，金标垫中设置有抗耶尔森氏菌Ｆ１抗原抗体的免疫胶体金探针溶液，金标垫上设置有样品垫，样品垫设置在远离测试带的金标垫的一侧。本发明专利技术还提供了一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸的制备方法。本发明专利技术的免疫层析试纸可达到与反向血凝实验同样的特异性和敏感性，并且更加简便快速，是检测鼠疫流行及早期检测的有效方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物化学领域，尤其涉及一种免疫层析试纸，具体来说是 一种。技术背景-鼠疫的致病菌鼠疫耶尔森氏菌(r^w'm'" 是人们早已熟知的烈 性病原微生物，具有容易获得，致病性强，致死率高，对自然环境的抵抗 力较强的特点，不同性别和年龄的人都是易感人群，因而被公认为是经典 的生物战剂。"9.11"事件以后，美国国家反恐预案将鼠疫耶尔森氏菌列为 生物恐怖红色警报(最高级)中的烈性病原微生物，对环境中鼠疫耶尔森 氏菌的快速检测现已成为反生物恐怖的重要内容。鼠疫耶尔森氏菌经典的检测程序一般分为四步，包括显微镜涂片检查、 细菌培养、鼠疫噬菌体裂解实验和动物实验。涂片检査和细菌培养的标本 一般是采集疑似病人或动物的淋巴结吸出物、痰、脑脊液或死者的肺部组 织材料。鼠疫耶尔森氏菌是杆状、不形成芽孢、革兰氏呈阴性且两端浓染 的厌氧菌。腺鼠疫中80%以上的血液标本培养为阳性，初代培养需要观察 3-5天。噬菌体裂解实验用于细菌鉴定，动物实验用于污染材料中病原的分 离及毒力的测定。将被检材料制成悬液，通过腹腔、皮下和经皮等途径接 种0,2-0.5mL于小白鼠或豚鼠，材料中若果有一定数量的鼠疫耶尔森氏菌， 动物一般在接种2天后死亡。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的 免疫层析试纸及其制备方法，所述的这种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫 层析试纸要解决现有技术中的检测鼠疫耶尔森氏菌的方法灵敏度低，检测方法复杂，时间长的技术问题。本专利技术一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸，包括一个纤维 膜，所述的纤维膜上设置有测试带和对照带，所述的测试带中喷涂有鼠疫 耶尔森氏菌Fl抗原抗体溶液，所述的对照带上喷涂有抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原抗体的抗抗体，在所述的纤维膜上靠近对照带的一侧设置有吸水垫，在所述的纤维膜上靠近测试带的一侧设置有金标垫，所述的金标垫为玻璃纤维膜、树脂或无纺布，所述的金标垫中设置有抗耶尔森氏菌Fl抗 原抗体的免疫胶体金探针溶液，所述的金标垫上设置有样品垫，所述的样 品垫设置在远离测试带的金标垫的一侧。进一步的，所述的纤维膜的另外一侧设置有背板。本专利技术还提供了一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸的制备 方法，包括员一个制备鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原抗体和抗鼠疫耶尔森氏菌 Fl抗原抗体的抗抗体的过程，将鼠疫耶尔森氏菌F1抗原抗体溶液喷到纤 维膜上形成测试带，将抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原抗体的抗抗体喷到所述 纤维膜的另一区域形成对照带，然后将吸水纸垫粘贴在所述纤维膜的远离 所述测试带的一端；包括一个制备抗耶尔森氏菌Fl抗原抗体的免疫胶体 金探针溶液的过程，将玻璃纤维膜、树脂或无纺布进入该免疫胶体金探针 溶液，得到金标垫，将其粘贴在纤维素膜的靠近所述测试带的一端，然后 在金标垫的远离所述测试带的一端粘贴样品垫，得到检测鼠疫耶尔森氏菌 的免疫层析试纸。进一步的，所述测试带上抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原抗体的浓度为 2.0-2.26mg/mL。进一步的，所述对照带上抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原抗体的浓度为 2.5-3.0 mg/mL。进一步的，所述鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原抗体的免疫胶体金探针的制备方法如下3) 将0.0in/。HAuCU水溶液，加热煮沸，每100mLHAuCU溶液进行如 下操作搅动下加入1.6mL的1%柠檬酸三钠水溶液，直到液体颜色稳定 成葡萄酒红色，得到胶体金溶液；4) 配制含有浓度为28pg/mL的抗鼠疫耶尔森氏菌F1抗原的抗体的免 疫胶体金探针溶液。本专利技术还提供了一种试剂盒，所述的试剂盒中设置有上述的用于检测 鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸。在实际应用中，所述纤维素膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜，宽度 控制在20-2.5mm为宜；所述金标垫宽度为5-10mm;所述样品垫为玻璃纤 维膜，宽度为20-40mm。本专利技术的免疫层析试纸可达到与反向血凝实验同样的特异性和敏感 性，并且更加简便快速，是检测鼠疫流行及早期检测的有效方法。本专利技术与其他检测鼠疫耶尔森氏菌的方法相比，优势在于检测过程中 标本处理简单，不需要专门仪器和人员培训，非专业技术人员按照说明书 即可操作，并可迅速观察结果，具有简便性、敏感性、特异性和快速性的 优点，适于临床和现场使用。具体实施例方式实施例1 制备抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原的抗体选用体重2Kg的健康大耳白家兔，皮下注射福氏完全佐剂鼠疫耶尔森 氏菌Fl抗原2mg/只(购于长春生物制品研究所)，并分别于初次免疫后的 第20日、第30日和第40日追加免疫水剂一针，剂量和途径与初次免疫相 同，末次免疫后IO天测试血清中的抗体效价，经琼脂双向扩散法检测抗体 效价达到l: 32以上采血。采用饱和硫酸铵盐析法对血液中的抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原的抗体 进行纯化，经琼脂双向扩散法鉴定获得的抗体具有较好的特异性和亲和性。实施例2 制备免疫胶体金探针1) 制备胶体金溶液采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒，具体方法为将HAuCU配置成0.0P/。水溶液，取100mL加热至沸腾，搅动下准确 加入1.6mL的1%柠檬酸三钠(Na3C8H507'2H20)水溶液，液体颜色稳定 成葡萄酒红色，即得到胶体金溶液。2) 确定胶体金偶联抗体饱和浓度用0.2MK2CO3或0.1MHC1溶液 调节胶体金溶液pH值至9.0，将抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原的抗体稀释为 lmg/mL浓度，分别取5pL、 10nL、 15pL、 20pL、 25pL、 30|iL加入到lmL 胶体金溶液各管中，混匀后于室温下放置5min，加入10%NaCl水溶液 O.lmL，混匀，静置，10-20min后观察液体颜色，胶体金溶液颜色不变时 所含最少抗体量，即为稳定lmL胶体金溶液所需抗体的最适浓度，结果表 明该最适浓度为25pg/mL，在此基础上增加20%抗体量，即为胶体金欧联 抗体饱和浓度，该饱和浓度为28吗/mL。3) 制备免疫胶体金探针溶液按上述方法配制含有浓度为28jig/mL 的抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原的抗体的免疫胶体金探针溶液。实施例3检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸的制备1) 用浓度为O.OIM， pH7.2的PBS分别将质控抗体(羊抗兔IgG)稀 释至终浓度为2.5-3.0mg/mL，将步骤一制备的抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原 的抗体稀释至终浓度为2.0-2.26mg/mL，用BioDot公司XYZ3000点样仪将 经稀释的羊抗兔IgG喷涂在300mm长，25mm宽的NC膜上形成一条对照 带，将经稀释的抗鼠疫耶尔森氏菌Fl抗原的抗体喷涂在上述NC膜的另一 区域形成测试带，室温晾干，然后将吸水纸垫贴在NC膜的远离测试带的—端o2) 将300mm长、10mm宽的玻璃纤维膜进入步骤2制备的胶体金探针 溶液，得到金标垫4， 4。C放置30min， -5(TC冷冻抽干后，将其贴在步骤l)7得到的NC膜的靠近测试带1的一端。3)在步骤2)中的金标垫的远离测试带的一端粘贴300腿长、30mm宽 的玻璃纤维膜样品垫，得到鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸。权利要求1.一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸，包括一个纤维膜，其特征在于所述的纤维膜上设置有测试带和对照带，所述的测试带中喷涂有鼠疫耶尔森氏菌F1抗原抗体溶液，所述的对照带上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌的免疫层析试纸，包括一个纤维膜，其特征在于：所述的纤维膜上设置有测试带和对照带，所述的测试带中喷涂有鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原抗体溶液，所述的对照带上喷涂有抗鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原抗体的抗抗体，在所述的纤维膜上靠近对照带的一侧设置有吸水垫，在所述的纤维膜上靠近测试带的一侧设置有金标垫，所述的金标垫为玻璃纤维膜、树脂或无纺布，所述的金标垫中设置有抗耶尔森氏菌Ｆ１抗原抗体的免疫胶体金探针溶液，所述的金标垫上设置有样品垫，所述的样品垫设置在远离测试带的金标垫的一侧。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：葛海鹏，
申请(专利权)人：上海海泰金芯生物分子检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]