本发明专利技术属于物质的医药用途技术领域，具体涉及五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用。本发明专利技术所指的五倍子制剂是以五倍子为原料，通过煎煮法从五倍子中提取有效成分并制得的五倍子水煎剂、五倍子浸膏、五倍子丸剂、五倍子针剂、五倍子粉剂、五倍子片剂或五倍子胶囊等。本发明专利技术的五倍子制剂可在体外能够显著抑制YopH的活性，可用于制备治疗和预防与蛋白质酪氨酸磷酸酶YopH相关疾病的食品、药物或它们的组合物；以及用于制备治疗和预防鼠疫的食品、药物或它们的组合物。本发明专利技术提供了一种五倍子制剂的新用途，并为中药在预防和治疗鼠疫的开发和应用方面奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于物质的医药用途
，具体涉及五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用。
技术介绍
鼠疫(Plague)是由鼠疫耶尔森菌(Yersinia Pestis)引起的一种人畜共患的烈性传染病。由于鼠疫发病急、传播快、传染性强、病死率高，而且历史上从来没有任何其他疾病像鼠疫一样给人类带来过巨大的灾难，所以目前WHO规定鼠疫为国境检疫传染病，我国《传染病防治法》也将其列为甲类一级传染病。也正因为鼠疫的发生和流行威胁着人类健康、经济发展和社会稳定，所以其致病菌鼠疫耶尔森菌也成为恐怖袭击和大规模破坏性生物武器的候选，成为破坏世界和平与稳定的潜在因素之一。除了历史上3次鼠疫大流行以外，从20世纪80年代以来，根据WHO提供的数据，鼠疫在世界范围内有死灰复燃之势， 2000 2001年间，有11个国家报告人间鼠疫。因此研究开发对鼠疫耶尔森菌专一有效的药物成为科学领域的研究热点。目前，治疗鼠疫一般采用链霉素辅以多种广谱抗生素，但是由于抗生素的滥用，已经产生了多种耐药性的鼠疫耶尔森菌，使大多数病人难以得到及时有效的治疗，最终死亡。对鼠疫耶尔森菌致病机理的研究表明，当鼠疫菌与真核细胞膜表面接触时，鼠疫菌分泌并激活鼠疫耶尔森菌外膜蛋白(Yersinia outer membrane proteins,Yops)并释放入真核细胞浆内。^ps蛋白能阻止吞噬细胞的吞噬作用并抑制宿主的免疫反应，主要包括 11种蛋白质，其中鼠疫耳口尔森菌夕卜膜蛋白H(Yersinia outer membrane protein H, YopH) 在抗巨噬细胞吞噬中发挥重要作用。^pH属于蛋白质酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase, PTP)，可以通过分泌作用转运到巨噬细胞，它能够使整个宿主细胞的蛋白质去磷酸化，使吞噬机制起始过程中的酪氨酸磷酸化信号受到阻断，除破坏细胞骨架、具有抗吞噬作用外，还能抑制ΡΙ-3通路，从而抑制T淋巴细胞增殖，是耶尔森菌逃避宿主先天免疫应答的重要因素。因此，W^pH为靶标筛选出专一有效的抑制剂，将为鼠疫的预防及治疗提供新的方法和思路。另外，由于鼠疫耶尔森菌具有非常高的传染能力和致病性，采用常规的细菌培养和抑制剂筛选方法具有很大的困难和风险。因此我们采用基因工程技术把鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)的催化结构域(Δ^ρΗ)克隆到通用的基因工程宿主菌株-大肠杆菌中，不仅避免了培养鼠疫耶尔森菌的危险性，也能够大量制备和纯化Δ^ρΗ，为高通量筛选Δ^ρΗ抑制剂提供了便利。^pH克隆表达的文献可以参见Siong-Yin Zhang, James C. Clemens, et al, Expression, Purification, and Physicochemical Characterization of a Recombinant Yersinia Protein Tyrosine Phosphatas. The Journal of Biological Chemistry,1992,25 :23759_23766。目前，鼠疫的药物治疗一般以链霉素为首选，其次是光谱抗生素，磺胺类药物作为辅助治疗和预防性投药，但是由于抗生素的副反应大，而且世界各地耐药的鼠疫耶尔森菌的陆续出现，使得鼠疫死亡率仍然很高。尽管有研究显示，国外有报道通过有机合成方法来寻找^pH的抑制剂，但是由于其取材困难、成本高、副作用大，因而难以推广。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用。五倍子(拉丁名称(ialla Chinensis)属漆树科植物。五倍子为我国传统中药，中医学中的功能是敛肺降火，涩肠止湾，敛汗止血，收湿敛疮。用于治疗肺虚久咳，肺热痰嗽， 久泻久痢，盗汗，消渴，便血痔血，外伤出血，痈肿疮毒，皮肤湿烂。其毒副作用很小，已得到实践验证。中国对中药的使用有数千年的悠久历史。但是由于中药成分复杂，并且作用机制难以阐明，限制了其应用前景。本专利技术应用基因工程技术和蛋白质的分离纯化技术，得到蛋白质酪氨酸磷酸酶^pH的催化结构域Δ^ρΗ，并以Δ^ρΗ为靶标，通过体外实验，对111 种中药水提液对^pH抑制作用进行了研究和比较，筛选出本专利技术的高效专一的抑制^pH 活性的抑制剂——五倍子制剂，为建立蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂的筛选方法以及中药在预防和治疗鼠疫的开发和应用提供了理论依据，并为最终开发治疗鼠疫的中药奠定基础。本专利技术所指的五倍子制剂是以五倍子为原料，通过煎煮法从五倍子中提取得到的水提物并制成各种剂型，在体外能够显著抑制YopH的活性。本专利技术所述的五倍子制剂是五倍子水煎剂、五倍子浸膏、五倍子丸剂、五倍子针剂、五倍子粉剂、五倍子片剂或五倍子胶囊。上述五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用，是将五倍子干燥后研磨粉碎，通过40 60目筛过滤，得到五倍子干粉。上述五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用，是将五倍子干粉与水按质量比ι 10 20浸泡20 40分钟，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮15 25分钟，滤出第一次煎煮的药液；再将药渣加入与第一次煎煮用量相同的水，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮10 20分钟，滤出第二次煎煮的药液，合并两次药液；然后将药液过滤去除残渣，离心取上清液，从而得到五倍子水煎剂。上述五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用，是将五倍子干粉与水按质量比ι 10 20浸泡20 40分钟，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮15 25分钟，滤出第一次煎煮的药液；再将药渣加入与第一次煎煮用量相同的水，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮10 20分钟，滤出第二次煎煮的药液，合并两次药液；然后将药液蒸发去除溶液中的水，从而得到粘稠的五倍子浸膏。上述五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用，是将五倍子干粉与水按质量比1 10 20浸泡20 40分钟，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮15 25分钟，滤出第一次煎煮的药液；再将药渣加入与第一次煎煮用量相同的水，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮10 20分钟，滤出第二次煎煮的药液，合并两次药液；然后将药液蒸发去除溶液中的水，得到粘稠的浸膏；将浸膏加热至80 120°C干燥除去剩余水；再将经干燥的浸膏溶于蒸馏水中，灌装消毒，得到五倍子口服液或五倍子针剂。上述五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用，是将五倍子干粉与水按质量比ι 10 20浸泡20 40分钟，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮15 25分钟，滤出第一次煎煮的药液；再将药渣加入与第一次煎煮用量相同的水，加热至沸腾后，保持沸腾状态煎煮10 20分钟，滤出第二次煎煮的药液，合并两次药液；然后将药液蒸发去除溶液中的水，得到粘稠的浸膏；将浸膏加热80 120°C干燥除去剩余水；再将经干燥的浸膏粉碎灌入胶囊，得到五倍子胶囊，或再将经干燥的浸膏中加入蜂蜜(五倍子浸膏蜂蜜的质量比为1 1 2)，制得五倍子丸剂。上述五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白H(YopH)抑制剂方面的应用，是五倍子干粉与本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．五倍子制剂在制备鼠疫耶尔森菌外膜蛋白Ｈ抑制剂方面的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马俊锋，付学奇，陈惠鹏，邢述，李婉南，康园园，尹艳春，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：82
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