鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的提取与纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的提取与纯化方法，该方法包括：将鼠疫菌体经溶菌酶处理，然后经超声破碎，再进行硫酸铵盐析，得到粗提Pla蛋白；粗提Pla蛋白采用羟基磷灰石层析柱进行层析纯化，其中在上样缓冲液中加入Ca离子，洗脱时先采用磷酸盐缓冲液梯度洗脱，以去除非目的蛋白，再用1N?NaOH洗脱目的蛋白，收集样品后用Tris-Cl缓冲液透析，去除NaOH，得到纯化Pla蛋白，并经质谱分析得以证实。本发明专利技术还提供了按照所述方法提取纯化得到的Pla蛋白制品。本发明专利技术的方法易于操作，所得蛋白丰度高、纯度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是关于一种，具体是将鼠疫菌体经溶菌酶处理先制备粗提Pla蛋白然后采用羟基磷灰石层析柱进行层析纯化制备纯化Pla蛋白的方法，本专利技术还涉及该方法提取纯化得到的Pla蛋白制品及其在杂交瘤株建立与筛选中的应用。
技术介绍
鼠疫菌纤溶酶原激活因子(Plasminogen activator,Pla)是鼠疫菌特有的pPCPl 质粒编码的细胞膜表面蛋白酶，研究表明，鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla蛋白是鼠疫菌从皮下感染扩散到循环系统的重要毒力因子(Sodeinde OA, Subrahmanyam YV, Stark K，et al. A surface protease and the invasive character of plague. Science,1992, 258(6) :1004-1007 ；Goguen JD, Hoe NP, Subrahmanyam YVBK. Proteases and bacterial virulence :a view from the trenches . Infect Agents Dis，1995，4 (1) :47-54)，在鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种鼠疫菌纤溶酶原激活因子Ｐｌａ的提取与纯化方法，该方法包括：将鼠疫菌体经溶菌酶处理，然后超声破碎，再进行硫酸铵盐析，得到粗提Ｐｌａ蛋白；粗提Ｐｌａ蛋白采用羟基磷灰石层析柱进行层析纯化，其中在上样缓冲液中加入Ｃａ离子，洗脱时先采用磷酸盐缓冲液梯度洗脱，以去除非目的蛋白，再用１Ｎ　ＮａＯＨ洗脱目的蛋白，收集样品后用Ｔｒｉｓ－Ｃｌ缓冲液透析，去除ＮａＯＨ，得到纯化Ｐｌａ蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋志忠，杜春红，石丽媛，王鹏，杨光璨，钟佑宏，董珊珊，
申请(专利权)人：云南省地方病防治所，
类型：发明
国别省市：53